检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2022年第6期44卷 577-582页

作者：田井满李明慧白晓利李玉磊刘丽娜李雁冰陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150069

本研究团队于2019年在常规主动监测野鸟源禽流感病毒(AIV)时,于山东省荣成市分离到一株H8N2亚型AIV,为了解该株H8N2亚型AIV的生物学特性,本研究对其全基因组进行了测序及遗传演化分析。结果显示,该病毒HA和NA基因分别来自鸭源H8N4和H9N... 详细信息

本研究团队于2019年在常规主动监测野鸟源禽流感病毒(AIV)时,于山东省荣成市分离到一株H8N2亚型AIV,为了解该株H8N2亚型AIV的生物学特性,本研究对其全基因组进行了测序及遗传演化分析。结果显示,该病毒HA和NA基因分别来自鸭源H8N4和H9N2亚型AIV,其部分内部基因来源于野鸟源AIV,而且该H8N2亚型AIV的PB2基因起源于北美,表明该H8N2亚型AIV是一株跨大陆、跨物种、多亚型的重组AIV。关键氨基酸位点分析显示,其HA蛋白碱性裂解位点氨基酸序列为SIEPK/GLF,为低致病AIV分子标志;PB1蛋白出现D622G突变,NS1蛋白存在P^(42)S、I^(106)M、C^(138)F突变,提示其具有增强对哺乳动物致病性的潜在能力。采用该H8N2亚型AIV感染SPF鸡后采集各脏器及拭子样品,接种鸡胚后通过病毒滴定试验检测,结果显示,该病毒不能通过SPF鸡的喉头或泄殖腔排毒,且在感染鸡各脏器中均未检测到该病毒的有效复制。进一步采用该病毒感染BALB/c小鼠后观察临床症状,并采集各脏器后利用普通鸡胚进行脏器病毒滴定试验,结果显示,小鼠感染病毒后无明显临床症状和体质量下降。该H8N2亚型AIV虽不致死小鼠,但在其肺脏、鼻甲、肾脏以及脾脏均可有效复制。本研究对该H8N2亚型AIV的部分生物学特性进行了探究,为H8N2亚型AI的综合防控提供参考依据。

关键词：禽流感病毒 H8N2 野鸟跨大陆重组跨种感染

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一株多重配H13N8亚型禽流感病毒分子进化以及对鸡致病性研究

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中国预防兽医学报 2020年第3期42卷 217-222页

作者：李玉磊李明慧田井满刘丽娜李雁冰陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150069

2018年对宁夏回族自治区沙湖自然保护区进行禽流感病毒(AIV)流行病学调查中,本研究室分离到一株H13N8亚型AIV。为了解这株H13N8亚型AIV生物学特性,本研究对其全基因组进行了测序及遗传演化分析。结果显示,该病毒HA和NA基因分别来自H13N6... 详细信息

2018年对宁夏回族自治区沙湖自然保护区进行禽流感病毒(AIV)流行病学调查中,本研究室分离到一株H13N8亚型AIV。为了解这株H13N8亚型AIV生物学特性,本研究对其全基因组进行了测序及遗传演化分析。结果显示,该病毒HA和NA基因分别来自H13N6和H3N8亚型AIV,内部基因来源于H13N8、H6N2、H13N6、H13N2亚型AIV,是一株多亚型重组AIV,其HA蛋白碱性裂解位点氨基酸序列为ISNR↓GLF,为低致病AIV分子标志。关键氨基酸位点分析显示,其M1蛋白具有N30D和T215A的突变,NS1蛋白具有P42S、L98F和I101M的突变,表明其具有增强对哺乳动物致病性的潜在能力。SPF鸡的感染性试验显示,鸡感染该病毒后不能通过喉头或泄殖腔排毒,在感染鸡各脏器均不能有效复制,其感染鸡的潜在风险较小。本研究对禽流感的综合防控具有一定的指导意义。

关键词：禽流感病毒 H13N8亚型遗传演化分析

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一株H5亚型禽流感病毒NP蛋白两个鸡MHC分子限制性T细胞表位的鉴定

