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中国畜牧兽医学会2014年学术年会

作者：王德丽慈彦鹏崔艳芳樊兆斌刘丽玲田国彬曾显营陈化兰李雁冰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室国家禽流感参考实验室

引言禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)属于正黏病毒科流感病毒属,是一种能够引起严重危害的人兽共患病原。2013年12月,我国第一次发生H10N8亚型AIV感染人并致人死亡的病例,这引起公众对H10亚型流感病毒的广泛关注。本研究对从野... 详细信息

引言禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)属于正黏病毒科流感病毒属,是一种能够引起严重危害的人兽共患病原。2013年12月,我国第一次发生H10N8亚型AIV感染人并致人死亡的病例,这引起公众对H10亚型流感病毒的广泛关注。本研究对从野鸟体内分离到的多株H10亚型流感病毒株以及H10亚型参考毒株进行遗传演化分析,并对其生物学特性进行研究,为进一步探索H10亚型AIV在自然界

关键词：禽流感病毒 H10

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禽流感DNA疫苗(H5亚型,pH5-GD)对主要流行抗原群代表毒株的免疫保护效力

禽流感DNA疫苗(H5亚型,pH5-GD)对主要流行抗原群代表毒株的免疫保...

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：姜永萍陈普成柳金雄曾显营施建忠邓国华陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

本研究对禽流感DNA疫苗(H5亚型,pH5-GD)对我国流行的主要抗原群的代表毒株的免疫效力进行了评估.以疫苗使用量(15μg,0.2ml)免疫3周龄SPF鸡,首次免疫后21 d以相同剂量和方式加强免疫一次,于首次免疫后28 d分别用105 EID50的DK/HuB/S 151... 详细信息

本研究对禽流感DNA疫苗(H5亚型,pH5-GD)对我国流行的主要抗原群的代表毒株的免疫效力进行了评估.以疫苗使用量(15μg,0.2ml)免疫3周龄SPF鸡,首次免疫后21 d以相同剂量和方式加强免疫一次,于首次免疫后28 d分别用105 EID50的DK/HuB/S 1513/2010(clade 2.3.2.b)、DK/GD/S1322/2010(clade 2.3.2.c)、DK/FJ/31/2007(clade 2.3.4a)以及CK/SD/A-10/2011(clade 7.2)进行致死性的攻击,结果,免疫鸡对DK/FJ/31/2007(clade2.3.4.a)的攻击可以100％的保护,对DK/HuB/S1513/2010(clade 2.3.2.b)、DK/GD/SI322/2010(clade 2.3.2.c)和CK/SD/A-10/2011(clade 7.2)的免疫保护率分别为7/8、6/7、6/7.

关键词：鸡 H5亚型禽流感脱氧核糖核酸疫苗流行抗原群免疫保护

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H9亚型禽流感病毒RT-LAMP快速检测方法的建立

H9亚型禽流感病毒RT-LAMP快速检测方法的建立

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：包红梅王秀荣陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

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禽流感DNA疫苗(H5亚型,pH5-GD)对AA肉鸡免疫程序的研究

禽流感DNA疫苗(H5亚型,pH5-GD)对AA肉鸡免疫程序的研究

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：姜永萍王国俊李俊平柳金雄陈普成曾显营陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

将禽流感DNA疫苗(H5亚型,pH5-GD)对AA肉鸡的免疫程序进行了研究.将批号为2009001的DNA疫苗分别以0.2 mL(30μg)和0.2 mL(60μg)剂量免疫2周龄AA肉鸡,分别在免疫后7d、14d、28 d,每只鸡分别用高致病性禽流感病毒(HPAIV)A/Goose/Guangdong... 详细信息

将禽流感DNA疫苗(H5亚型,pH5-GD)对AA肉鸡的免疫程序进行了研究.将批号为2009001的DNA疫苗分别以0.2 mL(30μg)和0.2 mL(60μg)剂量免疫2周龄AA肉鸡,分别在免疫后7d、14d、28 d,每只鸡分别用高致病性禽流感病毒(HPAIV)A/Goose/Guangdong/1/1996(H5N1)[GS/GD/1/96(H5N1)]株尿囊液0.1 mL(含100 CLD50)攻击;用该疫苗首免后1周分别用相同剂量的疫苗加强免疫一次,在加强免疫后7日和14日分别以100 CLD50的HPAlV GS/GD/1/96(H5N1)攻击;用该疫苗首免2周时分别用相同剂量的疫苗加强免疫一次,在加强免疫后7日和14日分别以100 CLD50的HPAIV GS/GD/1/96(H5N1)攻击.结果,根据其诱导的HI抗体水平和免疫保护效果确定,禽流感DNA疫苗(pH5-GD)对AA肉鸡的免疫程序为:30μg剂量14日龄首免,间隔14日龄加强免疫.

