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中国预防兽医学报 2010年第10期32卷 795-799页

作者：李洪涛张新涛刘明刘春国杜金玲石薇琳孙恩成中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感开放实验室及国家禽流感参考实验室/OIE禽流感参考实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319

为研究含禽流感病毒(AIV)不同拷贝数基质蛋白胞外功能区(M2e)亚单位疫苗在SPF鸡体中的免疫保护效力差异,根据已发表的高致病性AIV M2基因序列设计合成两对引物,利用PCR技术扩增单个M2e基因片段,以此为基础顺次串联得到不同拷贝数的M2e... 详细信息

为研究含禽流感病毒(AIV)不同拷贝数基质蛋白胞外功能区(M2e)亚单位疫苗在SPF鸡体中的免疫保护效力差异,根据已发表的高致病性AIV M2基因序列设计合成两对引物,利用PCR技术扩增单个M2e基因片段,以此为基础顺次串联得到不同拷贝数的M2e基因片段,并将其克隆到pMAL-C2x载体中,构建不同拷贝数的A型AIV M2e基因的重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定。表达产物经纯化后免疫家兔、SPF鸡,制备抗M2e融合蛋白的多克隆抗体。Western blot和间接免疫荧光试验检测纯化的融合蛋白免疫原性,间接ELISA测定鸡血清抗体水平,表明MBP-3M2e融合蛋白的抗体水平较高,且MBP-3M2e亚单位疫苗产生最好的免疫保护力。

关键词： A型禽流感病毒 M2e基因原核表达多克隆抗体免疫保护力

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H5亚型禽流感病毒血凝素基因的克隆及表达

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黑龙江畜牧兽医 2007年第4期 20-22页

作者：黎玉梅邓国华冉多良熊蕊陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室国家禽流感参考实验室新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052 新疆农业大学动物医学学院

研究以RT-PCR方法从H5N1亚型禽流感病毒A/DKZJ/12/00(H5N1)中获得禽流感病毒HA部分基因,将目的基因定向克隆到原核表达载体pET-32a,将测序和酶切验证正确的阳性重组质粒转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达。结果表明该蛋白得到了可溶性的... 详细信息

研究以RT-PCR方法从H5N1亚型禽流感病毒A/DKZJ/12/00(H5N1)中获得禽流感病毒HA部分基因,将目的基因定向克隆到原核表达载体pET-32a,将测序和酶切验证正确的阳性重组质粒转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达。结果表明该蛋白得到了可溶性的表达,表达蛋白的分子质量为25ku;Western-blot分析结果表明,该蛋白可以与禽流感H5阳性血清反应(禽流感的单克隆抗体所识别),检测HA的抗体时具有良好的免疫原性。

关键词：禽流感病毒 HA基因原核表达诊断抗原

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鸭源H5N1亚型禽流感病毒分离株的致病性及表面蛋白基因序列分析

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畜牧与兽医 2008年第11期40卷 17-20页

作者：杨德全李雁冰施建忠陈化兰张书霞南京农业大学动物医学院江苏南京210095 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室国家禽流感参考实验室黑龙江哈尔滨150001

分析1株2004年从广东省分离获得的HSN1型禽流感病毒株A／Duck／GuangdongJiedong／23／2004对SPF鸡和鸭的致病性，并对其血凝素（HA）基因和神经氨酸酶（NA）基因的序列进行测定，与GenBank中收录的其他序列进行比较。结果，此分离株对... 详细信息

分析1株2004年从广东省分离获得的HSN1型禽流感病毒株A／Duck／GuangdongJiedong／23／2004对SPF鸡和鸭的致病性，并对其血凝素（HA）基因和神经氨酸酶（NA）基因的序列进行测定，与GenBank中收录的其他序列进行比较。结果，此分离株对SPF鸡和鸭均具有高致病性，且致死率达100％。HA基因与SCK／ST／475／04的同源率最高，而NA基因与Ck／GD／178／04同源率最高。进化分析结果表明，此毒珠与DK／Chi—na／E319-2／03的HA、NA亲缘关系较近，推测它们来源于同一祖代毒株。推导的HA基因氨基酸裂解位点为-RRRKK-，具有典型高致病性禽流感的特征序列；NA基因颈部49～68位20个氨基酸缺失是近年来H5N1亚型优势流行株共同的遗传标志。

关键词：禽流感病毒 1-15N1亚型致病性血凝素神经氨酸酶序列分析

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禽流感灭活疫苗(H5N1亚型,Re1株)研究及应用

禽流感灭活疫苗(H5N1亚型,Re1株)研究及应用

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中国畜牧兽医学会2004学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会