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中国预防兽医学报 2011年第6期33卷 457-460页

作者：侯艳霞郭莹莹沈楠吴春艳姜永萍王靖飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／疫病诊断中心黑龙江哈尔滨150001 国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为验证一株禽流感病毒(AIV)核蛋白(NP)中的3条T细胞表位候选肽NP89-97(PKKTGGPIY)、NP198-206(KRGINDRNF)和NP64-71(ERMVLSAF)的免疫原性,本研究构建了含有NP基因的重组质粒pCAGGS-NP,将其转染293T细胞,间接免疫荧光和western blot检测表明NP蛋白在293T细胞中获得表达。重组质粒免疫鸡后,用间接酶联免疫实验检测发现重组质粒在鸡体内能诱导产生相应的抗体。将多肽NP89-97、NP198-206、NP64-71和不相关肽N71-78(WRRQARYK)在体外刺激免疫后鸡的脾淋巴细胞,流式细胞术检测发现CD8+T淋巴细胞增殖分别为13.7%、11.9%、0.6%和0.4%;ELISA检测结果显示多肽NP89-97、NP198-206刺激后的淋巴细胞中IFN-γ的分泌量明显增加。本实验表明多肽NP89-97和NP198-206能在体外诱导活化的鸡淋巴细胞产生细胞毒性T淋巴细胞反应,为AIV NP的T细胞表位。该研究结果对研究禽类抗流感病毒的免疫机制及抗流感疫苗具有重要的意义。

关键词：禽流感病毒 NP蛋白 T细胞表位鉴定

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一株低致病力H5N3亚型禽流感病毒的全基因组序列分析及其对小鼠的感染性研究

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中国预防兽医学报 2020年第6期42卷 537-542页

作者：邢鑫崔鹏飞崔嘉琦谷文丽张元成范威峰仲启鑫邓国华陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150069

为了解H5N3亚型禽流感病毒(AIV)的生物学特性,本研究对从我国广西鸭体内分离到的一株低致病力H5N3亚型AIV DK/GX/S11453/2019(H5N3)进行了全基因组序列分析、抗原性分析、对小鼠的感染性以及受体结合特性分析。全基因组序列分析显示,该... 详细信息

为了解H5N3亚型禽流感病毒(AIV)的生物学特性,本研究对从我国广西鸭体内分离到的一株低致病力H5N3亚型AIV DK/GX/S11453/2019(H5N3)进行了全基因组序列分析、抗原性分析、对小鼠的感染性以及受体结合特性分析。全基因组序列分析显示,该病毒的基因具有明显的野鸟源性,该病毒除HA与NA来源相同外,其余片段均来源不同,具有明显的遗传多样性。HA蛋白的裂解位点仅含有一个碱性氨基酸,符合低致病力AIV的分子特征。抗原性分析结果显示该病毒分离株与近几年国内使用的各疫苗株的抗原差异性较大。小鼠感染性试验结果显示,该病毒对小鼠呈现低致病力,不引起小鼠明显的体质量下降,但可以在小鼠的肺脏和鼻甲内有效的复制。受体结合特性分析结果显示,该病毒具有同时结合α-2,3和α-2,6受体的能力,存在一定感染哺乳动物的风险。本研究通过对该H5N3亚型AIV部分生物学特性的分析,为H5N3亚型禽流感的防控提供理论依据。

关键词：禽流感病毒 H5N3 遗传演化分析感染性

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表达2.3.2.1d分支H5亚型禽流感病毒HA基因重组鸭瘟病毒的构建和评价

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中国预防兽医学报 2020年第12期42卷 1262-1267页

作者：王波赵玉博胡玉珍丁蕾蕾陈普成焦晨晨姜永萍陈化兰柳金雄中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150069

为研究H5亚型禽流感病毒(AIV)HA基因重组鸭瘟病毒(DEV)载体活疫苗,本研究利用DEV疫苗株多片段体外拯救系统,将我国H5亚型AIV 2.3.2.1d分支代表病毒CK/LN/SD007株的血凝素(HA)基因插入DEV基因组中,构建了重组DEV,对其进行PCR、间接免疫... 详细信息

