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第六次人畜共患病学术交流会

作者：陈君彦李海燕陈化兰杨焕良李泽君于康震毕英佐中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室(哈尔滨) 内蒙古农业大学动物科学与医学学院(呼和浩特) 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室(哈尔滨) 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室(哈尔滨) 全国畜牧兽医总站(北京) 华南农业大学动物科学学院(广州)

本研究对2001年中国华南及东北地区的15株H1N1亚型猪流感病毒(SIV)分离株的神经氨酸酶(NA)基因进行了序列测定和分析,并绘制了进化树.研究结果表明,15株H1N1亚型SIV的NA基因核甘酸全长为1458bp,共编码477个氨基酸.15株H1N1亚型SIV的NA... 详细信息

本研究对2001年中国华南及东北地区的15株H1N1亚型猪流感病毒(SIV)分离株的神经氨酸酶(NA)基因进行了序列测定和分析,并绘制了进化树.研究结果表明,15株H1N1亚型SIV的NA基因核甘酸全长为1458bp,共编码477个氨基酸.15株H1N1亚型SIV的NA蛋白在58、63、68、88、146位都存在糖基化位点;但是,SW/GD/714/01和SW/GD/771/01在50位存在一糖基化位点,为"-NQS-",其余13株H1N1亚型SIV在50位无糖基化位点,却在44位存在"-NHS-"的糖基化位点;而且,SW/GD/714/01、SW/GD/771/01和其余13株H1N1亚型SIV的NA蛋白头部抗原位点,在328、332、334、339、340位的氨基酸不同;但是,15株H1N1亚型SIV在366位的氨基酸均为N,与所有参考毒株在此位的S不同.经同源性比较结果和进化树分析可见,SW/GD/714/01和SW/GD/771/01的NA基因明显属于类禽型H1N1猪谱系,其余13株H1N1亚型SIV的NA基因皆属于古典型H1N1猪谱系.

关键词：猪流感病毒神经氨酸酶序列分析分子演化正粘病毒科

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用鸡体偏嗜性密码子对H5亚型禽流感病毒HA基因的优化与构建及其DNA疫苗体外表达研究

用鸡体偏嗜性密码子对H5亚型禽流感病毒HA基因的优化与构建及其DN...

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中国畜牧兽医学会2004年学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会

作者：姜永萍李呈军张洪波步志高张芳芳于康震陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室(黑龙江哈尔滨) 农业部畜牧兽医总站(北京)

不同物种间细胞在蛋白翻译过程中具有密码子使用的偏嗜性,鸡与A型流感病毒保护性免疫原HA蛋白氨基酸密码子使用频率存在着明显差异.为此,利用寡核苷酸合成、重叠延伸PCR及限制酶切法构建了密码子优化的A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[GD/... 详细信息

不同物种间细胞在蛋白翻译过程中具有密码子使用的偏嗜性,鸡与A型流感病毒保护性免疫原HA蛋白氨基酸密码子使用频率存在着明显差异.为此,利用寡核苷酸合成、重叠延伸PCR及限制酶切法构建了密码子优化的A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[GD/1/96(H5N1)]的HA基因(optiHA),并将其插入CMV启动子表达载体pCI构建了H5亚型DNA疫苗质粒pCIoptiHA,将含有GD/1/96(H5N1)野生型HA基因的质粒pCIHA和pCIoptiHA分别转染293T细胞,间接免疫荧光检测转染后24-48小时293T细胞中瞬时表达的HA抗原蛋白;Western-blot证实上述2种表达质粒均可正确表达H5亚型HA抗原蛋白,结果表明密码子优化的基因optiHA体外瞬时表达水平显著高于野生型HA基因.这一结果为进一步开展SPF鸡免疫保护效果的比较研究奠定了基础.

关键词： HA基因密码子优化重叠延伸PCR 间接免疫荧光 Western blot检测禽流感病毒 DNA疫苗体外表达

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鸡体偏嗜性密码子优化免疫原基因增强H5亚型禽流感DNA疫苗免疫保护效果

鸡体偏嗜性密码子优化免疫原基因增强H5亚型禽流感DNA疫苗免疫保...

