检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2008年第1期30卷 68-71,80页

作者：曲站红邓国华王桂芹张立春田国彬于康震陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室中国兽医药品监察所北京100081

本研究在已有H5亚型禽流感病毒特异性单抗基础上,建立了以多抗作为包被抗体、单抗作为检测抗体的抗原捕捉ELISA方法。通过对各个反应条件进行优化,获得的最佳工作条件为:羊血清1∶1600倍稀释;单抗1∶10000稀释;酶标抗体最适工作浓度为1... 详细信息

本研究在已有H5亚型禽流感病毒特异性单抗基础上,建立了以多抗作为包被抗体、单抗作为检测抗体的抗原捕捉ELISA方法。通过对各个反应条件进行优化,获得的最佳工作条件为:羊血清1∶1600倍稀释;单抗1∶10000稀释;酶标抗体最适工作浓度为1∶5000倍稀释;单抗反应时间1.5h;酶标抗体作用时间1.5h。特异性试验和敏感性试验结果表明:该方法具有良好的特异性和敏感性,可用于H5亚型高致病性禽流感病毒的检测。

关键词：禽流感病毒 H5亚型 ELISA

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区分禽流感病毒亚型诊断基因芯片的构建

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中国动物检疫 2008年第10期25卷 29-32页

作者：杨忠苹王秀荣石霖田丽娜王煜陶启蒙陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物国家重点开放实验室哈尔滨150001 重庆出入境检验检疫局重庆400020

制备了可同时区分AIVH5、H7、H9血凝素亚型及N1、N2神经氨酸酶亚型的基因诊断芯片。试验以重组质粒为模板,进行PCR扩增,然后用异丙醇沉淀法进行纯化,制备探针及内参基因。将探针及内参基因用点样缓冲液稀释到0.3μg/μL后用芯片点样仪... 详细信息

制备了可同时区分AIVH5、H7、H9血凝素亚型及N1、N2神经氨酸酶亚型的基因诊断芯片。试验以重组质粒为模板,进行PCR扩增,然后用异丙醇沉淀法进行纯化,制备探针及内参基因。将探针及内参基因用点样缓冲液稀释到0.3μg/μL后用芯片点样仪将其点制到醛基化基片上,样点中心间距450μm,样点直径220μm。将点好的基片在室温干燥24h以上,后经65℃再水合10s、80℃干燥、65mj紫外线交联照射25min后,再用封闭液封闭,95℃变性处理,成功构建了能区分禽流感血凝素H5,H7,H9亚型及神经氨酸酶N1,N2亚型的检测基因芯片。在PCR扩增中标记待检样品,对制备的检测芯片进行质量检验,结果表明,制备的区分禽流感病毒亚型基因芯片可区分AIV部分亚型。

关键词：禽流感基因芯片亚型鉴别

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猪流感病毒血凝素基因原核表达及其在间接ELISA中的初步应用

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畜牧与兽医 2008年第11期40卷 10-13页

作者：陈艳乔传玲丁选亚杨焕良辛晓光韩庆功陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

利用RT-PCR方法扩增猪流感病毒A/Swine/Henan/11/2005(H1N1)血凝素(HA)基因,克隆于pMD18-T载体进行测序。以pMD18-HA为模板、利用带酶切位点的引物再次扩增HA基因的开放阅读框(ORF),克隆到表达载体pET32a中,经双酶切、测序及PCR鉴定得... 详细信息

利用RT-PCR方法扩增猪流感病毒A/Swine/Henan/11/2005(H1N1)血凝素(HA)基因,克隆于pMD18-T载体进行测序。以pMD18-HA为模板、利用带酶切位点的引物再次扩增HA基因的开放阅读框(ORF),克隆到表达载体pET32a中,经双酶切、测序及PCR鉴定得到阳性重组表达质粒pET-HA,将质粒转化到表达宿主菌BL21(DE3)中,经终浓度为1 mmol/L的IPTG诱导,SDS-PAGE结果显示,HA蛋白获得了高效表达,经Western-blot检测证实表达产物具有良好的免疫学活性,在间接ELISA中的初步应用表明具有良好的抗原反应性。本研究为以重组HA蛋白为抗原建立H1亚型猪流感抗体的ELISA检测方法奠定了基础。

