检索结果-内蒙古大学图书馆

中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会

作者：李印邓国华崔佳莹于洋丁晴微陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室华南农业大学湖南农业大学

根据GenBank中已发表的传染性喉气管炎病毒全基因组序列(EU 675324),用DNAStar软件分析gD蛋白的抗原性,选择抗原性强的aa 256～aa 405片段设计引物,以传染性喉气管炎病毒WG株基因组为模板,PCR扩增,克隆并连接到原核表达载体pET-32a中,转... 详细信息

根据GenBank中已发表的传染性喉气管炎病毒全基因组序列(EU 675324),用DNAStar软件分析gD蛋白的抗原性,选择抗原性强的aa 256～aa 405片段设计引物,以传染性喉气管炎病毒WG株基因组为模板,PCR扩增,克隆并连接到原核表达载体pET-32a中,转化BL21(DE3)菌株。经IPTG诱导后,获得大小为43.5 ku的重组蛋白,命名为r-gd;western blot分析表明r-gd具有较强的抗原性。为传染性喉气管炎病毒诊断方法的建立及单克隆抗体的的制备奠定了基础。

关键词：传染性喉气管炎病毒糖蛋白D(gD) 序列分析 Western blot

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禽流感病毒RNA聚合酶串联亲和纯化方法的建立

禽流感病毒RNA聚合酶串联亲和纯化方法的建立

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会

作者：李印邓国华崔佳莹于洋丁晴微陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室华南农业大学湖南农业大学

本实验利用TRIzol Ls Reagent从感染鸡胚尿囊液中提取流感病毒核酸,经过反转录PCR和常规PCR方法扩增出禽流感毒株A/Duck/Guangxi/35/01(H5N1)的PB1蛋白、PB2蛋白和PA蛋白的cDNA。将PB2扩增基因连接在pCDNATAP载体上,PB1和PA扩增基因连接... 详细信息

本实验利用TRIzol Ls Reagent从感染鸡胚尿囊液中提取流感病毒核酸,经过反转录PCR和常规PCR方法扩增出禽流感毒株A/Duck/Guangxi/35/01(H5N1)的PB1蛋白、PB2蛋白和PA蛋白的cDNA。将PB2扩增基因连接在pCDNATAP载体上,PB1和PA扩增基因连接至pCNDNA3A载体上构建了pCDNA-35PB2TAP、pCDNA-35PB1和pCDNA-35PA质粒。利用构建的真核表达质粒共转染293T细胞,经过串联亲和纯化方法得到了流感病毒依赖RNA的RNA聚合酶复合体(RdRp)。利用RNA体外合成实验证明纯化得到的RdRp具有正常的生物学活性。

关键词： H5亚型禽流感 RNA聚合酶复合体串联亲和纯化

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H5N2亚型禽流感病毒的基因特征及遗传进化分析

H5N2亚型禽流感病毒的基因特征及遗传进化分析

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会

作者：段振华张翼施建忠刘丽玲田国彬曾显营张书霞陆承平华育平陈化兰李雁冰南京农业大学动物医学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室/国家禽流感参考实验室东北林业大学野生动物资源学院

为了解我国野生水禽携带的H5N2亚型禽流感病毒(AIV)的特征。本研究对2005-2006年江西省和黑龙江省正常野鸭体内分离到的11株H5N2亚型AIV进行全基因测定和遗传演化分析。结果表明:2005年分离自江西省的10株H5N2亚型禽流感病毒的HA基因裂... 详细信息

为了解我国野生水禽携带的H5N2亚型禽流感病毒(AIV)的特征。本研究对2005-2006年江西省和黑龙江省正常野鸭体内分离到的11株H5N2亚型AIV进行全基因测定和遗传演化分析。结果表明:2005年分离自江西省的10株H5N2亚型禽流感病毒的HA基因裂解位点均具有4～6个连续的碱性氨基酸,同属于高致病力毒株;2006年分离自黑龙江省的1株H5N2亚型禽流感病毒的HA基因裂解位点为R-E-T-R,属于典型的H5亚型低致病力毒株。遗传进化上,11株病毒同属于欧亚种系,HA、NA、PB1、PA和NS基因进化关系较近,但分别以不同的毒株为祖先进化而来;PB2、NP和M基因在各自的进化关系上距离较远,核苷酸同源率差异较大。并且11株病毒是以多基因型形式存在。

关键词：禽流感病毒 H5N2 遗传分析

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5种脑炎类人兽共患病病毒多重PCR检测方法的建立

5种脑炎类人兽共患病病毒多重PCR检测方法的建立

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会

作者：蔡绪禹康晓平刘洪李裕昌孙恩成王凌凤杨涛刘霓红步志高李文京杨银辉吴东来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物/生物安全国家重点实验室中国动物疫病预防控制中心

本研究建立了能同时检测5种人兽共患脑炎类病毒的多重PCR方法,包括流行性乙型脑炎病毒(JEV)、森林脑炎病毒(TBEV)、东方马脑炎病毒(EEEV)、西方马脑炎病毒(WEEV)和基孔肯雅病毒(CHIKV)。根据GenBank登录的病毒基因组序列设计PCR特异引物... 详细信息