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中国畜牧兽医学会2004年学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会

作者：姜永萍张洪波李呈军步志高张芳芳于康震陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室(黑龙江哈尔滨) 农业部畜牧兽医总站(北京)

利用寡核苷酸合成、重叠延伸PCR法及限制酶切法构建了密码子优化的A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[GD/1/96(H5N1)]的HA基因(optiHA),并将其插入CMV启动子表达载体pCI构建了H5亚型DNA疫苗质粒pCIoptiHA.将pCIoptiHA和表达GD/1/96(H5N1)HA基因的DNA疫苗质粒pCIHA通过间接免疫荧光法和Western-blot分析检测转染293T细胞后瞬时表达的HA抗原蛋白;随之将pCIoptiHA及pCIHA分别以100μg和10μg剂量一次免疫3周龄SPF鸡,4周后用100LD<,50>的HPAIV GD/1/96(H5N1)鼻腔途径进行攻击.结果,间接免疫荧光法和Western-blot分析表明密码子优化的HA基因表达水平显著高于野生型HA基因;免疫SPF鸡后,100μg pCIoptiHA可形成75﹪的免疫保护,100μg pCIHA可形成50﹪的免疫保护;10μg pCIoptiHA可形成对免疫鸡75﹪的部分免疫保护,而10μg pCIHA则基本不能形成免疫保护;pCIoptiHA诱导的HI抗体水平远远高于pCIHA.试验结果表明,HA基因密码子的优化可显著提高HA基因体外表达水平和H5亚型禽流感DNA疫苗诱导的保护性抗体免疫反应水平,增强免疫保护效果.

关键词：禽流感 H5亚型 DNA疫苗免疫保护密码子优化

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表达载体的优化显著增强H5亚型禽流感DNA疫苗免疫保护效果

表达载体的优化显著增强H5亚型禽流感DNA疫苗免疫保护效果

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中国畜牧兽医学会2004年学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会

作者：姜永萍张洪波李呈军张芳芳步志高于康震陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室(黑龙江哈尔滨) 农业部畜牧兽医总站(北京)

CAGGS含鸡β-actin启动子和CMV增强子,是一种高效真核表达载体.将A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[GD/1/96(H5N1)]的HA基因插入pCAGGS,构建了DNA疫苗质粒pCAGGHA,将pCAGGHA和表达GD/1/96(H5N1)HA基因的质粒pCIHA分别转染293T细胞,间接免疫荧光检测转染后24-48小时293T细胞中瞬时表达的HA抗原蛋白,Western-blot证实上述2种表达质粒均可正确表达H5亚型HA抗原蛋白,结果载体pCAGGS表达水平显著高于载体pCI.为进一步评估不同表达载体对H5亚型禽流感DNA疫苗免疫效果的影响,DNA疫苗质粒pCIHA及pCAGGHA分别以100μg和10μg剂量一次免疫3周龄SPF鸡,4周后分别用100LD<,50>的HPAIV GD/1/96(H5N1)鼻腔途径进行攻击.结果,100μg pCAGGHA可形成100﹪的免疫保护,100μg pCIHA可形成50﹪的免疫保护;10μg pCAGGHA可形成对免疫鸡100﹪的免疫保护,而10μg pCIHA则基本不能形成免疫保护;pCAGGHA诱导的HI抗体水平远远高于pCIHA.试验结果表明,鸡β-actin启动子表达载体pCAGGS可显著提高HA基因体外表达水平和H5亚型禽流感DNA疫苗诱导的保护性抗体免疫反应水平,增强免疫保护效果.

关键词：禽流感 H5亚型 DNA疫苗免疫保护表达载体

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H5亚型禽流感重组鸡痘病毒活载体疫苗对商品鸡的免疫效力

H5亚型禽流感重组鸡痘病毒活载体疫苗对商品鸡的免疫效力

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第12次学术研讨会

作者：乔传玲井波于康震田国彬陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室及兽医生物技术国家重点实验室(哈尔滨) 全国畜牧兽医总站(北京)

将共表达禽流感病毒(AIV)HA与NA基因的重组鸡痘病毒rFPV-HA-NA在鸡胚成纤维细胞(CEF)上增殖,制备成冻干疫苗,经翅下刺种途径接种商品鸡,免疫3周后用100LD的高致病力禽流感病毒(HPAIV)A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)进行攻击.结果重组鸡... 详细信息

