检索结果-内蒙古大学图书馆

第三届(2012)中国黄羽肉鸡行业发展大会

作者：曾显营 ZENG Xianying TIAN Guobin 田国彬 FENG Huapeng 冯华朋 DENG Guohua 邓国华 SHI Jianzhong 施建忠 ZHANG Pantao 张盼涛 SU Wen 苏文 YANG Jing 杨婧 LIU Jingli 刘景利徐佳 XU Jia CHEN Hualan 陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室国家禽流感参考实验室哈尔滨 150001 State Key Lab of Veterinary Biotechnology/Animal Influenza Laboratory of the Ministry of Agriculture Harbin Weike Biotechnologv Development Company Harbin 150001 哈尔滨维科生物技术开发公司哈尔滨 150001

本研究对经反向遗传方法构建的重组禽流感H5N1亚型变灭活疫苗种毒Re—6株的生物学特性及免疫效力进行研究.将Re—6株接种SPF鸡胚后37℃培养72h,鸡胚存活,且无病变,HA滴度达210;以0.1ml(106.0EID50/0.1ml)的剂量鼻腔感染4周龄SPF鸡10天... 详细信息

本研究对经反向遗传方法构建的重组禽流感H5N1亚型变灭活疫苗种毒Re—6株的生物学特性及免疫效力进行研究.将Re—6株接种SPF鸡胚后37℃培养72h,鸡胚存活,且无病变,HA滴度达210;以0.1ml(106.0EID50/0.1ml)的剂量鼻腔感染4周龄SPF鸡10天后血清HI抗体转阳,无任何症状,也不排毒;SPF鸡静脉致病指数(IVPI)为0;以Re—6重组株为种毒制备灭活疫苗,免疫SPF鸡和SPF鸭后,3周时平均HI抗体效价达8.310g2和8.4 log2;免疫鸡和免疫鸭对亲本强毒株GD1322攻击提供完全保护.以上结果表明禽流感灭活疫苗种毒Re—6株对SPF鸡胚和SPF鸡无致病性、适合鸡胚增殖、抗原针对性强,且该毒株制备的灭活疫苗具有良好的免疫效力,是理想的疫苗种毒株.

关键词：家禽亚型禽流感灭活疫苗生物学特性免疫原性

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AA肉鸡免疫禽流感油乳剂灭活疫苗细胞免疫应答的变化

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中国预防兽医学报 2011年第2期33卷 141-145页

作者：王彦妮曾显营田国彬苏文陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物国家重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为了解肉鸡生长期内免疫前后的细胞免疫反应,本实验采用CD3/CD4/CD8三色流式细胞术、MTT法和Griess法依次检测了AA肉鸡免疫禽流感灭活疫苗和非免疫状态下外周血、胸腺和脾脏中T淋巴细胞及其亚群的相对含量、外周血中T淋巴细胞对PHA-P的... 详细信息

为了解肉鸡生长期内免疫前后的细胞免疫反应,本实验采用CD3/CD4/CD8三色流式细胞术、MTT法和Griess法依次检测了AA肉鸡免疫禽流感灭活疫苗和非免疫状态下外周血、胸腺和脾脏中T淋巴细胞及其亚群的相对含量、外周血中T淋巴细胞对PHA-P的增殖反应能力和诱导巨噬细胞NO分泌量的变化。结果表明,非免疫状态下,AA肉鸡外周血CD4+、CD8+、CD3+T淋巴细胞相对百分含量在7日龄时均为最低,脾脏中CD4+T淋巴细胞相对百分含量在整个试验期一直呈下降趋势,免疫后外周血、脾脏和胸腺中CD4+、CD8+、CD3+T淋巴细胞相对百分含量均明显高于非免疫组,且脾脏CD4+T淋巴细胞呈阶段性上升状态;各时期淋巴细胞刺激指数(SI)值和巨噬细胞NO分泌量检测结果表明,免疫组均高于同期对照组(p<0.05)。研究结果还表明:肉鸡在7日龄时细胞免疫水平最低,灭活疫苗可以激发肉鸡产生较强的细胞免疫应答。