本研究建立了能同时检测5种人兽共患脑炎类病毒的多重PCR方法,包括流行性乙型脑炎病毒(JEV)、森林脑炎病毒(TBEV)、东方马脑炎病毒(EEEV)、西方马脑炎病毒(WEEV)和基孔肯雅病毒(CHIKV)。根据GenBank登录的病毒基因组序列设计PCR特异引物,通过优化引物组合及PCR反应条件,成功建立了针对

关键词：人兽共患病 PCR 检测方法

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核蛋白NP对H5N1亚型禽流感病毒样颗粒疫苗免疫效果的影响

核蛋白NP对H5N1亚型禽流感病毒样颗粒疫苗免疫效果的影响

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会

作者：薛春宜陈娴娴马军陈峰田国斌毕英佐陈化兰曹永长中山大学生命科学学院有害生物控制与资源利用国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室华南农业大学动物科学学院

禽流感(AI)是由A型流感病毒(AIV)引起的一种禽鸟的高度接触性传染病。病毒样颗粒(VLPs)具有病毒的外壳,但其内部不含遗传物质,从而不具传染性,因此可发展成为新型的疫苗。本研究利用重组杆状病毒表达了AIV的结构蛋白M1、HA和NA,将自动... 详细信息

禽流感(AI)是由A型流感病毒(AIV)引起的一种禽鸟的高度接触性传染病。病毒样颗粒(VLPs)具有病毒的外壳,但其内部不含遗传物质,从而不具传染性,因此可发展成为新型的疫苗。本研究利用重组杆状病毒表达了AIV的结构蛋白M1、HA和NA,将自动组装形成的VLP3免疫SPF鸡,发现可

关键词：病毒样颗粒疫苗免疫效果 VLP 禽流感核蛋白

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H3N2亚型猪流感病毒的拯救及HA与NA基因的替换

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微生物学报 2009年第6期49卷 813-819页

作者：杜金玲刘明刘春国杨涛李洪涛中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室哈尔滨150001

【目的】为研究流感病毒突破种间屏障分子机制,筛选流感基因工程疫苗株。【方法】本试验以猪流感病毒A/Swine/Henan/S4/01(H3N2)为亲本株,利用反向遗传学操作技术,采用RT-PCR技术对该病毒的8个基因片段分段进行扩增,通过与双向转录载体p... 详细信息

【目的】为研究流感病毒突破种间屏障分子机制,筛选流感基因工程疫苗株。【方法】本试验以猪流感病毒A/Swine/Henan/S4/01(H3N2)为亲本株,利用反向遗传学操作技术,采用RT-PCR技术对该病毒的8个基因片段分段进行扩增,通过与双向转录载体pHW2000连接,重组质粒转染293T和MDCK共培养细胞,拯救出全部基因均来自于亲本株的猪流感病毒rgH3N2,并分别以人流感病毒A/PR/8/34(H1N1)、禽流感病毒A/Duck/Nanchang/4-165/2000(H4N6)、马流感病毒A/Equine/Fuyun/2008/(H3N8)的HA和NA基因替换A/Swine/Henan/S4/01的相应基因。【结果】生物学试验结果表明rgH3N2在鸡胚半数感染量、组织培养半数感染量、稳定性试验等方面都与亲本株保持一致。rgH3N2经鸡胚多次传代后血凝价最高可达到1∶256,接种MDCK细胞60h后,血凝价可以达到1∶64。基因替换后成功拯救出的重组病毒rgH1N1、rgH4N6和rgH3N8在鸡胚和细胞上均具有较高的增殖能力。【结论】病毒的成功拯救为流感病毒突破种间屏障分子机制,HA、NA基因在流感病毒跨种属传播中所扮演角色的研究和流感基因工程疫苗株的筛选奠定了基础。

关键词：猪流感反向遗传 RT-PCR H3N2亚型病毒拯救

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H7亚型禽流感病毒一步法RT-PCR检测方法的建立

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生物工程学报 2009年第11期25卷 1658-1663页

作者：包红梅王秀荣陶启蒙蔡东东王馥梅陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室侬业部动物流感重点开放实验室哈尔滨150001

通过分析流感数据库45个H7亚型禽流感病毒的HA序列,在保守区内设计并合成引物,建立了一步法RT-PCR检测方法,扩增片段大小为501bp。通过对H7亚型禽流感病毒尿囊液和棉拭子浸出液不同滴度检测,证实病毒尿囊液最低检出量为105.5EID50/mL;... 详细信息