本研究利用已经构建的高度致弱、具有高度鸡胚适应性以及具有广泛抗原针对性的禽流感H5N1亚型重组Rel株为种毒,研制出新型H5亚型禽流感灭活疫苗。实验室研究、中间试验以及生产性试验结果均表明,该疫苗免疫鸡无任何不良反应,免疫效果确... 详细信息

本研究利用已经构建的高度致弱、具有高度鸡胚适应性以及具有广泛抗原针对性的禽流感H5N1亚型重组Rel株为种毒,研制出新型H5亚型禽流感灭活疫苗。实验室研究、中间试验以及生产性试验结果均表明,该疫苗免疫鸡无任何不良反应,免疫效果确实,免疫后7天产生可检测的HI抗体;免疫后14天,用强毒进行攻击,抗死亡保护率达100%;免疫后21-180天产生坚强免疫保护力,用强毒攻击后免疫鸡既不出现临床症状,也能阻止病毒从呼吸道和消化道排泄;免疫后43周,HI抗体仍大于41og2。这些结果表明,但其免疫后抗体效价及免疫持续期都大大高于国内同类产品。

关键词：人工构建疫苗株H5N1Re1 灭活疫苗评估

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高效安全禽流感H5N1亚型灭活疫苗种毒株Re1的构建及其生物学特性和免疫原性研究

高效安全禽流感H5N1亚型灭活疫苗种毒株Re1的构建及其生物学特性...

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中国畜牧兽医学会2004学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会

作者：田国彬李呈军李雁冰施建忠冯菊艳于康震陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室国家禽流感参考实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室国家禽流感参考实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室国家禽流感参考实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室国家禽流感参考实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室国家禽流感参考实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室国家禽流感参考实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室国家禽流感参考实验室

H5N1亚型禽流感病毒近年导致中国及东南亚地区的家禽和人感染、死亡,成为最重要的新发人畜共患传染病之一,疫苗免疫是控制本病的主要手段之一。本研究以对我国H5N1高致病力禽流感病毒流行分离株抗原性具广泛针对性的GD/1/96株为两个表... 详细信息

H5N1亚型禽流感病毒近年导致中国及东南亚地区的家禽和人感染、死亡,成为最重要的新发人畜共患传染病之一,疫苗免疫是控制本病的主要手段之一。本研究以对我国H5N1高致病力禽流感病毒流行分离株抗原性具广泛针对性的GD/1/96株为两个表面基因HA和NA供体,通过定点突变和删除HA基因裂解位点与高致病力相关的碱性氨基酸,以流感病毒PR8为6个内部基因供体,利用反向基因操作技术手段,人工制造了一株高度抗原针对性、高度致弱、鸡胚生长适应良好的H5N1灭活疫苗种毒株Rel。Rel株不致死接种鸡胚,其鸡胚生长滴度(HA价)72小时可达111og2,比现有的野生型低致病性H5N2疫苗株生长滴度提高2-4倍,比高致病力HSN1亚型野生型分离株生长滴度提高8倍以上;该毒林对6周龄SPF感染试验静脉内接种致病指数(IVPI)为0,106.0EID50大剂量鼻腔内接种鸡不发病、不致死,呼吸道和泄殖腔不排毒;对6-8周龄BALB/c小鼠的半数致死量大于106.0EID50。结果证明Rel对鸡和哺乳动物无致病力。以Rel株为种毒按常规方法制备的油乳剂灭活疫苗免疫SPF鸡后,一周内即可诱导出可检测的叭抗体,3周内平均HI抗体达到7log2以上,形成坚实的免疫保护,对我国不同时期分离H5N1高致病力禽流感病毒攻击不发病、不致死、不排毒。结果显示,Rel株用作H5亚型禽流感灭活疫苗种毒株,具有高度生物安全、鸡胚生长滴度高、抗原针对性强的突出优点,很适合作为种毒株用于大规模疫苗生产。

关键词：禽流感 H5N1 疫苗株反向基因操作

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H5N1亚型禽流感变异株灭活疫苗种毒Re-4株的生物学特性及免疫原性研究

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中国预防兽医学报 2009年第9期31卷 717-720页

作者：田国彬曾显营钟功勋姜永萍李雁冰施建忠毛胜刚冯菊艳王君伟陈化兰东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室/国家禽流感参考实验室黑龙江哈尔滨150001 哈尔滨维科生物技术开发公司黑龙江哈尔滨150001

本实验对经反向遗传方法构建的重组禽流感H5N1亚型变异株灭活疫苗种毒Re-4株的生物学特性及免疫效力进行研究。将Re-4株接种SPF鸡胚后37℃培养72h,鸡胚存活,无病变,HA滴度达29;以0.1mL(106.0EID50/0.1mL)的剂量鼻腔感染4周龄SPF鸡7d后血... 详细信息