关键词：灭活疫苗 T淋巴细胞亚群 AA肉鸡 MTT法 Griess法

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抗猪甲型H1N1流感病毒血凝素蛋白单克隆抗体的制备与特性分析

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畜牧兽医学报 2011年第5期42卷 711-716页

作者：张健陈艳乔传玲杨焕良唐续辛晓光陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室哈尔滨150001

本研究旨在制备猪甲型H1N1流感病毒血凝素(HA)蛋白的特异性单克隆抗体。采用RT-PCR方法扩增猪甲型H1N1流感病毒的HA基因,将其克隆至真核表达载体pCAGGS上,获得重组质粒pCAGGS-HA,转染293T细胞,通过间接免疫荧光(IFA)检测表明HA蛋白在293... 详细信息

本研究旨在制备猪甲型H1N1流感病毒血凝素(HA)蛋白的特异性单克隆抗体。采用RT-PCR方法扩增猪甲型H1N1流感病毒的HA基因,将其克隆至真核表达载体pCAGGS上,获得重组质粒pCAGGS-HA,转染293T细胞,通过间接免疫荧光(IFA)检测表明HA蛋白在293T细胞中得到表达。将pCAGGS-HA以100μg.只-1剂量免疫5周龄BALB/c小鼠,获得4株稳定分泌抗HA蛋白单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞株,分别命名为11G7、3C10、3G3和2B11。其中11G7诱导小鼠产生的腹水HI效价为14log2,中和效价为1∶8 192,HI试验结果进一步表明11G7只与甲型H1N1流感病毒发生反应,而不与其他H1N1、H1N2、H3N2、H5N1及H9N2亚型流感病毒反应。该MAb的制备将为建立猪甲型H1N1流感病毒与传统亚型SIV的鉴别诊断方法奠定基础。

关键词：甲型H1N1猪流感病毒 HA MAb

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流感病毒抗原表位的研究进展

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中国畜牧兽医 2011年第6期38卷 193-196页

作者：孙晓东熊永忠陈化兰王秀荣中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物国家重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

流感病毒抗原表位的研究,不仅是对流感病毒致病机理和机体免疫系统反应的探究,还能很好地指导对流感的防治。作者从抗原表位的特点,流感病毒抗原表位的特点、研究进展及流感病毒抗原表位疫苗的应用几个方面进行了综述。

关键词：流感病毒抗原表位表位疫苗

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表达猪白细胞介素2重组腺病毒的构建

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中国预防兽医学报 2011年第4期33卷 313-315页

作者：张健陈艳乔传玲杨焕良唐续辛晓光陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为构建表达猪白细胞介素2(IL-2)的复制缺陷型重组腺病毒,本研究提取经刀豆球蛋白A(Con A)刺激体外培养的长白猪外周血淋巴细胞总RNA,利用RT-PCR扩增猪IL-2基因,并克隆于质粒pIRES2-EGFP中,将含有IL-2及EGFP的基因片段亚克隆到腺病毒的... 详细信息

为构建表达猪白细胞介素2(IL-2)的复制缺陷型重组腺病毒,本研究提取经刀豆球蛋白A(Con A)刺激体外培养的长白猪外周血淋巴细胞总RNA,利用RT-PCR扩增猪IL-2基因,并克隆于质粒pIRES2-EGFP中,将含有IL-2及EGFP的基因片段亚克隆到腺病毒的穿梭质粒pDC315中,构建重组腺病毒穿梭质粒pDC315-IL-2-EGFP。利用脂质体转染方法将pDC315-IL-2-EGFP和腺病毒骨架质粒pBHGloxΔE1,E3Cre共转染HEK293细胞。根据腺病毒感染后形成的典型细胞病变及EGFP的荧光信号筛选重组腺病毒rAd-IL-2-EGFP。经western blot鉴定,结果表明获得了一株能够表达猪IL-2蛋白的重组腺病毒rAd-IL-2-EGFP。本研究为进一步研究猪IL-2在疫苗免疫中的增强作用及研制新型免疫增强剂奠定了基础。

