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H5N1亚型禽流感变异株灭活疫苗种毒Re-4株的生物学特性及免疫原性研究

中国预防兽医学报 2009年第9期31卷 717-720页

作者：田国彬曾显营钟功勋姜永萍李雁冰施建忠毛胜刚冯菊艳王君伟陈化兰东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室/国家禽流感参考实验室黑龙江哈尔滨150001 哈尔滨维科生物技术开发公司黑龙江哈尔滨150001

本实验对经反向遗传方法构建的重组禽流感H5N1亚型变异株灭活疫苗种毒Re-4株的生物学特性及免疫效力进行研究。将Re-4株接种SPF鸡胚后37℃培养72h,鸡胚存活,无病变,HA滴度达29;以0.1mL(106.0EID50/0.1mL)的剂量鼻腔感染4周龄SPF鸡7d后血... 详细信息

本实验对经反向遗传方法构建的重组禽流感H5N1亚型变异株灭活疫苗种毒Re-4株的生物学特性及免疫效力进行研究。将Re-4株接种SPF鸡胚后37℃培养72h,鸡胚存活,无病变,HA滴度达29;以0.1mL(106.0EID50/0.1mL)的剂量鼻腔感染4周龄SPF鸡7d后血清HI抗体转阳,无任何症状,也不排毒;SPF鸡静脉致病指数(IVPI)为0;以Re-4重组株为种毒制备灭活疫苗,免疫SPF鸡后,3周后平均HI抗体效价达8.75log2;免疫鸡对亲本强毒株CKSX/06,以及变异株CKNX/06和流行株GSGD/96攻击提供完全保护。以上结果表明变异株灭活疫苗种毒Re-4株对SPF鸡胚和SPF鸡无致病性、适合鸡胚增殖、抗原针对性强,并且以该毒株制备的灭活疫苗具有良好的免疫效力,是研制预防H5N1亚型禽流感病毒山西变异株的理想疫苗种毒株。

关键词：禽流感 H5N1 变异株灭活疫苗

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抗H3N2亚型猪流感病毒血凝素单克隆抗体的制备与鉴定

抗H3N2亚型猪流感病毒血凝素单克隆抗体的制备与鉴定

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：孔维乔传玲陈艳杨焕良展小过辛晓光陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室

采用纯化的H3N2亚型猪流感病毒（SIV）作为免疫原免疫6～8周龄BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞（SP2/0）融合,用间接ELISA方法筛选分泌抗H3N2亚型SIV的阳性细胞株,经克隆获得7株亲和力较高的杂交瘤细胞株,分别命名为1C9、2C5、... 详细信息

采用纯化的H3N2亚型猪流感病毒（SIV）作为免疫原免疫6～8周龄BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞（SP2/0）融合,用间接ELISA方法筛选分泌抗H3N2亚型SIV的阳性细胞株,经克隆获得7株亲和力较高的杂交瘤细胞株,分别命名为1C9、2C5、2F10、3D3、4E8、5C7、5D12,用其制备的腹水ELISA效价分别为1:10～5、1:10～6、1:10～4、1:10～5、1:10～6、1:10～5、1:10～6;其中1C9、2C5、2F10、3D3单抗亚类为IgG,而4E8、5C7、5D12则是IgG,所有的单抗轻链均为κ型.Western-blot结果显示,这7株单抗都能识别HA蛋白,均能分泌针对血凝素的抗体。将本实验室构建的pCAGGS-H3HA质粒转染到293T细胞后,分别用7株单抗进行间接免疫荧光试验,能观察到特异性绿色荧光,证实该7株单抗具有良好的特异性。该亚型单克隆抗体的制备,为SIV鉴别诊断方法的建立奠定了基础.

关键词：猪流感病毒血凝素单克隆抗体

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表达H3N2亚型猪流感病毒NP基因重组腺病毒的构建

表达H3N2亚型猪流感病毒NP基因重组腺病毒的构建

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：展小过乔传玲陈艳杨焕良孔维吴运谱辛晓光陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室

以含有猪流感病毒A/Swine/Guangdong/9/2005(H3N2)NP基因的重组质粒pMD18-NP为模板,利用带特定酶切位点的引物PCR扩增NP基因,将其亚克隆质粒pIRES2-EGFP中,再次将含有NP及EGFP的基因片段克隆到腺病毒的穿梭质粒pDC315,构建重组穿梭质粒p... 详细信息

以含有猪流感病毒A/Swine/Guangdong/9/2005(H3N2)NP基因的重组质粒pMD18-NP为模板,利用带特定酶切位点的引物PCR扩增NP基因,将其亚克隆质粒pIRES2-EGFP中,再次将含有NP及EGFP的基因片段克隆到腺病毒的穿梭质粒pDC315,构建重组穿梭质粒pDC315-NP-EGFP。利用脂质体转染方法将穿梭质粒pDC315-NP-EGFP和腺病毒骨架质粒pBHGloxΔE1,E3Cre共转染HEK293细胞,基于腺病毒感染后形成的典型细胞病变及EGFP基因在细胞中的表达筛选到重组腺病毒rAd-NP-EGFP。经PCR和Western-blot鉴定,结果表明NP基因已被重组到腺病毒的基因组中,并能够伴随病毒的复制而表达,表达蛋白具有良好的生物性活性.