将共表达禽流感病毒(AIV)HA与NA基因的重组鸡痘病毒rFPV-HA-NA在鸡胚成纤维细胞(CEF)上增殖,制备成冻干疫苗,经翅下刺种途径接种商品鸡,免疫3周后用100LD<,50>的高致病力禽流感病毒(HPAIV)A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)进行攻击.结果重组鸡痘病毒疫苗免疫鸡后诱导产生了高水平的HI抗体,能够完全抵抗H5N1亚型病毒的致死性攻击,对雏鸡禽流感母源抗体的消长情况进行了检测,结果母源抗体HI效价的峰值在7日龄时出现,而后随雏鸡日龄的增大而下降,在35日龄时趋于消失.雏鸡母源抗体对重组疫苗的免疫效力有一定的干扰.

关键词：禽流感重组鸡痘病毒疫苗免疫效力 H5亚型

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中国H5亚型禽流感病毒2004年分离株HA基因的序列分析

中国H5亚型禽流感病毒2004年分离株HA基因的序列分析

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第12次学术研讨会

作者：邓国华王劭余丹丹李雁冰田国彬杨汉春于康震陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室(哈尔滨) 中国农业大学动物医学院

本研究对中国2004年发生高致病性禽流感疫情的38个疫点的H5N1亚型病毒分离株进行HA基因序列测定和分析发现,HA基因的裂解位点有部分毒株比其他毒株少1了一个碱性氨基酸,其编码的可能糖基化位点有较大差异,除了有7个共有的糖基化位点以外... 详细信息

本研究对中国2004年发生高致病性禽流感疫情的38个疫点的H5N1亚型病毒分离株进行HA基因序列测定和分析发现,HA基因的裂解位点有部分毒株比其他毒株少1了一个碱性氨基酸,其编码的可能糖基化位点有较大差异,除了有7个共有的糖基化位点以外,还有16个毒株在170位多了一个潜在的糖基化位点,DK/HuNYY/7004毒株在156多了一个糖基化位点,但是所有毒株的受体结合位点完全一致,而在受体结合部的两侧有一定的差异.从遗传进化树上来看,我国2004年H5亚型禽流感病毒分离株的HA基因和我国早期毒株CKNX/48/02,DKHUN/40/02和DKZJ/52/00有较为密切关系,而与香港以及东南亚国家毒株的基因有着较大的差异.

关键词： H5N1禽流感病毒序列分析分子演化分离鉴定

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H1N1亚型猪流感病毒中国分离株血凝素基因分子演化的研究

H1N1亚型猪流感病毒中国分离株血凝素基因分子演化的研究

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第六次人畜共患病学术交流会

作者：陈君彦李海燕申之义陈化兰于康震毕英佐中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室(哈尔滨) 内蒙古农业大学动物科学与医学学院(呼和浩特) 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室(哈尔滨) 内蒙古农业大学动物科学与医学学院(呼和浩特) 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室(哈尔滨) 全国畜牧兽医总站(北京) 华南农业大学动物科学学院(广州)

本研究对2001年中国华南及东北地区的15株H1N1亚型猪流感病毒(SIV)分离株的血凝素(HA)基因进行了序列测定和分析,并绘制了进化树.研究结果表明,15株H1N1 SIV的HA基因核甘酸全长为1778bp,共编码566个氨基酸;而且,15株H1N1亚型SIV的HA1蛋... 详细信息

本研究对2001年中国华南及东北地区的15株H1N1亚型猪流感病毒(SIV)分离株的血凝素(HA)基因进行了序列测定和分析,并绘制了进化树.研究结果表明,15株H1N1 SIV的HA基因核甘酸全长为1778bp,共编码566个氨基酸;而且,15株H1N1亚型SIV的HA1蛋白在10、11、23、87、287位都存在高度保守的糖基化位点,此外,在276位多了一个"-NTT-"糖基化位点,与参考毒株SW/IW/930/01一致,这可能是近期H1N1亚型SIV的一个分子特征.本研究进一步发现,15株H1N1亚型SIV的HA基因切割位点氨基酸组成为IPSIQSR↓G,具有非高致病力毒株分子特征;而其受体结合位点在HA蛋白上第226位是Q,第228位为G,可能具有感染禽的潜力.经同源性比较,15株H1N1亚型SIV的HA基因与古典型H1N1猪谱系中的WIS/4754/94的同源性相对最高,核苷酸和氨基酸序列同源性分别达到95.7~96.1﹪和96.5~97.2﹪.由同源性比较结果和进化树分析可见,15株H1N1亚型SIV的HA基因皆属于古典型的H1N1猪谱系.