为研究H5亚型禽流感病毒(AIV)HA基因重组鸭瘟病毒(DEV)载体活疫苗,本研究利用DEV疫苗株多片段体外拯救系统,将我国H5亚型AIV 2.3.2.1d分支代表病毒CK/LN/SD007株的血凝素(HA)基因插入DEV基因组中,构建了重组DEV,对其进行PCR、间接免疫荧光实验、western blot和传至15代后的遗传稳定性试验。结果显示,构建了一株表达CK/LN/SD007株HA基因的重组DEV,并且HA基因能够在重组病毒中正确表达并稳定遗传,命名为rDEV H5-12;将rDEV H5-12和亲本病毒DEV疫苗株接种鸡胚成纤维细胞(CEF)后,收集96 h内不同时间点的病毒样品,检测TCID50并绘制生长曲线。结果显示,rDEV H5-12在CEF中的生长曲线和亲本病毒DEV疫苗株无显著差异;rDEV H5-12以105 TCID50免疫SPF鸭2周后,进行DEV和AIV攻毒保护试验。结果显示,rDEV H5-12一次免疫SPF鸭后2周即能诱导对DEV强毒和AIV(CK/LN/SD007)攻击的完全保护,即免疫组SPF鸭在观察期内无排毒,无死亡,对照组SPF鸭在观察期内全部排毒,而且死亡;rDEV H5-12以105 TCID50免疫SPF鸭2次后,每周采集血清进行血凝抑制(HI)抗体效价检测。结果显示,rDEV H5-12首免SPF鸭后2周,多数鸭HI抗体转阳,加强免疫后1周,HI抗体水平达到高峰(HI抗体最高水平为25),随后HI抗体缓慢下降,至加强免疫后第7周,37.5%的鸭HI抗体仍为阳性。以上结果表明,拯救的表达H5亚型AIV HA基因的重组鸭瘟病毒(rDEV H5-12),可作为防控鸭瘟和水禽流感的二联活疫苗候选株。本研究为DE和水禽H5亚型AI的防控提供了新思路。

关键词：重组鸭瘟病毒禽流感活载体疫苗

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HA基因密码子及表达载体优化的H5亚型禽流感DNA疫苗免疫保护效果比较

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农业生物技术学报 2006年第3期14卷 301-306页

作者：姜永萍张洪波李呈军步志高邓国华于康震陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部畜牧兽医总站

为评估HA基因密码子优化及不同表达载体对H5亚型禽流感DNA疫苗免疫效果的影响,pCIHA5、pCAGGHA5、pCIoptiHA5和pCAGGoptiHA5分别以100和10μg剂量一次免疫3周龄SPF鸡,4周后分别用100LD50的高致病力禽流感病毒(HPAIV)A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[GD/1/96(H5N1)]鼻腔途径进行攻击,观察发病与死亡情况,分别于攻毒后第3、5和7无采集喉头及泄殖腔拭子进行病毒分离、滴定检测排毒情况,同时检测免疫后、攻毒前及攻毒后血清HI抗体、AGP抗体的动态变化,对4种疫苗单次免疫的免疫保护效果进行比较评估。结果表明,100μg剂量组中,pCAGGoptiHA5和pCAGGHA5均可对免疫鸡形成100%完全保护(不发病、不致死和不排毒),pCIoptHA5(75%)和pCIHA5(50%)仅可形成部分免疫保护;10μg剂量免疫组中,pCAGGoptiHA5和pCAGGHA5可对免疫鸡形成100%的保护(不发病和不致死),pCIoptiHA5可形成对免疫鸡的部分免疫保护(75%),而pCIHA5则基本不能形成免疫保护。结果表明,HA基因密码子的优化以及鸡β-actin启动子表达载体pCAGGS可显著提高H5亚型禽流感DNA疫苗诱导的保护性抗体免疫反应水平,增强免疫保护效果同时证明,通过密码子和载体的优化,可使H5亚型禽流感DNA疫苗有效免疫保护剂量降低至10μg,其推广应用已具备充分的经济可行性。pCAGGoptiHA5作为免疫效果良好、成本低廉的优化DNA疫苗,有望成为预防H5亚型高致病力禽流感的高效、安全新型基因工程疫苗。

