检索结果-内蒙古大学图书馆

农业生物技术学报 2006年第6期14卷 831-835页

作者：潘蔚绮刘明刘春国张云杨涛李景鹏中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部禽流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室 2. 东北农业大学

禽流感病毒(Avianinfluenzavirus)正在逐渐获得突破种间屏障感染哺乳动物的能力,揭示其获得此种能力的分子机制已经成为禽流感病毒的研究热点。A/Chicken/Guangdong/04(H5N1)是一株高致病性禽流感病毒,同时对BALB/c小鼠也具有高致病力... 详细信息

禽流感病毒(Avianinfluenzavirus)正在逐渐获得突破种间屏障感染哺乳动物的能力,揭示其获得此种能力的分子机制已经成为禽流感病毒的研究热点。A/Chicken/Guangdong/04(H5N1)是一株高致病性禽流感病毒,同时对BALB/c小鼠也具有高致病力。实验通过反向遗传操作技术对该病毒进行拯救,获得了拯救毒R-A/Chicken/Guangdong/04(R-CG)。R-CG与其亲本毒A/Chicken/Guangdong/04(W-CG)在胚半数感染量(EID50)、细胞培养半数感染量(TCID50)、对SPF鸡和BALB/c小鼠致病力等生物学特性保持一致。即R-CG与W-CG对鸡都为高致病力,静脉接种指数分别为2.88和2.91;R-CG与W-CG一样,以106EID50鼻腔感染BALB/c小鼠后,均能引起小鼠死亡,在小鼠脑、肺、肾和脾脏中都能分离到病毒,说明拯救的病毒与亲本毒一样,都可在小鼠体内有效复制,对小鼠具有高致病性。本实验成功地拯救了A/Chicken/Guangdong/04,拯救病毒R-CG可作为背景毒株,为研究禽流感病毒突破种间屏障感染哺乳动物的分子机制奠定了实验基础。

关键词：病毒拯救禽流感病毒 A/Chicken/Guangdong/04(H5N1) 小鼠

来源：评论

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SYBR Green Ⅰ荧光RT-PCR法检测H5亚型禽流感病毒

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黑龙江畜牧兽医 2006年第11期 13-15页

作者：刘丽玲王秀荣陈化兰孙凯魏萍中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

用2株不同致病力的H5亚型禽流感病毒(AIV)感染Madin-Darby canine kidney(MDCK)细胞,收集感染后6,12,24,48,72 h的病毒,提取总RNA,利用Rotor Gene RG3 000实时定量PCR仪对H5亚型AIV的HA基因进行检测,试图建立快速检测H5亚型AIV的real-time RT-PCR方法,并用所建立的方法对来自全国各地的疑似H5亚型AIV的病料和咽喉拭子、泄殖腔拭子346份进行检测。结果表明：农业部动物流感重点开放实验室建立的HA基因的teal-time RT-PCR方法可以检测到细胞培养物中和临床样品中是否含有H5亚型AIV,与常规RT-PCR比较,该方法更加特异、准确、快速。

关键词： real—time RT—PCR H5亚型禽流感病毒 HA基因

来源：评论

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AIV血凝素亚型同步检测基因芯片技术研究

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生物技术通报 2006年第C00期22卷 260-263,271页

作者：王秀荣刘丽玲包红梅乔传玲王煜孙凯孔宪刚陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

对流感病毒14个血凝素亚型的基因芯片检测技术进行了初步研究。通过RT-PCR克隆禽流感病毒血凝素基因片段,获得重组质粒。从重组质粒扩增大约500bp的DNA片段,浓缩后点到氨基化玻璃载体上,制成芯片。待检病毒样品用TRIzolLS提取RNA,反转... 详细信息