关键词：猪流感病毒 HA基因原核表达

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猪流感病毒M基因实时荧光定量PCR诊断方法的建立

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中国预防兽医学报 2008年第10期30卷 805-810页

作者：张春明乔传玲陈艳杨焕良辛晓光陈化兰冉多良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052

根据猪流感病毒(SIV)M基因的保守序列,设计并合成一对特异性引物和TaqManMGB探针,建立了SIVM基因实时荧光定量PCR检测方法。使用含有M基因的重组质粒pMD-M作为标准品绘制标准曲线,其相关系数为0.999,检测结果表明:该方法的敏感性可达到1... 详细信息

根据猪流感病毒(SIV)M基因的保守序列,设计并合成一对特异性引物和TaqManMGB探针,建立了SIVM基因实时荧光定量PCR检测方法。使用含有M基因的重组质粒pMD-M作为标准品绘制标准曲线,其相关系数为0.999,检测结果表明:该方法的敏感性可达到1个EID50,组间与组内重复试验变异系数分别为0.21%和0.65%,除SIV外,其他5种猪病病毒检测均为阴性,样品检测与病毒滴定及病毒分离结果的符合率均达到100%,该方法特异性强、重复性好,有望成为SIV的一种特异、敏感、快速的定量检测方法。

关键词： SIV Taq Man MGB探针实时荧光定量PCR

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H5N1亚型高致病性禽流感病毒A/Duck/Guangxi/53/02株感染性克隆的构建

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中国兽医学报 2008年第5期28卷 536-538,552页

作者：温峰琴樊树芳胡永浩邓国华陈化兰甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室／兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

A/Duck/Guangxi/53/02(DKGX)是从我国南方健康鸭体内分离到的H5N1亚型禽流感病毒,该病毒对鸡具有高致病性,而且能感染哺乳动物模型Balb/c小鼠,但不致死小鼠(MLD50>106.5)。本试验根据GenBank上的序列DKGX/53/02设计了8对引物,建立了... 详细信息

A/Duck/Guangxi/53/02(DKGX)是从我国南方健康鸭体内分离到的H5N1亚型禽流感病毒,该病毒对鸡具有高致病性,而且能感染哺乳动物模型Balb/c小鼠,但不致死小鼠(MLD50>106.5)。本试验根据GenBank上的序列DKGX/53/02设计了8对引物,建立了对DKGX的8质粒反向遗传操作系统,并通过细胞转染技术成功拯救了R-DKGX。R-DKGX在对哺乳动物模型Balb/c小鼠的致病性方面保持了与亲本野生毒(W-DKGX,MLD50>106.5)一致的生物学特性,即106EID50鼻腔感染小鼠后3 d均只能在肺脏检测到病毒,病毒含量分别为(3.22±0.51)lgEID50/mL和(3.69±0.88)lgEID50/mL,MLD50>106.5。

关键词：禽流感病毒 H5N1 感染性克隆

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H5N1亚型禽流感病毒A／Anhui／2／2005活候选疫苗株的构建及其对鸡致病性的研究

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中国预防兽医学报 2008年第11期30卷 831-835页

作者：樊树芳许传田索永兵陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室／兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 内蒙古农业大学动物科学与医学学院内蒙古呼和浩特010018

A/Ann Arbor/6/60ca(H2N2)冷适应疫苗供体株具有冷适应性、温度敏感性和致弱性表型。本研究利用基因工程技术体外合成A/Ann Arbor/6/60ca(H2N2)冷适应疫苗株具有冷适应性的内部基因PB2、PB1、PA、NP、M、NS,从A/Anhui/2/2005(H5N1)毒株... 详细信息