关键词：肉鸡 H5亚型禽流感脱氧核糖核酸疫苗免疫程序

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洞庭湖区H10亚型禽流感监测及其遗传进化分析

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中国农学通报 2014年第32期30卷 15-20页

作者：黄建龙王昌建谭丹邓国华范仲鑫朱春霞张朝阳刘道新湖南省动物疫病预防控制中心长沙410014 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为了解洞庭湖区H10亚型禽流感病毒的流行分布及遗传进化情况,为该地区H10亚型禽流感的防控及该亚型病毒在禽流感病毒进化中所起的作用提供一些参考。在环洞庭湖地区活禽批发市场和水禽场上采集家禽和环境拭子,对其进行病原分离、鉴定和... 详细信息

为了解洞庭湖区H10亚型禽流感病毒的流行分布及遗传进化情况,为该地区H10亚型禽流感的防控及该亚型病毒在禽流感病毒进化中所起的作用提供一些参考。在环洞庭湖地区活禽批发市场和水禽场上采集家禽和环境拭子,对其进行病原分离、鉴定和测序,应用Mega 5软件包对病毒基因进行多序列比对和进化树的绘制与分析。结果显示:在活禽批发市场上总共分离到11株H10亚型禽流感病毒,分离的H10亚型禽流感阳性样品全来源于鸭拭子;在1个鸭场分离到2株H10亚型禽流感病毒;其中2株分离毒株序列分析显示其HA蛋白的裂解位点为PELMQGR/GLF,属于低致病性病毒,与以往在其他国家(蒙古、瑞典、荷兰、泰国、日本等)野鸟中分离的H10亚型病毒处于同一分支。

关键词： H10亚型禽流感病毒洞庭湖区监测遗传进化

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表达传染性法氏囊病毒VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒的构建与评价

表达传染性法氏囊病毒VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒的构建与评价

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：陈普成李奇蒙姜永萍柳金雄田雨王笑梅胡永浩陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

为构建表达传染性法氏囊病毒(IBDV)VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒(rHVT-VP2),本研究利用RT-PCR扩增IBDV的VP2基因,构建了重组真核表达质粒pCAGG-VP2,并将携带Pec复合启动子的VP2基因表达盒(Pec-VP2-PolyA)进行酶切,连接于Gateway系统入门质... 详细信息

为构建表达传染性法氏囊病毒(IBDV)VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒(rHVT-VP2),本研究利用RT-PCR扩增IBDV的VP2基因,构建了重组真核表达质粒pCAGG-VP2,并将携带Pec复合启动子的VP2基因表达盒(Pec-VP2-PolyA)进行酶切,连接于Gateway系统入门质粒pENTR构建重组质粒pENTR-VP2.采用GatewayLR克隆技术将pENTR-VP2与构建的重组粘粒pFosC-ccdBK+共同参与基因片段进行互换反应,构建重组粘粒pFosC-VP2.通过将pFosC-VP2与其它4个相互重叠并且覆盖HVT全基因组的粘粒酶切线性化后共同转染CEF细胞,拯救重组病毒rHVT-VP2.将重组病毒在CEF细胞中连续传代20次,利用PCR、western blot和间接免疫荧光进行检测,结果表明VP2蛋白均得到稳定地表达.动物试验结果表明通过一次免疫rHVT-VP2即可诱导针对传染性法氏囊的完全保护力.

关键词：火鸡疱疹病毒传染性法氏囊病毒基因重组蛋白表达

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表达狂犬病病毒ERA株糖蛋白重组新城疫病毒活载体疫苗的构建及对小鼠的免疫原性研究

表达狂犬病病毒ERA株糖蛋白重组新城疫病毒活载体疫苗的构建及对...

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：马良王琪田美杰王喜军翟洪月于文会葛金英步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨 150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨 150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

在新城疫病毒LaSota弱毒疫苗株反向遗传操作系统的基础上,构建表达狂犬病病毒ERA株糖蛋白的重组新城疫病毒rLa-ERA-GP,并探索rLa-ERA-GP对小鼠免疫原性.利用RT-PCR技术,从狂犬病病毒ERA疫苗株上得到狂犬病病毒的糖蛋白(GP)基因,将其克... 详细信息

在新城疫病毒LaSota弱毒疫苗株反向遗传操作系统的基础上,构建表达狂犬病病毒ERA株糖蛋白的重组新城疫病毒rLa-ERA-GP,并探索rLa-ERA-GP对小鼠免疫原性.利用RT-PCR技术,从狂犬病病毒ERA疫苗株上得到狂犬病病毒的糖蛋白(GP)基因,将其克隆到载体pBRN-FL-Pmel上,构建了表达狂犬病病毒糖蛋白重组新城疫病毒全长cDNA克隆pBRN-FL-ERA-GP.利用磷酸钙转染法,在辅助质粒pBS-NP、pBS-P和pBS-L的共同作用下,拯救重组病毒***-PCR检测证实重组病毒rLa-ERA-GP基因组中含有GP基因;western blot和IFA检测结果均表明GP基因在新城疫载体中得到了正确、稳定的表达;大剂量接种BALB/c小鼠不会引起小鼠发病和生长阻滞,并能诱导出高水平ERA特异中和抗体反应;加强免疫后可有效抵御致死剂量RV街毒对BALB/c小鼠的攻击.重组病毒rLa-ERA-GP有望成为防制狂犬病更加安全、有效的,新型重组基因工程活载体疫苗.

