检索结果-内蒙古大学图书馆

动物医学进展 2007年第12期28卷 12-18页

作者：刘大飞杨涛刘明刘春国何利昆桑学波刘大程中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 辽宁省动物疫病预防控制中心辽宁沈阳110161 黑龙江农垦总局畜牧兽医总站哈尔滨分站黑龙江哈尔滨150038 莱阳市城厢兽医站山东莱阳265200

为了进一步研究A型流感病毒核蛋白功能及在诊断中的应用,采用RT-PCR技术分别扩增H1N1、H3N2、H5N1、H9N2等4株不同亚型流感病毒的NP基因,分别将其克隆到原核表达载体pET30(a)上,在大肠埃希菌中进行诱导表达。SDS-PAGE和Western blot检... 详细信息

为了进一步研究A型流感病毒核蛋白功能及在诊断中的应用,采用RT-PCR技术分别扩增H1N1、H3N2、H5N1、H9N2等4株不同亚型流感病毒的NP基因,分别将其克隆到原核表达载体pET30(a)上,在大肠埃希菌中进行诱导表达。SDS-PAGE和Western blot检测结果表明,H1N1亚型流感病毒NP蛋白得到表达,并且能分别与H1N1和H5N1亚型流感病毒的鼠高免血清发生特异性反应,具有良好的反应活性;而H3N2、H5N1、H9N2亚型流感病毒的重组NP蛋白未获得表达。本研究结果表明,不同毒株的NP蛋白在大肠埃希菌中的表达具有一定差异性,为把NP蛋白作为诊断抗原的开发、ELISA诊断方法的建立以及蛋白功能的研究奠定了基础。

关键词：流感病毒 NP基因原核表达

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H5N1亚型AIV NS1基因在大肠杆菌中的表达

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畜牧与饲料科学 2007年第4期28卷 21-23页

作者：刘畅焦培荣刘威龙侯勇跃陈化兰内蒙古农业大学动物科学与医学学院内蒙古呼和浩特010018 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 内蒙古农牧业科学院动物医学研究所内蒙古呼和浩特010030

根据已测得的H5N1亚型禽流感病毒的NS基因序列,设计并合成一对特异性引物NS1U/NS1L,利用RT-PCR方法扩增出该毒株的NS1基因。将酶切处理后的基因片段定向克隆到原核表达载体pET-32a(+)上,通过酶切分析及序列测定,鉴定出了NS1基因片段的... 详细信息

根据已测得的H5N1亚型禽流感病毒的NS基因序列,设计并合成一对特异性引物NS1U/NS1L,利用RT-PCR方法扩增出该毒株的NS1基因。将酶切处理后的基因片段定向克隆到原核表达载体pET-32a(+)上,通过酶切分析及序列测定,鉴定出了NS1基因片段的阳性重组子。转化BL21大肠杆菌感受态细胞后,经IPTG诱导和SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定,成功表达出大小约45.0kD的NS1融合蛋白,表达产物主要存在于包涵体中。用West-ern-Blotting证实重组融合蛋白可以特异性地被标准阳性血清所识别。

关键词： H5N1亚型禽流感病毒非结构蛋白克隆表达

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H3N2亚型猪流感病毒HA基因序列测定及抗原性分析

H3N2亚型猪流感病毒HA基因序列测定及抗原性分析

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第七届全国病毒学学术研讨会暨第二届武汉现代病毒学国际研讨会

作者：刘大飞杨涛刘明刘春国何利昆桑学波刘大程中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室辽宁省动物疫病预防控制中心黑龙江农垦总局畜牧兽医总站哈尔滨分站莱阳市城厢兽医站

采用 RT-PCR 技术对4株 H3N2亚型猪流感病毒的 HA 基因进行了扩增,将获得的 PCR 产物分别与 pMD18-T 克隆载体连接,进行序列测定。测序结果显示:4 个毒株均含有完整的开放阅读框,并且均未发现核苷酸插入或缺失现象;分离毒

关键词：

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禽流感病毒一步法RT-PCR检测方法的建立

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中国兽医科学 2006年第9期36卷 701-706页

作者：包红梅王秀荣刘丽玲王昱李一经陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

为了能快速准确地对禽流感进行病原学诊断，根据流感病毒的M基因序列，在保守区内用Olig04．0软件设计了1对引物，建立了一步法RT—PCR诊断方法，其目的片段大小为229bp。通过对不同稀释倍数的H5亚型禽流感病毒尿囊液和棉拭子浸出液进... 详细信息

