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动物医学进展 2007年第7期28卷 56-60页

作者：万春和刘明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

M2蛋白是A型流感病毒所特有的一种结构保守的非糖基化的跨膜蛋白,主要在病毒脱壳时酸化病毒粒子的内部环境,在表面血凝素糖蛋白合成过程中作为质子通道调节高尔基体跨膜转移通道的pH。其核苷酸序列高度保守,几乎不发生变异。其25位~43... 详细信息

M2蛋白是A型流感病毒所特有的一种结构保守的非糖基化的跨膜蛋白,主要在病毒脱壳时酸化病毒粒子的内部环境,在表面血凝素糖蛋白合成过程中作为质子通道调节高尔基体跨膜转移通道的pH。其核苷酸序列高度保守,几乎不发生变异。其25位~43位氨基酸多肽是金刚烷胺类抗流感病毒药物的作用靶位,氨基酸极小变异都可能导致流感病毒抗药性的产生。M2蛋白胞外区域的氨基酸残基多肽（M2e）的特异性抗体可以在感染流感病毒的动物血清中检测出来,将M2e与相关佐剂联合使用可极大的提高机体对流感病毒的免疫力,在病毒感染中起重要作用,是一种潜在的交叉保护性抗原,常被用来探索具有广谱性和持久性的流感＂通用疫苗＂。

关键词： A型流感病毒 M2蛋白疫苗

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H1亚型猪流感病毒血凝素基因在昆虫细胞中的表达及其间接ELISA方法的初步建立

H1亚型猪流感病毒血凝素基因在昆虫细胞中的表达及其间接ELISA方...

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第七届全国病毒学学术研讨会暨第二届武汉现代病毒学国际研讨会

作者：万春和刘明刘春国张晓霁杨涛张云郭东春中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室

根据 GenBank 发表的 H1亚型猪流感 HA 基因序列设计引物,扩增出 HA 基因片段,将其克隆到 pFastBacGP67B 杆状病毒载体上,筛选阳性重组转座载体 pFastBacGP67B-H1,转化含有杆状病毒穿梭载体(bacmid)的 DH10Bac 感受态细

关键词：昆虫细胞猪流感流感病毒血凝素基因 ELISA

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流感病毒M2蛋白研究进展

流感病毒M2蛋白研究进展

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会

作者：万春和刘明刘春国张晓霁杨涛中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室

目前,每年的流感流行都会造成世界范围内约有10%～20%的人感染流感病毒,其中约有300～500万人会产生严重症状,并可导致大约25～50万人的死亡,给整个人类社会带来很大的经济负担。目前的禽流感疫情更是引起全世界的关注和恐慌,截至2007年... 详细信息

目前,每年的流感流行都会造成世界范围内约有10%～20%的人感染流感病毒,其中约有300～500万人会产生严重症状,并可导致大约25～50万人的死亡,给整个人类社会带来很大的经济负担。目前的禽流感疫情更是引起全世界的关注和恐慌,截至2007年4月2日,世界卫生组织(WHO)证实已经有288人感染禽流感,其中170人死亡。全世界已有超过218亿只的家禽染病死亡或遭扑杀,造成的经济损失高达400亿美元[1-2]。

关键词：流感病毒氨基酸序列胞外区金刚烷胺金刚乙胺

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重组细胞高产型H3N2猪流感病毒株的拯救

重组细胞高产型H3N2猪流感病毒株的拯救

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第七届全国病毒学学术研讨会暨第二届武汉现代病毒学国际研讨会

作者：杨涛刘明刘春国张云刘大飞陈浩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室

为拯救出一株能够在动物传代细胞中高水平复制的 H3N2亚型猪流感疫苗株, 本研究利用反向遗传操作技术,将 A/Goose/Dalian/3/01(H9N2)毒株的 PB1、PA、 NP、M、NS 基因和 A/PR/8毒株的 PB2基因作为内部基因与猪流感病毒

关键词：猪流感病毒

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H3N2亚型猪流感病毒进化分析及重组HA1蛋白间接ELISA诊断方法的建立

H3N2亚型猪流感病毒进化分析及重组HA1蛋白间接ELISA诊断方法的建...