本实验对经反向遗传方法构建的重组禽流感H5N1亚型变异株灭活疫苗种毒Re-4株的生物学特性及免疫效力进行研究。将Re-4株接种SPF鸡胚后37℃培养72h,鸡胚存活,无病变,HA滴度达29;以0.1mL(106.0EID50/0.1mL)的剂量鼻腔感染4周龄SPF鸡7d后血清HI抗体转阳,无任何症状,也不排毒;SPF鸡静脉致病指数(IVPI)为0;以Re-4重组株为种毒制备灭活疫苗,免疫SPF鸡后,3周后平均HI抗体效价达8.75log2;免疫鸡对亲本强毒株CKSX/06,以及变异株CKNX/06和流行株GSGD/96攻击提供完全保护。以上结果表明变异株灭活疫苗种毒Re-4株对SPF鸡胚和SPF鸡无致病性、适合鸡胚增殖、抗原针对性强,并且以该毒株制备的灭活疫苗具有良好的免疫效力,是研制预防H5N1亚型禽流感病毒山西变异株的理想疫苗种毒株。

关键词：禽流感 H5N1 变异株灭活疫苗

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一种含碘消毒剂对禽流感病毒杀灭效果的研究

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畜牧兽医科技信息 2004年第9期20卷 34-35页

作者：施建忠田国彬李雁冰冯菊艳陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室国家禽流感参考实验室哈尔滨150001

流行性感冒病毒(简称流感病毒)是对粘蛋白具有特殊亲和性的RNA病毒，属正粘病毒科，流感病毒属，其中以A型流感病毒感染范围最广，危害也最大，它可以感染人、猪、马、海洋哺乳动物、禽类等，是人和畜禽呼吸道疾病的主要病原。二十世纪... 详细信息

流行性感冒病毒(简称流感病毒)是对粘蛋白具有特殊亲和性的RNA病毒，属正粘病毒科，流感病毒属，其中以A型流感病毒感染范围最广，危害也最大，它可以感染人、猪、马、海洋哺乳动物、禽类等，是人和畜禽呼吸道疾病的主要病原。二十世纪人类发生的四次流感大流行，给人类带来巨大的灾难，造成了数百万人的丧生。同时，流感病毒对畜禽的肆

关键词：禽流感病毒消毒剂碘粘蛋白 RNA病毒正粘病毒科

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遗传重组高繁殖力疫苗株H5N2(H5/PR8)病毒的构建和鉴定

遗传重组高繁殖力疫苗株H5N2(H5/PR8)病毒的构建和鉴定

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中国畜牧兽医学会2004学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会

作者：施建忠田国彬李雁冰陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室国家禽流感参考实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室国家禽流感参考实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室国家禽流感参考实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室国家禽流感参考实验室

作为禽流感疫苗株,不但要求其具有良好的免疫原性,而且要求在生产中具有良好的生长特性,现用的A/pheasant/NewJersey/1355,98(H5N2)疫苗株,血凝价28,生长滴度较差。本研究利用自然重组法,预制备一株高繁殖力的预备疫苗株,使它的表面基... 详细信息

作为禽流感疫苗株,不但要求其具有良好的免疫原性,而且要求在生产中具有良好的生长特性,现用的A/pheasant/NewJersey/1355,98(H5N2)疫苗株,血凝价28,生长滴度较差。本研究利用自然重组法,预制备一株高繁殖力的预备疫苗株,使它的表面基因血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)来源于A/pheasant/NewJersey/1355/98(H5N2)毒株,并使其保持原有的良好的免疫原性,内部基因来源于流感病毒PR8,A/Puerto Rico/8/34(H1N1)毒株,并使其重组病毒赋有了流感病毒PR8高繁殖力的特性。实验结果表明,已获得一株高繁殖力的重组流感病毒H5/PR8,血凝价达到211,生长繁殖特性明显增强。抗原性分析显示,H5/PR8重组病毒与亲本毒株H5N2抗原性无明显差异;致病性分析发现,H5/PR8重组病毒的致病能力较亲本毒株H5N2有明显下降。这为疫苗株的改良奠定了坚实的基础,对禽流感灭活疫苗的生产具有重大意义。

关键词：流感病毒重组 H5N2亚型 PR8

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H7N2亚型AIV的鉴定及其对鸡和小鼠的致病性试验

H7N2亚型AIV的鉴定及其对鸡和小鼠的致病性试验

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全国首届动物生物技术学术研讨会

作者：李雁冰田国彬田克恭施建忠陈化兰于康震中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室国家禽流感参考实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室国家禽流感参考实验室农业部兽医诊断中心中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室国家禽流感参考实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室国家禽流感参考实验室全国畜牧兽医总站