关键词：禽流感 H5亚型 DNA疫苗免疫保护

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不同类型H5亚型禽流感疫苗的免疫保护效力比较研究

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中国农业科技导报 2014年第1期16卷 46-51页

作者：赵双成柳金雄陈普成曾显营葛金英乔传玲田国彬姜永萍陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部人兽共患病重点开放实验室哈尔滨150001

为比较以我国首个H5亚型禽流感病毒分离株A/Goose/Guangdong/1/1996(H5N1)[GS/GD/96]为基础构建的新型重组禽流感病毒灭活疫苗(H5N1亚型,Re-1株)、禽流感重组鸡痘病毒载体活疫苗(H5亚型)、禽流感、新城疫重组二联活疫苗(rLH5-1株)以及... 详细信息

为比较以我国首个H5亚型禽流感病毒分离株A/Goose/Guangdong/1/1996(H5N1)[GS/GD/96]为基础构建的新型重组禽流感病毒灭活疫苗(H5N1亚型,Re-1株)、禽流感重组鸡痘病毒载体活疫苗(H5亚型)、禽流感、新城疫重组二联活疫苗(rLH5-1株)以及禽流感DNA疫苗(H5亚型,pH5-GD)的免疫保护效力。分别将四种禽流感疫苗以2.8μg HA/0.3 mL(肌肉注射)、103PFU/100μL(刺种)、106EID50/100μL(滴鼻、点眼)、15μg/200μL(肌肉注射)等不同剂量和方式免疫3周龄SPF鸡,首次免疫3周后再加强免疫一次,加强免疫2周后用106EID50的高致病力禽流感病毒(HPAIV)GS/GD/96鼻腔途径进行攻击,观察发病与死亡情况。分别于攻毒后第3 d、第5 d、第7 d采集喉头及泄殖腔拭子进行病毒分离、滴定检测排毒情况,同时检测免疫及攻毒后血清HI抗体的动态变化。所有疫苗均可对免疫鸡形成100%完全保护(不发病、不致死、不排毒);在病毒攻击前,灭活疫苗(H5N1亚型,Re-1株)、禽流感重组鸡痘病毒载体活疫苗(H5亚型)、禽流感、新城疫重组二联活疫苗(rLH5-1株)以及禽流感DNA疫苗(H5亚型,pH5-GD)所诱导的HI抗体平均水平分别为8.75log2、6.5log2、5.13log2和7.88log2。新型的基因工程疫苗具有良好的免疫保护性,已经或将在H5亚型HPAIV的防治实践中起到有益的补充作用。

关键词：禽流感 H5N1 疫苗保护效力

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含有鸡体偏嗜性密码子的H5亚型禽流感病毒HA基因的优化构建及其DNA疫苗体外瞬时表达研究

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中国预防兽医学报 2005年第6期27卷 441-444,449页

作者：姜永萍李呈军张洪波步志高张芳芳邓国华于康震陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 农业部畜牧兽医总站北京100026

不同物种间细胞在蛋白翻译过程中具有密码子使用的偏嗜性,鸡与A型流感病毒的密码子使用频率存在着明显差异.为此,利用寡核苷酸合成、重叠延伸PCR及限制酶切法构建了密码子优化的表达A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[GD/1/96(H5N1)]HA蛋白... 详细信息

不同物种间细胞在蛋白翻译过程中具有密码子使用的偏嗜性,鸡与A型流感病毒的密码子使用频率存在着明显差异.为此,利用寡核苷酸合成、重叠延伸PCR及限制酶切法构建了密码子优化的表达A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[GD/1/96(H5N1)]HA蛋白的基因optiHA5,并将其插入CMV启动子表达载体pCI构建了H5亚型DNA疫苗质粒pCIoptiHA5,将含有GD/1/96(H5N1)野生型HA基因的质粒pCIHA5和pCIoptiHA5分别转染293T细胞,间接免疫荧光检测转染后24～48h293T细胞中瞬时表达的HA抗原蛋白;Westemblot证实上述2种表达质粒均可正确表达H5亚型HA抗原蛋白,结果表明密码子优化的基因optiHA5体外瞬时表达水平显著高于野生型HA基因.这一结果为进一步开展SPF鸡免疫保护效果的比较研究奠定了基础.