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会

作者：丁选亚乔传玲杨焕良陈艳辛晓光韩庆功陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室

对2004～2005年中国某些省市猪群进行猪流感血清学和病原学调查研究,从1238份猪鼻棉拭子样品和死亡猪肺、气管样品中分离到5株H3N2亚型猪流感病毒。通过比较发现这5株病毒的HA基因同源性较高,达99%以上。对其中的一株病毒A/Swine/Guangd... 详细信息

对2004～2005年中国某些省市猪群进行猪流感血清学和病原学调查研究,从1238份猪鼻棉拭子样品和死亡猪肺、气管样品中分离到5株H3N2亚型猪流感病毒。通过比较发现这5株病毒的HA基因同源性较高,达99%以上。对其中的一株病毒A/Swine/Guangdong/9/05(H3N2)(缩写SW/GD/9/05)的8个基因片段进行了序列测定与分析,基于HA、PB2及NP基因绘制了系统进化树。结果表明分离株属于近期人流感病毒分支,其某些氨基酸位点发生了突变。将RT-PCR扩增的全长HA基因克隆到pMD-18T载体,

关键词：猪流感病毒 HA1 ELISA

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不同亚型流感病毒NP基因的原核表达研究

不同亚型流感病毒NP基因的原核表达研究

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第15届世界禽病大会、中国畜牧兽医学会2007年学术年会

作者：刘大飞杨涛刘明刘春国何利昆刘大程桑学波中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室辽宁省动物疫病预防控制中心莱阳市城厢兽医站黑龙江农垦总局畜牧兽医总站哈尔滨分站

为了进一步研究 A 型流感病毒核蛋白功能及在诊断中的应用。本研究采用 RT-PCR 技术分别扩增 A/Swine/Guangdong/LM2/05(H1N1)、A/Chicken/Guangdong/W2/04(H5N1)流感病毒的 NP 基因,分别将其克隆到原核表达载体 pET30(a)上,在大肠杆菌... 详细信息

为了进一步研究 A 型流感病毒核蛋白功能及在诊断中的应用。本研究采用 RT-PCR 技术分别扩增 A/Swine/Guangdong/LM2/05(H1N1)、A/Chicken/Guangdong/W2/04(H5N1)流感病毒的 NP 基因,分别将其克隆到原核表达载体 pET30(a)上,在大肠杆菌中进行诱导表达。SDS-PAGE 和 Western-Blotting 检测表明：H1N1亚型猪流感病毒 NP 蛋白得到表达,并且能分别与 H1N1和 H5N1亚型流感病毒的鼠高免血清发生特异性反应,具有良好的反应活性;而 H5N1亚型禽流感病毒的重组 NP 蛋白未获得表达。结论为以 NP 蛋白为诊断抗原的诊断试剂的开发、ELISA 诊断方法的建立、及蛋白功能的研究奠定了基础;本结果同时说明不同毒株的 NP 蛋白在大肠杆菌中的表达具有一定差异性。

关键词：流感病毒原核表达

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本地毛形线虫49 Ku ES蛋白结构基因的分子克隆及原核表达

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中国预防兽医学报 2007年第7期29卷 510-514页

作者：郑宝亮王秀荣路义鑫李冬梅闫清波宋铭忻郑州牧业工程高等专科学校生物工程系河南郑州450011 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院预防医学系寄生虫学教研室黑龙江哈尔滨150030

提取Trichinella nativa(***)肌幼虫的总RNA,用RT-PCR方法扩增出了编码*** 49 Ku ES蛋白的结构基因。基因克隆后测序,序列测定结果表明:目的基因TNPG长度为951 bp,核苷酸序列同已发表的Trichinella spiralis(***)相应的序列P49同源性为9... 详细信息