通过分析流感数据库45个H7亚型禽流感病毒的HA序列,在保守区内设计并合成引物,建立了一步法RT-PCR检测方法,扩增片段大小为501bp。通过对H7亚型禽流感病毒尿囊液和棉拭子浸出液不同滴度检测,证实病毒尿囊液最低检出量为105.5EID50/mL;阳性棉拭子最低检出量为103EID50/mL。用该方法检测H1～H15亚型禽流感病毒和鸡新城疫病毒等其他14种禽病病原进行检测,仅有H7亚型AIV有特异性目的条带,与其他均无交叉反应。从脏器及咽喉、泄殖腔棉拭子样品的病毒分离和RT-PCR方法比较,表明在10-1的样品浓度下,两者可以达到相同的检出量。表明该一步法RT-PCR方法具有特异性强、敏感性高和准确率高的特点。

关键词：禽流感病毒反转录聚合酶链反应 H7N1 亚型鉴别

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4种禽病毒抗体可视化蛋白芯片的制备及应用

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中国农业科学 2009年第4期42卷 1413-1420页

作者：石霖王秀荣杨忠苹陶启蒙蔡冬冬武嘉男王馥梅田国彬陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物国家重点开放实验室东北农业大学动物医学学院

【目的】研制可同时鉴别检测AI、ND、IB、IBD等4种禽病血清抗体的可视化蛋白芯片。【方法】用超速离心法和蔗糖密度梯度法分别纯化了4种病毒蛋白抗原,调整到合适浓度后点于醛基修饰的片基上,制备蛋白芯片;分别用4种禽病阳性血清杂交,再... 详细信息

【目的】研制可同时鉴别检测AI、ND、IB、IBD等4种禽病血清抗体的可视化蛋白芯片。【方法】用超速离心法和蔗糖密度梯度法分别纯化了4种病毒蛋白抗原,调整到合适浓度后点于醛基修饰的片基上,制备蛋白芯片;分别用4种禽病阳性血清杂交,再与金标二抗杂交,银染显色后读取结果,建立4种禽病的可视化蛋白芯片工作平台;进一步对此芯片的特异性以及灰度值与抗体浓度的相关性进行了研究;最后对18个现地血清样品进行了初步应用检测。【结果】结果显示经过条件优化后,芯片检测探针可特异性的相应的抗体进行杂交,呈现较强的杂交信号,且无交叉杂交。信号灰度值在抗体浓度为50～300μg·ml-1范围内成线性关系。用芯片和其它传统抗体检测方法同时检测18份现地样品,结果发现可视化蛋白芯片具有很好的特异性,并且灵敏性明显高于传统检测手段。【结论】研究表明该方法可用于同步鉴别4种禽病抗体,是一种有效的抗体检测新方法。

关键词：可视化蛋白芯片禽病鉴别

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蛋白质组学主要实验技术的研究进展

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中国人兽共患病学报 2009年第7期25卷 680-683页

作者：蔡冬冬王秀荣石霖武嘉男陶乐蒙王馥梅包红梅陈化兰东北农业大学动物医学学院哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物国家重点开放实验室哈尔滨150001

人类基因组计划(human genomic project,HGP)的完成,极大推动了后基因组时代的到来。基因数量有限性和结构相对稳定性与生命现象复杂性和多变性之间的巨大反差,使人们的目光逐渐从基因组学转向蛋白质组学,作为生命活动执行者,基因组编... 详细信息

人类基因组计划(human genomic project,HGP)的完成,极大推动了后基因组时代的到来。基因数量有限性和结构相对稳定性与生命现象复杂性和多变性之间的巨大反差,使人们的目光逐渐从基因组学转向蛋白质组学,作为生命活动执行者,基因组编码的所有蛋白质随之成为研究热点。[第一段]

关键词：蛋白质组学实验技术人类基因组计划后基因组时代相对稳定性基因组编码生命现象基因数量

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H3N2亚型猪流感病毒实时荧光定量PCR快速检测方法的建立

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中国兽医科学 2009年第10期39卷 894-899页

作者：陈艳张春明乔传玲杨焕良张飞吴运谱辛晓光陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

根据H3N2亚型猪流感病毒(SIV)血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)基因保守序列,分别设计并合成了特异性引物和TaqMan MGB探针,利用实时荧光定量PCR技术检测SIV。使用含有选定检测序列的重组质粒pMD18-H3HA、pMD18-... 详细信息

根据H3N2亚型猪流感病毒(SIV)血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)基因保守序列,分别设计并合成了特异性引物和TaqMan MGB探针,利用实时荧光定量PCR技术检测SIV。使用含有选定检测序列的重组质粒pMD18-H3HA、pMD18-N2NA标准品绘制标准曲线,其相关系数分别为0.99015(H3HA)和0.99947(N2NA)。检测结果显示,该方法的敏感性可达100 copies/μL,除H3N2亚型SIV外,对H1亚型、H9亚型SIV以及猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪瘟病毒、猪生殖与呼吸综合征病毒和猪2型圆环病毒的检测均为阴性,应用该方法对实验室感染样品进行检测,其结果与病毒分离结果的符合率为95.83%。表明,该方法特异性强、重复性好,有望成为H3N2亚型SIV的一种特异、敏感、快速的定量检测方法。

关键词：猪流感病毒 H3N2亚型 Taq Man MGB探针实时荧光定量PCR

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