关键词： H5亚型禽流感病毒 HA基因 DNA疫苗鸡体偏嗜性密码子偏嗜性寡核苷酸

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四株鸭源H3N8亚型禽流感病毒对SPF鸡的感染性分析

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畜牧兽医学报 2016年第6期47卷 1209-1214页

作者：崔鹏飞彭志张芳关立峥肖丽李莉莎邓国华陈化兰甘肃农业大学动物医学院兰州730070 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

为评价鸭源H3N8亚型禽流感病毒对鸡的感染风险,作者选取了4株HA基因位于不同进化分支的病毒进行了SPF鸡的感染性试验。结果表明,这4株H3N8亚型禽流感病毒不需要提前适应就可以感染鸡,病毒对鸡不同脏器的组织嗜性存在较大差异。鸡感染病... 详细信息

为评价鸭源H3N8亚型禽流感病毒对鸡的感染风险,作者选取了4株HA基因位于不同进化分支的病毒进行了SPF鸡的感染性试验。结果表明,这4株H3N8亚型禽流感病毒不需要提前适应就可以感染鸡,病毒对鸡不同脏器的组织嗜性存在较大差异。鸡感染病毒后未表现出明显的临床症状,大部分感染鸡可以通过呼吸道和消化道向外排毒。此外,DK/ZJ/S4088/2013和DK/GZ/S1245/2013这两株病毒还可以由感染组的鸡传播给接触组的鸡。综上所述,本研究中的4株鸭源H3N8亚型禽流感病毒具有感染鸡并在鸡群间传播的潜在风险,在家禽的饲养和流通环节中应尽量避免鸡群与鸭群的接触。

关键词：禽流感病毒 H3N8 鸡感染性

来源：评论

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DENND1B蛋白对AP2B1蛋白细胞中表达及分布影响的研究

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中国预防兽医学报 2019年第9期41卷 940-944页

作者：李奇兵赵玉辉王广文温霞梁立滨李俊平黄山雨孙楠姜丽陈化兰李呈军中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业农村部动物流感重点开放实验室

为探究含DENN结构域蛋白1B (DENND1B)对网格蛋白依赖性内吞接头蛋白复合体(AP-2)的β亚基(AP2B1)的影响,本实验利用si RNA干扰技术以及慢病毒包装过表达系统改变DENND1B蛋白的表达水平,通过荧光定量PCR(qPCR)、western blot以及激光共... 详细信息

为探究含DENN结构域蛋白1B (DENND1B)对网格蛋白依赖性内吞接头蛋白复合体(AP-2)的β亚基(AP2B1)的影响,本实验利用si RNA干扰技术以及慢病毒包装过表达系统改变DENND1B蛋白的表达水平,通过荧光定量PCR(qPCR)、western blot以及激光共聚焦技术研究DENND1B蛋白对AP2B1蛋白的表达以及细胞内定位的影响。结果显示:DENND1B蛋白沉默后能够下调AP2B1蛋白的表达,而过表达DENND1B后能够上调AP2B1蛋白的表达,并且干扰DENND1B蛋白表达后能够显著性地改变AP2B1在细胞内的定位(p<0.05),使AP2B1蛋白由核周聚集改变为胞质弥散分布。上述结果表明DENND1B蛋白能够调控AP2B1蛋白的表达以及细胞定位。本实验为研究接头蛋白以及网格蛋白依赖性的质膜内吞途径提供了新的切入点。

关键词： DENND1B siRNA干扰过表达 AP-2 AP2B1

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