A/Ann Arbor/6/60ca(H2N2)冷适应疫苗供体株具有冷适应性、温度敏感性和致弱性表型。本研究利用基因工程技术体外合成A/Ann Arbor/6/60ca(H2N2)冷适应疫苗株具有冷适应性的内部基因PB2、PB1、PA、NP、M、NS,从A/Anhui/2/2005(H5N1)毒株获得HA、NA,并对HA基因上的多个连续碱性氨基酸基序进行了缺失修饰。将上述8个基因片段分别克隆至pBD双向表达载体中测序鉴定。利用质粒反向遗传操作系统,将构建正确的8个重组pBD质粒转染Vero细胞拯救病毒。经RT-PCR和序列测定鉴定,结果表明本试验成功获得了一株H5N1亚型A/Anhui/2/2005重组病毒,将其命名为AH/AAca,救获的重组病毒具有预期的温度敏感性和冷适应性生物学特性。随后进行了AH/AAca人工感染SPF鸡的感染性和致病性试验,结果表明其对鸡既无感染性,也无致病性。AH/AAca的获得为评价其在小鼠、非人类灵长目等动物模型上的保护效力的研究打下了坚实基础,为我国预防人禽流感的流行建立了技术储备。

关键词：禽流感病毒反向遗传操作救获病毒冷适应性温度敏感性

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鸭源H5N1亚型禽流感病毒分离株的致病性及表面蛋白基因序列分析

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畜牧与兽医 2008年第11期40卷 17-20页

作者：杨德全李雁冰施建忠陈化兰张书霞南京农业大学动物医学院江苏南京210095 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室国家禽流感参考实验室黑龙江哈尔滨150001

分析1株2004年从广东省分离获得的HSN1型禽流感病毒株A／Duck／GuangdongJiedong／23／2004对SPF鸡和鸭的致病性，并对其血凝素（HA）基因和神经氨酸酶（NA）基因的序列进行测定，与GenBank中收录的其他序列进行比较。结果，此分离株对... 详细信息

分析1株2004年从广东省分离获得的HSN1型禽流感病毒株A／Duck／GuangdongJiedong／23／2004对SPF鸡和鸭的致病性，并对其血凝素（HA）基因和神经氨酸酶（NA）基因的序列进行测定，与GenBank中收录的其他序列进行比较。结果，此分离株对SPF鸡和鸭均具有高致病性，且致死率达100％。HA基因与SCK／ST／475／04的同源率最高，而NA基因与Ck／GD／178／04同源率最高。进化分析结果表明，此毒珠与DK／Chi—na／E319-2／03的HA、NA亲缘关系较近，推测它们来源于同一祖代毒株。推导的HA基因氨基酸裂解位点为-RRRKK-，具有典型高致病性禽流感的特征序列；NA基因颈部49～68位20个氨基酸缺失是近年来H5N1亚型优势流行株共同的遗传标志。

关键词：禽流感病毒 1-15N1亚型致病性血凝素神经氨酸酶序列分析

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我国H5N1亚型高致病性禽流感病毒抗原变异株的鉴定分析

我国H5N1亚型高致病性禽流感病毒抗原变异株的鉴定分析

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：李雁冰施建忠赵海丹田国彬王冬宋家升杨德全邓国华王秀荣陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所国家兽医生物技术重点开放实验室/国家禽流感参考实验室/农业部动物流感重点开放实验室

本文对引起我国2006年山西、宁夏2省(区)H5N1亚型禽流感疫情的代表毒株-A/chicken/Shanxi/2/2006(H5N1)(CK/SX/06)进行了全面研究。结果表明该病毒具有高致病力禽流感病毒(HPAIV)特征,基因组序列分析发现其8个基因片段与我国传统H5N1亚... 详细信息