关键词：猪流感病毒 NP基因重组腺病毒

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表达H3N2亚型猪流感病毒HA基因重组腺病毒对小鼠免疫原性的研究

表达H3N2亚型猪流感病毒HA基因重组腺病毒对小鼠免疫原性的研究

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中国畜牧兽医学会2009学术年会

作者：展小过乔传玲杨焕良陈艳孔维辛晓光陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室

以含有SIV HA基因的重组质粒pMD18-H3HA为模板,利用带特定酶切位点的引物PCR扩增HA基因,将其亚克隆入质粒pIRES2-EGFP中,再次将含有H3HA及EGFP的基因片段克隆到腺病毒的穿梭质粒pDC315,构建重组穿梭质粒pDC315-H3HA-EGFP。利用脂质体转... 详细信息

以含有SIV HA基因的重组质粒pMD18-H3HA为模板,利用带特定酶切位点的引物PCR扩增HA基因,将其亚克隆入质粒pIRES2-EGFP中,再次将含有H3HA及EGFP的基因片段克隆到腺病毒的穿梭质粒pDC315,构建重组穿梭质粒pDC315-H3HA-EGFP。利用脂质体转染方法将穿梭质粒pDC315-H3HA-EGFP和腺病毒骨架质粒pBHGloxΔE1,E3Cre共转染HEK293细胞,基于腺病毒感染后形成的典型细胞病变及EGFP基因在细胞中的表达筛选重组腺病毒rAd-H3HA-EGFF。将重组病毒rAd-H3HA-EGFP以10～8TCID两次接种6周龄的BALB/c小鼠,时间间隔为3周,通过检测免疫小鼠的抗体水平及对病毒攻击的保护情况评价该重组病毒的免疫原性。结果HA基因已被重组到腺病毒的基因组中,并能够伴随病毒的复制而表达,表达蛋白具有良好的生物性活性。重组腺病毒rAd-H3HA-EGFP以1×10～8TCID的剂量免疫小鼠后,能够诱导产生高水平的特异性抗体,并对H3亚型SIV的攻击提供完全保护。

关键词：猪流感病毒 HA基因重组腺病毒小鼠免疫原性

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河南省部分地区猪流感血清学调查

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河南畜牧兽医（综合版） 2009年第7期30卷 23-24页

作者：韩庆功张智勇乔传玲河南科技学院动物科学学院河南新乡453003 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室

采用血凝抑制试验对河南省新乡、焦作、漯河等地采集的139份猪血清样品进行了猪流感病毒H1、H3、H5、H9亚型抗体的检测。结果显示,在被调查的139份血清中,H1亚型SIV抗体阳性率为43.17%,H3亚型SIV抗体阳性率为0,H5亚型SIV抗体阳性率为2.1... 详细信息

采用血凝抑制试验对河南省新乡、焦作、漯河等地采集的139份猪血清样品进行了猪流感病毒H1、H3、H5、H9亚型抗体的检测。结果显示,在被调查的139份血清中,H1亚型SIV抗体阳性率为43.17%,H3亚型SIV抗体阳性率为0,H5亚型SIV抗体阳性率为2.16%,H9亚型SIV抗体阳性率为1.44%;H1+H5亚型SIV抗体阳性率为1.44%;H1+H9亚型SIV抗体阳性率为1.44%;H1+H5+H9亚型SIV抗体阳性率为0。表明在所调查的猪群中,猪流感病毒的感染较为普遍,大部分猪场都曾被H1亚型感染,部分猪群有多种亚型混合感染存在。

关键词：猪流感血清血凝抑制试验

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表达H3N2亚型猪流感病毒NP基因重组腺病毒的构建

表达H3N2亚型猪流感病毒NP基因重组腺病毒的构建

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：展小过乔传玲陈艳杨焕良孔维吴运谱辛晓光陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室哈尔滨黑龙江 150001

以含有猪流感病毒A/Swine/Guangdong/9/2005(H3N2)NP基因的重组质粒pMD18-NP为模板,利用带特定酶切位点的引物PCR扩增NP基因,将其亚克隆质粒pIRES2-EGFP中,再次将含有NP及EGFP的基因片段克隆到腺病毒的穿梭质粒pDC315,构建重组穿梭质粒pDC315-NP-EGFP。利用脂质体转染方法将穿梭质粒pDC315-NP-EGFP和腺病毒骨架质粒pBHGlox△E1,E3Cre共转染HEK293细胞,基于腺病毒感染后形成的典型细胞病变及EGFP基因在细胞中的表达筛选到重组腺病毒rAd-NP-EGFP。经PCR和Westem-blot鉴定,结果表明NP基因已被重组到腺病毒的基因组中,并能够伴随病毒的复制而表达,表达蛋白具有良好的生物性活性。

关键词：猪流感病毒 NP基因重组腺病毒生物活性

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抗H3N2亚型猪流感病毒血凝素单克隆抗体的制备与鉴定

抗H3N2亚型猪流感病毒血凝素单克隆抗体的制备与鉴定

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：孔维乔传玲陈艳杨焕良展小过辛晓光陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室哈尔滨黑龙江 150001