关键词：狂犬病病毒反向遗传操作系统重组新城疫病毒糖蛋白表达活载体疫苗免疫原性

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7.2分支H5N1亚型禽流感病毒反向遗传疫苗候选株的构建

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中国预防兽医学报 2013年第9期35卷 764-766页

作者：范俊李旭勇王金良郭晶邓国华施建忠陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为应对clade7.2 H5N1亚型禽流感病毒(AIV)持续发生的抗原性改变及其引发的潜在AIV的地方性流行,需要根据流行监测的抗原分析结果挑选合适的供体株制备疫苗候选株。本研究采用反向遗传操作系统,以A/Puerto Rico/8/34(PR8)的内部基因为骨... 详细信息

为应对clade7.2 H5N1亚型禽流感病毒(AIV)持续发生的抗原性改变及其引发的潜在AIV的地方性流行,需要根据流行监测的抗原分析结果挑选合适的供体株制备疫苗候选株。本研究采用反向遗传操作系统,以A/Puerto Rico/8/34(PR8)的内部基因为骨架,以clade7.2 H5N1 AIV A/Chicken/Liao Ning/S4092/2011(CK/LN/S4092)基因组为模板经RT-PCR扩增其HA及NA基因,并对HA基因进行分子修饰,去除与H5亚型AIV致病力有关的HA蛋白裂解位点处的多个连续碱性氨基酸,使其获得低致病性AIV的分子特征(即将-PQIEGRRRKR-突变为-PQRETR-),从而构建出clade7.2 H5N1亚型AIV疫苗候选株rPR8-LN/S4092,为动物免疫试验奠定了基础。

关键词： clade 7 2 H5N1流感病毒反向遗传操作疫苗候选株

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一株类禽型H1N1亚型猪流感病毒的反向遗传系统的建立

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中国预防兽医学报 2013年第2期35卷 91-94页

作者：孟沙沙乔传玲陈艳杨焕良刘丽萍尹航辛晓光陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为建立H1N1亚型猪流感病毒A/swine/Jiangsu/40/2011(JS40)的反向遗传系统,本研究分别构建了JS40株8个基因节段的重组质粒,经转染293T和MDCK混合细胞,拯救出病毒R-JS40。序列测定结果表明,救获病毒与亲本病毒的核苷酸序列一致,无氨基酸变... 详细信息

为建立H1N1亚型猪流感病毒A/swine/Jiangsu/40/2011(JS40)的反向遗传系统,本研究分别构建了JS40株8个基因节段的重组质粒,经转染293T和MDCK混合细胞,拯救出病毒R-JS40。序列测定结果表明,救获病毒与亲本病毒的核苷酸序列一致,无氨基酸变异,可以稳定传代;抗原性未发生变化;对小鼠的致病性结果显示R-JS40与JS40对小鼠的组织嗜性以及在肺脏中复制的病毒滴度基本一致。以上结果表明R-JS40保持了亲本病毒JS40的生物学特性,该病毒反向遗传操作系统的建立,为进一步开展病毒的致病分子基础以及新型疫苗的研制提供有效的技术平台。

关键词：猪流感病毒类禽型 H1N1 反向遗传系统

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跨膜丝氨酸蛋白酶-4对2009甲型H1N1流感病毒HA的切割及其融合活性研究

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中国预防兽医学报 2013年第7期35卷 517-520页

作者：吴超温志远陈伟业施建忠葛金英步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

流感病毒血凝素(HA)被宿主蛋白酶切割活化是流感病毒复制和扩散的关键步骤。2009甲型H1N1流感病毒HA的裂解位点为单碱性氨基酸,只能被宿主特定组织部位表达的某些蛋白酶所切割活化。本研究构建了主要存在于人呼吸道和肺脏的跨膜丝氨酸... 详细信息

流感病毒血凝素(HA)被宿主蛋白酶切割活化是流感病毒复制和扩散的关键步骤。2009甲型H1N1流感病毒HA的裂解位点为单碱性氨基酸,只能被宿主特定组织部位表达的某些蛋白酶所切割活化。本研究构建了主要存在于人呼吸道和肺脏的跨膜丝氨酸蛋白酶4(TMPRSS4)的真核表达重组质粒pCA-TMPRSS4-Flag与表达2009甲型H1N1流感病毒中国四川分离株HA的真核重组表达质粒pCA-SCHA共转染293T细胞,利用westernblot证明2009甲型H1N1流感病毒的HA蛋白能够被TMPRSS4切割;通过激光共聚焦确定TMPRSS4和HA在293T细胞膜上共定位;并进一步通过细胞融合试验证明经正确切割的HA具有在低pH条件下介导细胞膜发生融合的生物学功能。本实验为研究自然感染情况下参与活化流感病毒的宿主胰蛋白酶提供了实验依据。

关键词： 2009甲型H1N1流感病毒跨膜丝氨酸蛋白酶-4 血凝素细胞融合

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