对一株AIV限制性克隆纯化3代后,进行了血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）亚型鉴定,鉴定其为H7N2亚型,测定了该病毒的平均鸡胚半数感染量(EID)为10log2/0.1ml,鸡胚平均死亡时间（MDT）为120小时,其静脉接种指数（IVPI）为0.56<1.0,表明... 详细信息

对一株AIV限制性克隆纯化3代后,进行了血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）亚型鉴定,鉴定其为H7N2亚型,测定了该病毒的平均鸡胚半数感染量(EID)为10log2/0.1ml,鸡胚平均死亡时间（MDT）为120小时,其静脉接种指数（IVPI）为0.56<1.0,表明该病毒为低等致病力H7亚型禽流感病毒（LPAIV）,该病毒静脉（i.v）和滴鼻i.n两种途径感染8只6周龄SPF雏鸡10～6 EID/0.1ml,接种后3、5、7天分别采集喉头和泄殖腔拭子进行病毒分离和滴定,两种途径接种第7天均分离不到病毒,第5天相对第3天排毒鸡只多一些,但仍≤50%,平均病毒滴度≤2.75±0.58,I.V后第10天血清中可以检测到HI抗体,I.n后第14天才可检测到,两种接种途径相同时间I.v诱导产生的HI抗体滴度高于I.n,以上结果表明该病毒在鸡体内复制能力很低,鼻腔感染诱导机体产生抗体的时间晚、水平低。抗原性分析发现,该病毒与毒国际参考强毒株FPVRo34存在明显差别,属于两个抗原群,而和stEn79为同一抗原群。

关键词： H7N2亚型AIV 亚型鉴定 IVPI 致病性试验病毒滴定抗原性分析

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高效安全禽流感H5N1亚型灭活疫苗种毒株Rel的构建及其生物学特性和免疫原性研究

高效安全禽流感H5N1亚型灭活疫苗种毒株Rel的构建及其生物学特性...

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第12次学术研讨会

作者：田国彬李呈军李雁冰施建忠冯菊艳于康震陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室国家禽流感参考实验室(哈尔滨) 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室国家禽流感参考实验室(哈尔滨) 全国畜牧兽医总站(北京)

H5N1亚型禽流感病毒近年导致中国及东南亚地区的家禽和人感染、死亡,成为最重要的新发人畜共患传染病之一,疫苗免疫是控制本病的主要手段之一.本研究以对我国H5N1高致病力禽流感病毒流行分离株抗原性具广泛针对性的GD/1/96株为两个表面... 详细信息

H5N1亚型禽流感病毒近年导致中国及东南亚地区的家禽和人感染、死亡,成为最重要的新发人畜共患传染病之一,疫苗免疫是控制本病的主要手段之一.本研究以对我国H5N1高致病力禽流感病毒流行分离株抗原性具广泛针对性的GD/1/96株为两个表面基因HA和NA供体,通过定点突变和删除HA基因裂解位点与高致病力相关的碱性氨基酸,以流感病毒PR8为6个内部基因供体,利用反向基因操作技术手段,人工制造了一株高度抗原针对性、高度致弱、鸡胚生长适应良好的H5N1灭活疫苗种毒株***株不致死接种鸡胚,其鸡胚生长滴度(HA价)72小时可达11log2,比现有的野生型低致病性H5N2疫苗株生长滴度提高2~4倍,比高致病力H5N1亚型野生型分离株生长滴度提高8倍以上;该毒株对6周龄SPF感染试验静脉内接种致病指数(IVPI)为0,10<'6.0>EID<,50>大剂量鼻腔内接种鸡不发病、不致死,呼吸道和泄殖腔不排毒;对6~8周龄BALB/c小鼠的半数致死量大于10<'6.0>EID<,50>.结果证明Rel对鸡和哺乳动物无致病力.Rel株为种毒按常规方法制备的油乳剂灭活疫苗免疫SPF鸡后,一周内即可诱导出可检测的HI抗体,3周内平均HI抗体达到7log2以上,形成坚实的免疫保护,对我国不同时期分离H5N1高致病力禽流感病毒攻击不发病、不致死、不排毒.结果显示,Rel株用作H5亚型禽流感灭活疫苗种毒株,具有高度生物安全、鸡胚生长滴度高、抗原针对性强的突出优点,很适合作为种毒株用于大规模疫苗生产.

关键词：禽流感 H5N1 疫苗株反向基因操作生物学特性免疫原性禽流感病毒

来源：评论

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