为了能快速准确地对禽流感进行病原学诊断，根据流感病毒的M基因序列，在保守区内用Olig04．0软件设计了1对引物，建立了一步法RT—PCR诊断方法，其目的片段大小为229bp。通过对不同稀释倍数的H5亚型禽流感病毒尿囊液和棉拭子浸出液进行检测，结果显示，病毒尿囊液的最低检出稀释度为1：10^4；阳性棉拭子的最低检出稀释度为1：2^3。用病毒分离法和一步法RT—PCR同时检测人工感染鸡不同脏器、口咽及泄殖腔棉拭子样品，二者符合率为100％，但前者的检测灵敏度比后者高10～100倍。用该方法检测H1～H15亚型禽流感病毒和鸡新城疫病毒等其他14种禽病病原，所有禽流感病毒均有229bp的目的条带出现，而其他14种禽病病原均无目的条带出现，表明该方法的特异性好。

关键词：禽流感病毒一步法RT—PCR 快速诊断

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应用碱性单细胞凝胶电泳技术(SCGE)检测镉致鸡脾淋巴细胞DNA的损伤效应

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中国兽医学报 2006年第3期26卷 307-309页

作者：李金龙熊永忠徐世文李术刘丽玲东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室及兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

应用碱性单细胞凝胶电泳技术（single cell gel electrophoresis，SCGE）]检测了0～30μmol／L CdCl2对体外培养的鸡脾脏淋巴细胞DNA的损伤效应。结果表明，镉浓度在0～30μmol／L范围内，随着镉浓度的增加，对鸡脾脏淋巴细胞DNA的损伤... 详细信息

应用碱性单细胞凝胶电泳技术（single cell gel electrophoresis，SCGE）]检测了0～30μmol／L CdCl2对体外培养的鸡脾脏淋巴细胞DNA的损伤效应。结果表明，镉浓度在0～30μmol／L范围内，随着镉浓度的增加，对鸡脾脏淋巴细胞DNA的损伤作用逐渐增强，呈现显著的剂量效应（r=0．983，P=0．004）。结果提示，镉致鸡脾脏淋巴细胞DNA损伤是镉对禽类免疫毒性的重要机制之一。

关键词：镉鸡脾脏淋巴细胞单细胞凝胶电泳 DNA损伤

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表达禽流感病毒H5HA、H7HA基因DNA疫苗的免疫原性研究

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中国预防兽医学报 2006年第1期28卷 1-5页

作者：张芳芳姜永萍刘光亮陈怀涛乔传玲陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 甘肃农业大学甘肃兰州730070

为研究双顺反子DNA疫苗对禽流感病毒(AIV)的保护作用,将H5和H7亚型AIV的HA基因克隆到同一表达载体上,构建了双顺反子HA基因表达质粒pCI-H5HA-H7HA。以此质粒肌注免疫4周龄SPF鸡,首次免疫后3周加强免疫,同时设pCI-H5HA和pCI-H7HA联合免... 详细信息

为研究双顺反子DNA疫苗对禽流感病毒(AIV)的保护作用,将H5和H7亚型AIV的HA基因克隆到同一表达载体上,构建了双顺反子HA基因表达质粒pCI-H5HA-H7HA。以此质粒肌注免疫4周龄SPF鸡,首次免疫后3周加强免疫,同时设pCI-H5HA和pCI-H7HA联合免疫组及空白对照组,每周采血用微量血凝抑制法检测HI抗体。加强免疫后3周分别以100LD50的高致病力禽流感病毒(HPAIV)A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)和A/FPV/Rostock/34(H7N1)进行致死性攻击。结果显示各免疫组均可刺激鸡体产生H5、H7特异性抗体,pCI-H5HA-H7HA诱导产生的抗体对H5N1和H7N1的攻毒保护分别为50%和10%,而pCI-H5HA和pCI-H7HA联合免疫的攻毒保护均为70%。表明双顺反子质粒可诱导鸡产生较好或一定的保护,但免疫效果不够理想,推测与DNA的摄取及其体内表达有关,可望通过调整DNA疫苗的多种因素提高免疫效果。

关键词：禽流感 H5亚型 H7亚型 HA基因 DNA疫苗

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不同亚型禽流感病毒在MDCK细胞上的生长特性

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中国兽医杂志 2006年第10期42卷 18-20页

作者：刘丽玲王秀荣陈化兰田国彬孙凯魏萍中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学黑龙江哈尔滨150030

禽流感(avian influenza,AI)是由正粘病毒科A型流感病毒(avian influenza virus,AIV)引起的禽类传染病。高致病力禽流感(HPAI)可引起禽类100%死亡,在世界范围内多次暴发,2004年年初HPAI再次在包括我国在内的一些亚洲国家暴发流行,但得... 详细信息