关键词： IL-2 重组腺病毒基因表达

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甲型H1N1流感病毒株的分离鉴定以及PR8株的相关基因对重组病毒增殖能力的影响

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中国预防兽医学报 2011年第7期33卷 517-520页

作者：李建辉刘春国张云刘明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为分离流感病毒,本研究将疑似甲型流感患者的咽喉拭子接种SPF鸡胚尿囊腔,经检测收获的鸡胚尿囊液具有血凝活性。采用流感病毒通用引物进行PCR扩增出8个基因节段,经测序与GenBank中登录的序列比对后确定该病毒株为2009年爆发的甲型H1N1... 详细信息

为分离流感病毒,本研究将疑似甲型流感患者的咽喉拭子接种SPF鸡胚尿囊腔,经检测收获的鸡胚尿囊液具有血凝活性。采用流感病毒通用引物进行PCR扩增出8个基因节段,经测序与GenBank中登录的序列比对后确定该病毒株为2009年爆发的甲型H1N1流感病毒,并命名为A/Harbin/LM/2009(H1N1),简称LM株。由于LM分离株在鸡胚中增殖能力比较弱,为提高其在鸡胚中的增殖能力,我们利用反向遗传技术将LM株的HA和NA基因与高增殖特性的人流感病毒细胞高产株PR8的另外6个节段进行"6+2"重配,获得拯救病毒,但该重配病毒血凝价并未显著提高。为进一步鉴定影响病毒增殖能力的基因,本研究将LM株所有节段以"7+1"的方式逐一与PR8的7个片段搭配构成完整的流感病毒基因组,分别得到8个重配病毒。结果显示分离株的PB1、PA、HA基因显著降低了重配病毒在鸡胚细胞中的增殖能力。

关键词：甲型H1N1流感病毒反向遗传重配增殖能力

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H5N1亚型禽流感病毒血凝素蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

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中国预防兽医学报 2011年第6期33卷 476-478页

作者：崔佳莹李印于扬张文亮邓国华陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为制备抗H5N1禽流感病毒(AIV)的单克隆抗体(MAb),本研究以灭活的H5N1亚型A/Chicken/Guangdong/S2261/2009(H5N1GD261)株免疫4周龄～6周龄BALB/c雌鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,经间接ELISA及HI筛选获得了3株能稳定分泌抗HA的MAb杂交瘤细胞,分别命名为1A4、2F5和3D3。MAb亚类鉴定表明,2F5为IgM类,其它为IgG2a亚类,轻链均为κ链。经血凝抑制检测,3株MAb均能与H5亚型的AIV结合,并具有较好的型广谱性。

关键词：禽流感病毒血凝素单克隆抗体血凝抑制

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H5N1亚型禽流感病毒感染小鼠肺组织蛋白质组分析

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中国预防兽医学报 2011年第4期33卷 261-264页

作者：梁立滨赵东明李俊平李雁冰施建忠姜永萍陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为鉴定禽流感病毒(AIV)感染状态下的差异表达蛋白,本研究将H5N1亚型AIV感染组与对照组小鼠肺组织蛋白样品分别进行双向电泳分离,并采用ImageMaster 2D Platinum 6.0软件进行分析。在AIV感染72h后,共有9个表达差异显著的蛋白点(ratio>... 详细信息

为鉴定禽流感病毒(AIV)感染状态下的差异表达蛋白,本研究将H5N1亚型AIV感染组与对照组小鼠肺组织蛋白样品分别进行双向电泳分离,并采用ImageMaster 2D Platinum 6.0软件进行分析。在AIV感染72h后,共有9个表达差异显著的蛋白点(ratio>2,p<0.05),而且该蛋白在感染组均呈上调表达。将差异蛋白进行串联质谱分析,并对其中7个蛋白进行鉴定,包括:interferon-induced protein with tetratricopeptide repeats 3(IFIT-3)、ATP依赖的干扰素反应蛋白1(ADIR1)、γ干扰素诱导的p47鸟苷三磷酸酶(IRG)、T细胞受体a TA27、气味受体S86、胞苷单磷酸激酶2(Cmpk2)和肌球蛋白。将前3个蛋白基因采用荧光定量PCR方法进行mRNA水平的验证,所获得的结果与双向电泳结果一致。本研究为在蛋白质组水平进一步分析H5N1亚型AIV与宿主相互作用奠定了基础。

