检索结果-内蒙古大学图书馆

影响禽流感病毒致病性和传播的关键氨基酸位点的研究进展

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中国预防兽医学报 2014年第2期36卷 165-168页

作者：徐晓龙包红梅陈化兰王秀荣中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

A型流感病毒根据其血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）的不同分为不同亚型，目前已鉴定出有17种HA亚型和10种NA亚型。禽流感（AvianInfluenza，AI）是由A型流感病毒引起的急性或慢性呼吸道传染病，

关键词：禽流感病毒神经氨酸酶致病性慢性呼吸道传染病 A型流感病毒酸位传播亚型

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H7N9亚型禽流感病毒反向遗传操作系统的建立及其疫苗候选株的构建

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中国预防兽医学报 2014年第5期36卷 407-409页

作者：李媛媛郭晶李旭勇王金良范俊梁立滨邓国华施建忠陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为建立H7N9亚型禽流感病毒(AIV)反向遗传操作系统,本研究以H7N9亚型(AIV)A/CK/Shanghai/S1053/2013(CK/53)株为亲本病毒,构建了该病毒株的8质粒反向遗传操作系统,并拯救出救获株rCK/53。全基因组序列测定结果表明,rCK/53与亲本病毒的核... 详细信息

为建立H7N9亚型禽流感病毒(AIV)反向遗传操作系统,本研究以H7N9亚型(AIV)A/CK/Shanghai/S1053/2013(CK/53)株为亲本病毒,构建了该病毒株的8质粒反向遗传操作系统,并拯救出救获株rCK/53。全基因组序列测定结果表明,rCK/53与亲本病毒的核苷酸序列完全一致。同时以A/PueaoRico/8/34(PR8)的内部基因为骨架,以CK/53的HA和NA的表面基因为供体,构建H7N9亚型AIV疫苗候选株CK53/PR8,疫苗株的8个基因来源与预期完全一致。对rCK/53以及疫苗候选株CK53/PR8在MDCK和A549两种细胞中进行生物学特性的比较,在A549中复制差异不显著,而在MDCK中48 h和72 h两者复制具有明显差异。rCK/53反向遗传操作系统的建立和疫苗候选株CK53/PR8的构建为进一步开展H7N9亚型AIV跨宿主传播机制、致病机理及进一步的免疫保护实验奠定了基础。

关键词： H7N9 禽流感病毒反向遗传操作系统疫苗候选株

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H7和N9亚型及A型流感病毒多重荧光定量RT-RCR检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2014年第12期36卷 939-942页

作者：徐晓龙包红梅马勇施建忠曾显营李雁冰王秀荣陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为同时检测H7亚型、N9亚型和A型流感病毒,本研究根据流感病毒H7 HA、N9 NA以及M基因序列分别合成3对引物和3种荧光素标记的探针,建立了多重Taq Man荧光定量RT-PCR检测方法。特异性试验结果显示,仅H7亚型和N9亚型病毒分别在FAM和JOE通道... 详细信息

为同时检测H7亚型、N9亚型和A型流感病毒,本研究根据流感病毒H7 HA、N9 NA以及M基因序列分别合成3对引物和3种荧光素标记的探针,建立了多重Taq Man荧光定量RT-PCR检测方法。特异性试验结果显示,仅H7亚型和N9亚型病毒分别在FAM和JOE通道监测到荧光信号,而所有A型参考流感病毒株均可获得Cy5荧光信号,此外其他相关的禽源病毒检测结果均为阴性。同时,以H7N9亚型病毒RNA为模板建立了标准曲线,检测H7 HA、N9 NA以及M基因的R2值均为0.999,最低检出量均为35.4 EID50/m L。批内和批间试验的变异系数均小于1.48%。利用该方法对1 072份临床样品(咽喉和泄殖腔拭子)检测,H7N9亚型和A型流感病毒分别检出7份和23份。该方法可以有助于H7N9亚型和A型流感病毒的快速检测及鉴定。