提取Trichinella nativa(***)肌幼虫的总RNA,用RT-PCR方法扩增出了编码*** 49 Ku ES蛋白的结构基因。基因克隆后测序,序列测定结果表明:目的基因TNPG长度为951 bp,核苷酸序列同已发表的Trichinella spiralis(***)相应的序列P49同源性为97.68%,所推导的氨基酸序列同源性为95.24%。将目的基因TNPG插入到原核表达载体pET-30a的BamHⅠ酶切位点处,并转化到感受态表达菌中进行诱导表达。结果显示TNPG在原核表达菌BL-21中获得了高效表达,表达产物为40.8 Ku的融合蛋白,表达量达到菌体总蛋白的22.8%。通过Western blot分析,表达产物可以被小鼠***和***阳性血清以及它们的中国地理株的小鼠血清特异性识别。

关键词：旋毛虫 nativa种旋毛虫 spiralis种 49 Ku ES蛋白基因序列 Westem blot分析

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H1亚型猪流感病毒血凝素基因在昆虫细胞中的表达及生物活性鉴定

H1亚型猪流感病毒血凝素基因在昆虫细胞中的表达及生物活性鉴定

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会

作者：万春和刘明刘春国张云张晓霁杨涛郭东春中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

将H1亚型猪流感病毒的血凝素(HA)基因克隆到pFastBacGP67A载体上,经酶切鉴定及测序筛选出阳性重组质粒后,转化DH10Bac感受态细胞与杆状病毒转移载体(bacmid)进行转座,通过蓝白斑筛选获得重组杆状病毒穿梭载体,在脂质体介导下转染sf9昆... 详细信息

将H1亚型猪流感病毒的血凝素(HA)基因克隆到pFastBacGP67A载体上,经酶切鉴定及测序筛选出阳性重组质粒后,转化DH10Bac感受态细胞与杆状病毒转移载体(bacmid)进行转座,通过蓝白斑筛选获得重组杆状病毒穿梭载体,在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞,经过三轮蚀斑纯化,获得重组杆状病毒rHA,再感染细胞,超声收获HA蛋白。通过血凝和血凝抑制、免疫印迹法、ELISA分析表明该蛋白得到表达,且具有与天然蛋白相似的生物活性,为研制猪流感病毒基因工程亚单位疫苗奠定基础,也可通过所表达的蛋白来研制猪流感ELISA检测试剂盒来做猪流感血清流行病学调查,为防控流感大流行提供参考。

关键词：猪流感病毒血凝素基因杆状病毒表达生物活性昆虫细胞

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DNA疫苗制备工艺研究

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新疆农业大学学报 2007年第4期30卷 38-40页

作者：夏俊姜永萍简子健左青山王岳陈化兰新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830052 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

以禽流感DNA疫苗pCAOH5转化大肠杆菌JM109后,利用发酵罐进行发酵培养。将菌体悬浮裂解中和后,经澄清和浓缩处理,利用阴离子交换色谱对其进行纯化。结果表明实验室规模的技术路线完全能够为质粒DNA的工业化制备奠定技术基础。

关键词： DNA疫苗禽流感发酵色谱质粒

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猪源H9N2亚型流感病毒HA基因的序列测定及真核表达

猪源H9N2亚型流感病毒HA基因的序列测定及真核表达

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会

作者：韩庆功乔传玲杨焕良陈艳辛晓光丁选亚陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室河南科技学院动物科学学院

利用RT-PCR扩增猪流感病毒A/Swine/Zhejiang/7/2004(H9N2)HA基因,测序后将其克隆到真核表达载体pCAGGS上,经酶切分析、PCR鉴定和测序验证,得到重组表达质粒pCAGGS-HA,之后将其转染293T细胞,48h后收集转染细胞样品,进行SDS-PAGE分析,结... 详细信息

利用RT-PCR扩增猪流感病毒A/Swine/Zhejiang/7/2004(H9N2)HA基因,测序后将其克隆到真核表达载体pCAGGS上,经酶切分析、PCR鉴定和测序验证,得到重组表达质粒pCAGGS-HA,之后将其转染293T细胞,48h后收集转染细胞样品,进行SDS-PAGE分析,结果显示HA蛋白获得了表达,经Western-blot检测,结果表明pCAGG-HA能够在体外瞬时表达具有免疫学活性的HA蛋白,通过免疫小鼠,对其免疫效果进行了初步研究。

关键词：猪流感病毒 HA基因序列测定真核表达

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