采用纯化的H3N2亚型猪流感病毒(SIV)作为免疫原免疫6-8周龄BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,用间接ELISA方法筛选分泌抗H3N2亚型SIV的阳性细胞株,经克隆获得7株亲和力较高的杂交瘤细胞株,分别命名为1C9、2C5、2F10... 详细信息

采用纯化的H3N2亚型猪流感病毒(SIV)作为免疫原免疫6-8周龄BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,用间接ELISA方法筛选分泌抗H3N2亚型SIV的阳性细胞株,经克隆获得7株亲和力较高的杂交瘤细胞株,分别命名为1C9、2C5、2F10、3D3、4E8、5C7、5D12,用其制备的腹水ELISA效价分别为1：105、1：106.1：104、1：105、1：106、1：105、1：106;其中1C9、2C5、2F10、3D3单抗亚类为IgG1,而4E8、5C7、5D12则是IgG2a,所有的单抗轻链均为K型。Wstern-blot结果显示,这7株单抗都能识别HA蛋白,均能分泌针对血凝素的抗体。将本实验室构建的pCAGGS-H3HA质粒转染到293T细胞后,分别用7株单抗进行间接免疫荧光试验,能观察到特异性绿色荧光,证实该7株单抗具有良好的特异性。该亚型单克隆抗体的制备,为SIV鉴别诊断方法的建立奠定了基础。

关键词：猪流感病毒血凝素单克隆抗体鉴别诊断间接免疫荧光试验

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茨城病病毒S7基因的截短表达及间接ELISA检测方法的建立

茨城病病毒S7基因的截短表达及间接ELISA检测方法的建立

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十六次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十五次学术研讨会

作者：张文龙殷喆王君伟杨涛吴东来农业部兽医公共卫生重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所东北农业大学动物医学学院

茨城病病毒(Ibaraki virus,IBAV)是呼肠孤病毒科、环状病毒属成员。其VP7蛋白保守程度高,适宜作为茨城病(Ibaraki disease,IBAD)血清学检测方法的诊断抗原。本研究克隆了VP7蛋白抗原性、亲水性较强部分的编码基因,并在原核表达系统中表... 详细信息

茨城病病毒(Ibaraki virus,IBAV)是呼肠孤病毒科、环状病毒属成员。其VP7蛋白保守程度高,适宜作为茨城病(Ibaraki disease,IBAD)血清学检测方法的诊断抗原。本研究克隆了VP7蛋白抗原性、亲水性较强部分的编码基因,并在原核表达系统中表达了可溶性截短VP7蛋白。用表达的重组蛋白初步建立了IBAD间接ELISA检测方法。

关键词：茨城病截短VP7蛋白间接ELISA

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茨城病病毒S7基因的截短表达及间接ELISA检测方法的建立

茨城病病毒S7基因的截短表达及间接ELISA检测方法的建立

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十六次、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十五次学术研讨会

作者：张文龙殷喆王君伟杨涛吴东来农业部兽医公共卫生重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所哈尔滨 150001 东北农业大学动物医学学院哈尔滨 150030 东北农业大学动物医学学院哈尔滨 150030 农业部兽医公共卫生重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所哈尔滨 150001

关键词：茨城病病毒蛋白抗原性编码基因原核表达系统

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鸡IFN-γDNA-壳聚糖纳米粒的制备及体外转染

鸡IFN-γDNA-壳聚糖纳米粒的制备及体外转染

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十六次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十五次学术研讨会

作者：殷喆张文龙刘霓红杨涛步志高王君伟吴东来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室东北农业大学动物医学学院

构建了携带鸡干扰素（IFN- ）重组真核表达质粒pCAGGS-ChIFN-,制备成承载pCAGGS-ChIFN-的壳聚糖纳米粒子。透射电镜观察制备的纳米粒子呈不规则球形,光子相关色谱（PCS）仪测定显示纳米粒子的平均粒径为172.6±5.1nm;Zeta电位为20.8... 详细信息

构建了携带鸡干扰素（IFN- ）重组真核表达质粒pCAGGS-ChIFN-,制备成承载pCAGGS-ChIFN-的壳聚糖纳米粒子。透射电镜观察制备的纳米粒子呈不规则球形,光子相关色谱（PCS）仪测定显示纳米粒子的平均粒径为172.6±5.1nm;Zeta电位为20.8±2.9mV;载基因纳米粒子的重组质粒DNA包埋效率和载药量分别为91.21±2.54%和31.93±0.16%。载基因壳聚糖纳米粒子可以有效地保护重组质粒DNA,防止核酸酶对其的降解作用,并能良好的从纳米粒子中释放重组质粒DNA。CEF细胞体外转染实验表明:包裹后的纳米粒子对细胞基本无毒性,使携带的外源基因能在CEF细胞中正确表达,其转染效率约为阳离子脂质体转染试剂Lipofectamine2000 Reagent的1/6。

关键词：壳聚糖纳米颗粒鸡γ-干扰素基因体外转染

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