对流感病毒14个血凝素亚型的基因芯片检测技术进行了初步研究。通过RT-PCR克隆禽流感病毒血凝素基因片段,获得重组质粒。从重组质粒扩增大约500bp的DNA片段,浓缩后点到氨基化玻璃载体上,制成芯片。待检病毒样品用TRIzolLS提取RNA,反转录过程中用Cy5标记样品cDNAs。将标记样品与芯片杂交,扫描芯片上待检样品与芯片上捕捉探针的结合位点,杂交信号与预期设想一致。结果显示,DNA芯片技术可以提供一种有效的AIV血凝素亚型鉴别诊断方法。

关键词：禽流感病毒基因芯片血凝素亚型鉴定 AIV

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猪流感抗体间接ELISA诊断方法的建立

猪流感抗体间接ELISA诊断方法的建立

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届理事会第二次会议暨教学专业委员会第六届代表大会

作者：陈艳辛晓光杨焕良李婷李海燕乔传玲陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室／兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室／兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室／兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室／兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室／兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室／兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室／兽医生物技术国家重点实验室

猪流感病毒(SIV)感染的鸡胚尿囊液,经差速离心后,再经蔗糖密度梯度离心,提纯SIV,纯化的 SIV经NP-40处理并反复冻融,作为SI间接ELISA抗原,建立了间接ELISA诊断方法．对29份HI检测 SI为阴性血清的检测结果,经统计学分析,确定间接ELISA判... 详细信息

猪流感病毒(SIV)感染的鸡胚尿囊液,经差速离心后,再经蔗糖密度梯度离心,提纯SIV,纯化的 SIV经NP-40处理并反复冻融,作为SI间接ELISA抗原,建立了间接ELISA诊断方法．对29份HI检测 SI为阴性血清的检测结果,经统计学分析,确定间接ELISA判定标准被检血清OD490值≥0．20判定为阳性, OD490值<0．15判定为阴性。与HI的符合率达到92．8％．该实验方法敏感性高、重复性好,为猪流感抗体检测提供快速、准确、简便的诊断。

关键词： ELISA 包被抗原流感抗体猪流感

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H5N1亚型禽流感病毒NA基因在重组禽痘病毒中的表达

H5N1亚型禽流感病毒NA基因在重组禽痘病毒中的表达

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届理事会第二次会议暨教学专业委员会第六届代表大会

作者：王全英乔传玲张洪波陈化兰申之义中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室暨兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室暨兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室暨兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室暨兽医生物技术国家重点实验室内蒙古农业大学动物医学系

从含有禽流感病毒A／Goosc／Guangdong/1／96(H5N1)NA基因的质粒PMD18-TNA中切下NA基因片段,将其亚克隆到pSY538中的痘病毒早晚期启动子LP2EP2的下游,又将LacZ基因克隆到该质粒中,然后将同时含有NA及LacZ基因的片段再亚克隆到禽痘病毒载... 详细信息

从含有禽流感病毒A／Goosc／Guangdong/1／96(H5N1)NA基因的质粒PMD18-TNA中切下NA基因片段,将其亚克隆到pSY538中的痘病毒早晚期启动子LP2EP2的下游,又将LacZ基因克隆到该质粒中,然后将同时含有NA及LacZ基因的片段再亚克隆到禽痘病毒载体pSY681中,从而构建出表达AIVNA蛋白基因的重组禽痘病毒转移载体。用脂质体介导的方法将转移栽体转染已感染禽痘病毒S-FPV-017的鸡胚成纤维细胞,在X-gal存在的条件下,经过蓝白斑筛选、数轮蚀斑纯化、PCR和Wlestern-blot检测等,结果获得了能稳定表达该蛋白的重组禽痘病毒,为进一步探讨NA蛋白的免疫原性奠定了基础．

关键词：禽流感病毒 NA基因重组禽痘病毒

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SYBR GreenⅠ荧光RT-PCR方法检测禽流感病毒

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畜牧兽医学报 2006年第11期37卷 1189-1193页