关键词： A型流感病毒 H7N9亚型流感病毒多重TaqMan荧光定量RT-PCR

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不同类型H5亚型禽流感疫苗的免疫保护效力比较研究

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中国农业科技导报 2014年第1期16卷 46-51页

作者：赵双成柳金雄陈普成曾显营葛金英乔传玲田国彬姜永萍陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部人兽共患病重点开放实验室哈尔滨150001

为比较以我国首个H5亚型禽流感病毒分离株A/Goose/Guangdong/1/1996(H5N1)[GS/GD/96]为基础构建的新型重组禽流感病毒灭活疫苗(H5N1亚型,Re-1株)、禽流感重组鸡痘病毒载体活疫苗(H5亚型)、禽流感、新城疫重组二联活疫苗(rLH5-1株)以及... 详细信息

为比较以我国首个H5亚型禽流感病毒分离株A/Goose/Guangdong/1/1996(H5N1)[GS/GD/96]为基础构建的新型重组禽流感病毒灭活疫苗(H5N1亚型,Re-1株)、禽流感重组鸡痘病毒载体活疫苗(H5亚型)、禽流感、新城疫重组二联活疫苗(rLH5-1株)以及禽流感DNA疫苗(H5亚型,pH5-GD)的免疫保护效力。分别将四种禽流感疫苗以2.8μg HA/0.3 mL(肌肉注射)、103PFU/100μL(刺种)、106EID50/100μL(滴鼻、点眼)、15μg/200μL(肌肉注射)等不同剂量和方式免疫3周龄SPF鸡,首次免疫3周后再加强免疫一次,加强免疫2周后用106EID50的高致病力禽流感病毒(HPAIV)GS/GD/96鼻腔途径进行攻击,观察发病与死亡情况。分别于攻毒后第3 d、第5 d、第7 d采集喉头及泄殖腔拭子进行病毒分离、滴定检测排毒情况,同时检测免疫及攻毒后血清HI抗体的动态变化。所有疫苗均可对免疫鸡形成100%完全保护(不发病、不致死、不排毒);在病毒攻击前,灭活疫苗(H5N1亚型,Re-1株)、禽流感重组鸡痘病毒载体活疫苗(H5亚型)、禽流感、新城疫重组二联活疫苗(rLH5-1株)以及禽流感DNA疫苗(H5亚型,pH5-GD)所诱导的HI抗体平均水平分别为8.75log2、6.5log2、5.13log2和7.88log2。新型的基因工程疫苗具有良好的免疫保护性,已经或将在H5亚型HPAIV的防治实践中起到有益的补充作用。

关键词：禽流感 H5N1 疫苗保护效力

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2009-2011年环洞庭湖区主要活禽批发市场低致病禽流感监测情况

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中国人兽共患病学报 2014年第10期30卷 1075-1078页

作者：黄建龙王昌建邓国华谭丹范仲鑫何世成朱春霞汪洪冰刘道新湖南省动物疫病预防控制中心长沙410014 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

目的了解环洞庭湖区主要活禽批发市场低致病性禽流感病毒的分布和流行情况,为该地区活禽批发市场低致病性禽流感的防控措施提供一些依据。方法对在活禽批发市场上采集的拭子样品先由尿囊腔接种SPF鸡胚,然后用血凝试验(HA)测定所收集的... 详细信息

目的了解环洞庭湖区主要活禽批发市场低致病性禽流感病毒的分布和流行情况,为该地区活禽批发市场低致病性禽流感的防控措施提供一些依据。方法对在活禽批发市场上采集的拭子样品先由尿囊腔接种SPF鸡胚,然后用血凝试验(HA)测定所收集的尿囊液,对HA测定有滴度的再进行血凝抑制试验(HI)和RT-PCT方法相结合鉴定病毒的亚型。结果2009-2011年冬春季节,我们在环洞庭湖地区主要活禽批发市场上共分离到627株低致病性禽流感病毒,总的分离率为22.2%,其中鸭拭子低致病性禽流感病毒的分离率最高,达到24.6%,其次是鸡拭子,达到21.5%,鹅拭子为11%。在所监测的5家活禽批发市场中共分离到H3、H4、H6、H9、H10型和H11等6种亚型的低致病性禽流感病毒,其中H9、H6和H4亚型比较高,其分离率分别可达到11%、6.3%和3.4%。结论活禽批发市场中低致病性禽流感隐性带毒的情况普遍存在,其发生禽流感疫情的威胁较大。建议整顿规范市场经营管理,特别是要建立活禽交易市场定期休市制度。