禽流感(avian influenza,AI)是由正粘病毒科A型流感病毒(avian influenza virus,AIV)引起的禽类传染病。高致病力禽流感(HPAI)可引起禽类100%死亡,在世界范围内多次暴发,2004年年初HPAI再次在包括我国在内的一些亚洲国家暴发流行,但得到了很好的控制,7月份在泰国和我国的安徽省HPAI又有发生;低致病力禽流感(LPAI)一般不致鸡只死亡,但可以导致鸡产蛋量下降,同样制约着养禽业的发展,所以研究快速有效的诊断方法已刻不容缓。而且许多学者对MDCK细胞用于制作人流感疫苗作了大量研究。[第一段]

关键词： MDCK细胞禽流感病毒生长特性高致病力禽流感亚型 A型流感病毒暴发流行 HPAI

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SYBR Green Ⅰ荧光RT-PCR法检测H5亚型禽流感病毒

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黑龙江畜牧兽医 2006年第11期 13-15页

作者：刘丽玲王秀荣陈化兰孙凯魏萍中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

用2株不同致病力的H5亚型禽流感病毒(AIV)感染Madin-Darby canine kidney(MDCK)细胞,收集感染后6,12,24,48,72 h的病毒,提取总RNA,利用Rotor Gene RG3 000实时定量PCR仪对H5亚型AIV的HA基因进行检测,试图建立快速检测H5亚型AIV的real-time RT-PCR方法,并用所建立的方法对来自全国各地的疑似H5亚型AIV的病料和咽喉拭子、泄殖腔拭子346份进行检测。结果表明：农业部动物流感重点开放实验室建立的HA基因的teal-time RT-PCR方法可以检测到细胞培养物中和临床样品中是否含有H5亚型AIV,与常规RT-PCR比较,该方法更加特异、准确、快速。

关键词： real—time RT—PCR H5亚型禽流感病毒 HA基因

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H5亚型禽流感DNA疫苗的免疫保护持续期研究

H5亚型禽流感DNA疫苗的免疫保护持续期研究

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中国畜牧兽医学会禽病分会第十三次学术研讨会

作者：姜永萍张平静左青山夏俊刘丽玲陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨黑龙江150001

本文对H5亚型禽流感DNA疫苗pCAGGoptiHA5免疫SPF鸡、商品蛋鸡的免疫保护持续期进行了测定.pCAGGoptiHA5以10μg剂量加强免疫3周龄SPF鸡,在免疫后4周、8周、28周以及50周的攻毒试验中,pCAGGoptiHA5免疫鸡均可100％的抵抗高致病性禽流感病... 详细信息

本文对H5亚型禽流感DNA疫苗pCAGGoptiHA5免疫SPF鸡、商品蛋鸡的免疫保护持续期进行了测定.pCAGGoptiHA5以10μg剂量加强免疫3周龄SPF鸡,在免疫后4周、8周、28周以及50周的攻毒试验中,pCAGGoptiHA5免疫鸡均可100％的抵抗高致病性禽流感病毒Gs/GD/1/96(H5N1)的致死性攻击,但在免疫后50周用DK/SHNH/16/04(H5N1)攻击时,其死亡保护率为7/***疫苗质粒pCAGGoptiHA5 50μg首次免疫5周龄商品蛋鸡,首次免疫后3周以同样剂量和途径两次免疫,在开产前(免疫后16周)进行第三次免疫,在免疫后4周、8周、18周、28周以及50周的攻毒试验中,pCAGGoptiHA5免疫蛋鸡均可100％的抵抗高致病性禽流感病毒的致死性攻击.结果表明,禽流感DNA疫苗pCAGGoptiHA5可以诱导长达一年的免疫保护,具有极高的现地应用价值和开发前景.

关键词：禽流感 H5亚型 DNA 疫苗免疫保护持续期

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猪流感抗体间接ELISA检测方法的建立

猪流感抗体间接ELISA检测方法的建立

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中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术年会

作者：陈艳辛晓光杨焕良李婷李海燕乔传玲陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

猪流感病毒(SIV)感染的鸡胚尿囊液,经差速离心后,再经蔗糖密度梯度离心,提纯SIV,纯化的SIV经NP-40处理并反复冻融,作为SI间接ELISA抗原,建立了间接ELISA检测方法.对29份HI检测SI为阴性血清的检测结果,经统计学分析,确定间接ELISA判定标... 详细信息

猪流感病毒(SIV)感染的鸡胚尿囊液,经差速离心后,再经蔗糖密度梯度离心,提纯SIV,纯化的SIV经NP-40处理并反复冻融,作为SI间接ELISA抗原,建立了间接ELISA检测方法.对29份HI检测SI为阴性血清的检测结果,经统计学分析,确定间接ELISA判定标准被检血清OD490值≥0.20判定为阳性,OD490值≤0.15判定为阴性.与HI的符合率达到92.8％.该实验方法敏感性高,为猪流感抗体提供快速、准确、简便的检测方法.

关键词：猪流感猪流感病毒间接ELISA HI检测

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