作者：刘丽玲姜永萍王秀荣陈化兰魏萍中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室东北农业大学

为建立检测禽流感病毒(AIV)的SYBR Green I荧光RT-PCR方法,根据AIV的M基因保守区的核苷酸序列设计引物。用4株不同亚型的AIV感染MDCK细胞,收集感染6、12、24、48、72 h的病毒。另外采取169份鸡的泄殖腔拭子和咽喉拭子。对上述样品的M基... 详细信息

为建立检测禽流感病毒(AIV)的SYBR Green I荧光RT-PCR方法,根据AIV的M基因保守区的核苷酸序列设计引物。用4株不同亚型的AIV感染MDCK细胞,收集感染6、12、24、48、72 h的病毒。另外采取169份鸡的泄殖腔拭子和咽喉拭子。对上述样品的M基因进行检测,试图建立快速检测AIV的SYBR Green I荧光RT-PCR方法,并与普通RT-PCR方法和传统的病毒滴定方法进行比较。结果表明:此次建立的检测AIV的SYBRGreen I荧光RT-PCR方法能检测到感染MDCK细胞后72 h的AIV,对169份泄殖腔拭子和咽喉拭子中的AIV检出率为5.33%(9/169),而普通RT-PCR方法检出率为6.51%(11/169),病毒滴定检出率为5.62(9/160)。对其他病毒(NDVI、BDVI、BV、VA)则未检测到,且整个检测过程只需4 h,表明该方法特异、准确、快速。

关键词：禽流感病毒 SYBRGreenIRT-PCR RT-PCR 病毒滴定检测

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H5亚型禽流感DNA疫苗的免疫保护持续期研究

H5亚型禽流感DNA疫苗的免疫保护持续期研究

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十三次学术研讨会

作者：姜永萍张平静左青山夏俊刘丽玲陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室

对H5亚型禽流感DNA疫苗pCAGGoptiHA5免疫SPF鸡、商品蛋鸡的免疫保护持续期进行了测定。pCAGGoptiHA5以10μg剂量加强免疫3周龄SPF鸡,在免疫后4周、8周、28周以及50周的攻毒试验中,pCAGGoptiHA5免疫鸡均可100%的抵抗高致病性禽流感病毒Gs... 详细信息

对H5亚型禽流感DNA疫苗pCAGGoptiHA5免疫SPF鸡、商品蛋鸡的免疫保护持续期进行了测定。pCAGGoptiHA5以10μg剂量加强免疫3周龄SPF鸡,在免疫后4周、8周、28周以及50周的攻毒试验中,pCAGGoptiHA5免疫鸡均可100%的抵抗高致病性禽流感病毒Gs/GD/1/96(H5N1)的致死性攻击,但在免疫后50周用DK/SHNH/16/04(H5N1)攻击时,其死亡保护率为7/8。DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA5 50μg首次免疫5周龄商品蛋鸡,首次免疫后3周以同样剂量和途径两次免疫,在开产前(免疫后16周)进行第三次免疫,在免疫后4周、8周、18周、28周以及50周的攻毒试验中,pCAGGoptiHA5免疫蛋鸡均可100%的抵抗高致病性禽流感病毒的致死性攻击。结果表明,禽流感DNA疫苗pCAGGoptiHA5可以诱导长达一年的免疫保护,具有极高的现地应用价值和开发前景。

关键词：禽流感H5亚型 DNA疫苗免疫保护持续期

来源：评论

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H9N2亚型猪流感病毒HA基因的克隆及体外表达

H9N2亚型猪流感病毒HA基因的克隆及体外表达

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届理事会第二次会议暨教学专业委员会第六届代表大会

作者：韩庆功乔传玲杨焕良陈艳辛晓光陈化兰赵玉军中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室暨兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室暨兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室暨兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室暨兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室暨兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室暨兽医生物技术国家重点实验室沈阳农业大学畜牧兽医学院