本文对引起我国2006年山西、宁夏2省(区)H5N1亚型禽流感疫情的代表毒株-A/chicken/Shanxi/2/2006(H5N1)(CK/SX/06)进行了全面研究。结果表明该病毒具有高致病力禽流感病毒(HPAIV)特征,基因组序列分析发现其8个基因片段与我国传统H5N1亚型禽流感病毒GS/GD/1/96(H5N1)存在较大差异,属于新的基因型-山西鸡型;抗原性分析结果表明其在抗原性与GS/GD/1/96同样存在较大变异,遂将其命名为"山西鸡型"抗原变易株;以剂量106EID50/0.1mL将该病毒鼻腔接种4周龄SPF鸭以评价其对水禽的感染能力,结果表明其不感染鸭;常规方法接种BALB/C鼠以评价其对哺乳动物的感染和致病能力,结果表明其能感染鼠,但不引起死亡,呈低致病力。说明该类型高致病性H5N1HPAIV目前仅危害鸡,不具备感染水禽的能力,感染哺乳动物但不致死。但该类型病毒的出现与流行仍然为我国禽流感的免疫与防治提出新的课题。

关键词： H5N1HPAIV CK/SXYQ/2/06 山西鸡型抗原变异

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我国近年H5N1亚型HPAIV的遗传进化

我国近年H5N1亚型HPAIV的遗传进化

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十四次学术研讨会

作者：李雁冰施建忠田国彬曾显营齐巧玲赵海丹杨德全王冬宋家升赵东明邓国华王秀荣陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所国家兽医生物技术重点开放实验室国家禽流感参考实验室农业部动物流感重点开放实验室

前言:2003年底,东南亚多个国家开始暴发H5N1亚型高致病性禽流感(HPAI),我国自2004年1月26日第一起疫情出现以来,相同疫情在我国时有发生。近年来我国禽流感疫情的特点各不相同,2005年的突出特点是我国青海湖5月暴发了流感史上第一起野鸟... 详细信息

前言:2003年底,东南亚多个国家开始暴发H5N1亚型高致病性禽流感(HPAI),我国自2004年1月26日第一起疫情出现以来,相同疫情在我国时有发生。近年来我国禽流感疫情的特点各不相同,2005年的突出特点是我国青海湖5月暴发了流感史上第一起野鸟H5N1亚型HPAI,该次事件打破了人们认为水鸟是流感病毒的自然宿主,携带病毒而不表现临床症状的传统认识。此后,随着野鸟的迁徙,该病由亚洲逐渐传播到欧洲、非洲等地,目

关键词：基因型 HPAIV

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我国H5N1亚型HPAIV对哺乳动物感染与致病性研究

我国H5N1亚型HPAIV对哺乳动物感染与致病性研究

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第二届全国人畜共患病学术研讨会

作者：李雁冰施建忠田国彬曾显营赵东明杨德全王冬宋家升陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所国家兽医生物技术重点开放实验室国家禽流感参考实验室农业部动物流感重点开放实验室

2003年底,东南亚多个国家开始暴发H5N1亚型高致病性禽流感(HPAI),H5N1HPAIV在对禽鸟肆虐的同时,也给人类带来了严重危害,同时其它种类哺乳动物也有感染及死亡病例的发生。2008年6月19日,WHO报道全世界已有385人感染,243例死亡,我国自200... 详细信息

2003年底,东南亚多个国家开始暴发H5N1亚型高致病性禽流感(HPAI),H5N1HPAIV在对禽鸟肆虐的同时,也给人类带来了严重危害,同时其它种类哺乳动物也有感染及死亡病例的发生。2008年6月19日,WHO报道全世界已有385人感染,243例死亡,我国自2005年报道人感染禽流感病毒并死亡的事件以来,至今已有30人感染,其中20人不幸医治无效。所以

关键词： HPAIV 哺乳动物

来源：评论

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