关键词： H5N1亚型禽流感病毒双向凝胶电泳蛋白质组病原宿主相互作用

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一株H5亚型禽流感病毒NP蛋白两个鸡MHC分子限制性T细胞表位的鉴定

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中国预防兽医学报 2011年第6期33卷 457-460页

作者：侯艳霞郭莹莹沈楠吴春艳姜永萍王靖飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／疫病诊断中心黑龙江哈尔滨150001 国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为验证一株禽流感病毒(AIV)核蛋白(NP)中的3条T细胞表位候选肽NP89-97(PKKTGGPIY)、NP198-206(KRGINDRNF)和NP64-71(ERMVLSAF)的免疫原性,本研究构建了含有NP基因的重组质粒pCAGGS-NP,将其转染293T细胞,间接免疫荧光和western blot检测表明NP蛋白在293T细胞中获得表达。重组质粒免疫鸡后,用间接酶联免疫实验检测发现重组质粒在鸡体内能诱导产生相应的抗体。将多肽NP89-97、NP198-206、NP64-71和不相关肽N71-78(WRRQARYK)在体外刺激免疫后鸡的脾淋巴细胞,流式细胞术检测发现CD8+T淋巴细胞增殖分别为13.7%、11.9%、0.6%和0.4%;ELISA检测结果显示多肽NP89-97、NP198-206刺激后的淋巴细胞中IFN-γ的分泌量明显增加。本实验表明多肽NP89-97和NP198-206能在体外诱导活化的鸡淋巴细胞产生细胞毒性T淋巴细胞反应,为AIV NP的T细胞表位。该研究结果对研究禽类抗流感病毒的免疫机制及抗流感疫苗具有重要的意义。

关键词：禽流感病毒 NP蛋白 T细胞表位鉴定

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糖蛋白G基因在基因组P-M位的插入重组表达对狂犬病毒Flury LEP致病力的影响

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微生物学报 2011年第8期51卷 1098-1105页

作者：翟洪月陶丽红葛金英王喜军冯娜帅磊马良步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室哈尔滨150001 军事医学科学院军事兽医研究所长春130122 东北农业大学动物医学学院哈尔滨150030

【目的】研究狂犬病病毒Flury鸡胚低代毒株(Flury LEP)在基因组P-M位增加糖蛋白基因(G基因)的重组表达对病毒致病力的影响。【方法】利用反向遗传操作技术,构建了P、M基因之间额外插入G基因的重组狂犬病病毒Flury LEP株(rLEP-PGM),并对... 详细信息

【目的】研究狂犬病病毒Flury鸡胚低代毒株(Flury LEP)在基因组P-M位增加糖蛋白基因(G基因)的重组表达对病毒致病力的影响。【方法】利用反向遗传操作技术,构建了P、M基因之间额外插入G基因的重组狂犬病病毒Flury LEP株(rLEP-PGM),并对重组病毒的生物学特性及对小鼠的致病性进行了初步研究。【结果】亲本株和重组病毒具有相似的生长特性,LEP和rLEP-PGM在BHK-21细胞的生长滴度分别为4×106 FFU/mL和2.5×106 FFU/mL,在小鼠神经母细胞(NA)的生长滴度分别为4×107 FFU/mL和2.5×107 FFU/mL;嗜神经指数均为1;Western blot显示,rLEP-PGM在感染细胞的G蛋白表达量比LEP显著提高;小鼠感染试验显示,rLEP-PGM与LEP脑内注射小鼠的LD50分别为3 FFU和1 FFU,肌肉注射途径的LD50分别为4×104 FFU和3.2×105 FFU。【结论】P、M基因之间插入一个额外的G基因能够提高G蛋白的表达水平,同时增强重组病毒外周侵入中枢神经系统的能力。

关键词：反向遗传技术狂犬病毒重组表达糖蛋白致病性

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