从2004年全国动物流感调查分离到的一株猪流感病毒经亚型鉴定确定为H9N2,命名为 A／Swine／Zhejiang／7／2004(H9N2),利用RT-PCR扩增HA基因,测序后将其克隆到真核表达载体pCAGGSk, 转染293T细胞,PAWestern-blot检测所克隆的载体pCAGGHA... 详细信息

从2004年全国动物流感调查分离到的一株猪流感病毒经亚型鉴定确定为H9N2,命名为 A／Swine／Zhejiang／7／2004(H9N2),利用RT-PCR扩增HA基因,测序后将其克隆到真核表达载体pCAGGSk, 转染293T细胞,PAWestern-blot检测所克隆的载体pCAGGHA在体外能够瞬时表达具有免疫学活性的HA蛋白,这将为下一步开展DNA疫苗的免疫奠定基础。

关键词：猪流感病毒 HA基因克隆表达

来源：评论

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H5亚型禽流感DNA疫苗的最小免疫剂量测定

H5亚型禽流感DNA疫苗的最小免疫剂量测定

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十三次学术研讨会

作者：姜永萍张洪波张平静左青山夏俊陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室

将H5亚型禽流感DNA疫苗pCAGGoptiHA5对SPF鸡的最小免疫剂量进行了测定。分别以50μg、10μg、5μg和1μg不同剂量pCAGGoptiHA5一次免疫,50μg和10μg剂量一次免疫可对免疫鸡形成100%的保护(不发病、不致死),5μg和1μg pCAGGoptiHA5一... 详细信息

将H5亚型禽流感DNA疫苗pCAGGoptiHA5对SPF鸡的最小免疫剂量进行了测定。分别以50μg、10μg、5μg和1μg不同剂量pCAGGoptiHA5一次免疫,50μg和10μg剂量一次免疫可对免疫鸡形成100%的保护(不发病、不致死),5μg和1μg pCAGGoptiHA5一次免疫可对免疫鸡形成62.5%(5/8)和87.5(7/8)的死亡保护;分别以50μg、10μg、5μg和1μg不同剂量pCAGGoptiHA5两次免疫后,50μg和10μg剂量两次免疫后可对免疫鸡形成100%完全保护(不发病、不致死、不排毒),5μg和1μg pCAGGoptiHA5两次免疫可对免疫鸡形成100%的保护(不发病、不致死)。结果表明,DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA5能使免疫鸡获得保护的最小免疫剂量为1μg,具有很高的开发应用前景。

关键词：禽流感 H5亚型 DNA疫苗最小免疫剂量

来源：评论

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H5N1禽流感病毒HA基因在昆虫细胞中的表达及生物活性鉴定

H5N1禽流感病毒HA基因在昆虫细胞中的表达及生物活性鉴定

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十三次学术研讨会

作者：张晓霁刘明张云刘春国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室

经RT—PCR扩增了1株H5N1亚型禽流感病毒的血凝素基因(HA),将其克隆到pFastBacHTA载体上,经酶切鉴定及测序筛选出阳性重组载体,将其转化DH10Bac感受态细胞与杆状病毒转移载体(bacmid)进行转座,通过蓝白斑筛选获得重组杆状病毒载体,经PCR... 详细信息

经RT—PCR扩增了1株H5N1亚型禽流感病毒的血凝素基因(HA),将其克隆到pFastBacHTA载体上,经酶切鉴定及测序筛选出阳性重组载体,将其转化DH10Bac感受态细胞与杆状病毒转移载体(bacmid)进行转座,通过蓝白斑筛选获得重组杆状病毒载体,经PCR鉴定得到单一的HA条带。重组杆状病毒载体在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞。通过蛋白质电泳、免疫印迹法、血凝试验和血凝抑制试验分析表明:在sf9昆虫细胞中高效表达了分子量约66Kd的血凝素蛋白,用此蛋白免疫SPF鸡可产生较高效价的抗体,说明该蛋白具有与天然蛋白相似的生物活性。

关键词：禽流感病毒 H5N1 血凝素杆状病毒表达

来源：评论

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