关键词：低致病性禽流感活禽批发市场监测

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甲流病毒NS基因降低H5N1禽流感病毒对小鼠的致病力的研究

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中国预防兽医学报 2014年第3期36卷 243-245页

作者：孔晖晖张乾义张莹谷春阳姜永萍关云涛陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 甘肃农业大学甘肃兰州730070

为研究NS基因对流感病毒致病力的影响,本实验以一株H5N1禽流感病毒(AIV)A/duck/Guangxi/35/2001(DK/35)为亲本病毒株,利用反向遗传技术,以我国首例甲型H1N1流感病毒分离株A/Sichuan/01/2009(SC/01)的NS基因对DK/35株进行单基因替换,拯... 详细信息

为研究NS基因对流感病毒致病力的影响,本实验以一株H5N1禽流感病毒(AIV)A/duck/Guangxi/35/2001(DK/35)为亲本病毒株,利用反向遗传技术,以我国首例甲型H1N1流感病毒分离株A/Sichuan/01/2009(SC/01)的NS基因对DK/35株进行单基因替换,拯救出一株重组H5N1 AIV。动物实验表明,SC/01株的NS基因能够使DK/35株对小鼠的致病力减弱。我们推测SC/01株的NS基因主要是通过调节宿主干扰素的产生致弱DK/35株的毒力。进一步对致弱机制进行系统研究,为生产弱毒活疫苗提供一种新的策略。

关键词： H5N1禽流感病毒重组致病性 NS基因

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H5亚型禽流感病毒LAMP快速检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2014年第2期36卷 107-110页

作者：包红梅李一经王秀荣陈化兰东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为建立快速检测H5亚型禽流感病毒(AIV)的方法,本研究根据GenBank中登录的H5亚型AIV HA基因序列,设计了一套特异识别HA基因序列中6个不同区段的环介导恒等温扩增(LAMP)引物,建立了基于LAMP技术检测H5亚型AIV的检测方法。结果表明,该方法... 详细信息

为建立快速检测H5亚型禽流感病毒(AIV)的方法,本研究根据GenBank中登录的H5亚型AIV HA基因序列,设计了一套特异识别HA基因序列中6个不同区段的环介导恒等温扩增(LAMP)引物,建立了基于LAMP技术检测H5亚型AIV的检测方法。结果表明,该方法对H5 AIV RNA的最小检测限为0.1 pfu,灵敏度高于普通一步法RT-PCR 10倍;扩增反应可以在30 min内完成;在反应体系中添加钙黄绿素(FD)荧光染料后,可以通过肉眼观察有无荧光直接判定结果。灵敏性及特异性试验表明,该方法灵敏度高、特异性好,能够作为H5亚型AIV的病原学快速检测方法。

关键词：禽流感病毒 LAMP方法 H5亚型禽流感病毒

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H5N1亚型禽流感病毒感染SPF鸡脾脏蛋白质组分析

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中国预防兽医学报 2014年第7期36卷 519-523页

作者：赵玉辉陈普成包红梅王秀荣李广兴东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为鉴定H5N1亚型禽流感病毒(AIV)感染鸡脾脏的差异表达蛋白,本研究利用双向电泳(2-DE)和质谱(MS)技术相结合的蛋白质组学方法对AIV感染的鸡脾脏蛋白进行检测。通过2-DE图谱分析,获得37个差异表达蛋白点,经MS鉴定出36个差异蛋白点;GO软件... 详细信息