关键词：猪流感病毒血凝素序列分析分子演化正粘病毒科流感病毒

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猪流感病毒A/Swine/Inner Mongolia/547/01分离株神经氨酸酶基因的克隆及真核表达

猪流感病毒A/Swine/Inner Mongolia/547/01分离株神经氨酸酶基因...

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第六次人畜共患病学术交流会

作者：赵朴李海燕杨焕良陈化兰于康震卢中华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点开放实验室(黑龙江哈尔滨) 全国畜牧兽医总站(北京) 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点开放实验室(黑龙江哈尔滨) 河南农业大学牧医工程学院(河南郑州)

GenBank中登录的猪流感病毒参照序列设计了扩增神经氨酸酶(NA)基因的特异性引物.从猪流感抗毒A/Swine/Inner Mongolia/547/01(H3N2)株感染的鸡胚液中直接提取病毒RNA,经RT-PCR扩增后将其克隆到pMD18-T载体上,进行序列测定和拼接.用Hind... 详细信息

GenBank中登录的猪流感病毒参照序列设计了扩增神经氨酸酶(NA)基因的特异性引物.从猪流感抗毒A/Swine/Inner Mongolia/547/01(H3N2)株感染的鸡胚液中直接提取病毒RNA,经RT-PCR扩增后将其克隆到pMD18-T载体上,进行序列测定和拼接.用HindⅢ酶切后,亚克隆到杆状病毒转移载体pMeLBacB上,得到重组转移载体pMelBacNA,然后与线性化杆状病毒DNA(Bac-N-Blue<'TM>DNA)共转染于sf9昆虫细胞.经3轮噬斑纯化,提取其DNA经PCR鉴定,获得重组杆状病毒株.SDS-PAGE结果显示,目的基因已获得表达,Western blot和神经氨酸酶活性检测结果显示表达产物具有良好的免疫原性和神经氨酸酶活性,为SIV亚单位疫苗和NA基因的深入研究奠定了基础.

关键词：猪流感病毒神经氨酸酶基因重组杆状病毒真核表达

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基因芯片的研究进展

基因芯片的研究进展

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会

作者：刘丽玲王秀荣陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室

基因芯片(gene chip)又称DNA微阵列(DNA microarray),DNA芯片。它是将许多特定的寡核苷酸片段或基因片段作为探针,有规律地固定于支持物上,然后与待测的荧光素或放射性同位素标记的核酸样品按碱基配对原理进行杂交,再通过激光共聚焦荧... 详细信息

基因芯片(gene chip)又称DNA微阵列(DNA microarray),DNA芯片。它是将许多特定的寡核苷酸片段或基因片段作为探针,有规律地固定于支持物上,然后与待测的荧光素或放射性同位素标记的核酸样品按碱基配对原理进行杂交,再通过激光共聚焦荧光检测系统等对芯片进行扫描,对每一探针上的荧

关键词：寡核苷酸阵列基因芯片基因表达图谱人类基因组杂交信号酿酒酵母

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DNA微阵列与基因表达研究概况

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动物医学进展 2003年第6期24卷 15-18页

作者：刘丽玲王秀荣陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

DNA微阵列技术是 90年代兴起的一种对成百上千甚至上万个基因同时进行检测的新技术 ,它具有高通量和并行化的特点 ,广泛应用于基因表达、预测基因功能、检测基因突变和多态性分析、发现新药物和药物靶器官以及疫苗设计等方面。文章对 DN... 详细信息

DNA微阵列技术是 90年代兴起的一种对成百上千甚至上万个基因同时进行检测的新技术 ,它具有高通量和并行化的特点 ,广泛应用于基因表达、预测基因功能、检测基因突变和多态性分析、发现新药物和药物靶器官以及疫苗设计等方面。文章对 DNA微阵列的基本原理、DNA微阵列制备技术、杂交信号检测以及数据分析。 c DNA微阵列与细胞周期相关基因表达、细菌基因表达、病毒基因表达、肿瘤基因表达进行了概述。

关键词： DNA微阵列基因表达技术原理杂交信号检测基因功能基因突变多态性分析

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