为鉴定H5N1亚型禽流感病毒(AIV)感染鸡脾脏的差异表达蛋白,本研究利用双向电泳(2-DE)和质谱(MS)技术相结合的蛋白质组学方法对AIV感染的鸡脾脏蛋白进行检测。通过2-DE图谱分析,获得37个差异表达蛋白点,经MS鉴定出36个差异蛋白点;GO软件注释分析显示差异蛋白参与多种重要的生物学过程,包括代谢、合成、运输、生物调节和免疫反应等;荧光定量PCR(qPCR)验证表明感染组中组织转谷氨酰胺酶(TGM2)、结蛋白(DES)、β-2微球蛋白(B2M)基因呈现上调趋势,而P40核糖体相关蛋白(RPSA)、肌动蛋白相关蛋白(ACTR3)基因与对照组相比表达水平下调,这些基因表达趋势均与2-DE结果一致。本研究结果为进一步研究宿主与病毒相互作用和抗病毒感染的机制奠定了基础。

关键词：禽流感病毒脾脏双向凝胶电泳蛋白质组

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表达传染性法氏囊病毒VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒的构建

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中国预防兽医学报 2014年第7期36卷 515-518页

作者：李奇蒙陈普成柳金雄姜永萍王笑梅田雨胡永浩陈化兰甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为构建表达传染性法氏囊病毒(IBDV)VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒(rHVT-VP2),本研究利用RT-PCR方法扩增IBDV的VP2基因构建了重组真核表达质粒pCAGG-VP2,并采用限制性内切酶将携带Pec复合启动子和CMV增强子的VP2基因表达盒(Pec-VP2)切下,连... 详细信息

为构建表达传染性法氏囊病毒(IBDV)VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒(rHVT-VP2),本研究利用RT-PCR方法扩增IBDV的VP2基因构建了重组真核表达质粒pCAGG-VP2,并采用限制性内切酶将携带Pec复合启动子和CMV增强子的VP2基因表达盒(Pec-VP2)切下,连接于Gateway系统入门质粒pENTR构建pENTR-VP2。采用Gateway LR克隆技术将pENTR-VP2与构建的重组粘粒f5354ccdBK+共同参与基因片段互换反应,构建重组粘粒f5354-VP2。f5354-VP2与其他4个相互重叠覆盖HVT全基因组的粘粒经酶切线性化后共同转染CEF细胞,并拯救出重组病毒rHVT-VP2。将重组病毒在CEF细胞中连续传代20次,每隔5代采用PCR、western blot和间接免疫荧光进行检测,结果表明VP2蛋白均得到稳定地表达。rHVT-VP2的构建为进一步研究其免疫学特性奠定了基础。

关键词：传染性法氏囊病毒火鸡疱疹病毒 VP2

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2012年-2013年我国养猪重点省份猪流感的血清学调查

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中国预防兽医学报 2014年第6期36卷 431-434页

作者：刘丽萍乔传玲杨焕良隋金钰王昌建陈艳邱立新唐小明何世成陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 湖南省动物疫病预防控制中心湖南长沙410002

为进一步了解我国猪流感病毒（SIV）的流行现状，本研究于2012年10月至2013年12月从全国养猪重点省份的养殖场、屠宰场采集猪血清样品共计5 856份，以类禽型H1N1（EA H1N1）、2009甲型H1N1（pdm/09 H1N1）和H3N2亚型SIV 抗原作为标准抗... 详细信息

为进一步了解我国猪流感病毒（SIV）的流行现状，本研究于2012年10月至2013年12月从全国养猪重点省份的养殖场、屠宰场采集猪血清样品共计5 856份，以类禽型H1N1（EA H1N1）、2009甲型H1N1（pdm/09 H1N1）和H3N2亚型SIV 抗原作为标准抗原，采用血凝抑制（HI）试验方法进行抗体检测。结果显示，我国猪群中SIV抗体阳性率分别为55.52 %、13.92 %和2.00 %，其中EA H1N1 SIV抗体平均阳性率高于其它亚型。2013年1月和3月份，又集中在广东和湖南两个省份的部分养殖场和屠宰场采集猪血清样品共计9 910份，采用ELISA进行抗体检测。结果共检出阳性血清3 518份，平均阳性率分别为36.14 %和34.89 %。本实验结果表明2012年～2013年我国猪群中SIV感染比较普遍。

关键词：猪流感血清学抗体血凝抑制 ELISA

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