检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2024年第7期46卷 723-730,746页

作者：崔露刘柘一张宇韩宗玺刘胜旺李海中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室禽呼吸道传染病创新团队黑龙江哈尔滨150069

鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)是一种严重危害我国和世界养禽业的重要病原。本研究以ILTV-LJS09株感染的鸡LMH细胞系作为研究模型,对该病毒的全基因组转录谱分析,采用基因富集分析(GSEA)分析细胞中的信号通路。结果发现MAPK通路是ILTV感染... 详细信息

鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)是一种严重危害我国和世界养禽业的重要病原。本研究以ILTV-LJS09株感染的鸡LMH细胞系作为研究模型,对该病毒的全基因组转录谱分析,采用基因富集分析(GSEA)分析细胞中的信号通路。结果发现MAPK通路是ILTV感染LMH细胞后最显著激活的通路。进一步采用western blot鉴定,结果显示ILTV感染可以显著激活宿主细胞p38/MAPK信号通路。本研究同时采用脱氢紫堇碱(DHC)和佛波酯(PMA)作为p38/MAPK激活剂,采用特异性荧光定量PCR检测病毒基因组拷贝数,通过测定病毒的TCID_(50)检测病毒滴度,利用荧光定量PCR检测细胞中代谢相关基因的转录水平,使用高内涵成像技术结合Annexin V-FITC/碘化丙啶双染法检测细胞凋亡,从而探究药理激活p38/MAPK对ILTV感染的影响。病毒特异性荧光定量PCR检测结果显示,DHC和PMA均显著降低ILTV基因组的复制(P<0.05)。TCID_(50)测定结果显示,DHC和PMA还显著抑制ILTV感染性病毒粒子的增殖(P<0.05)。荧光定量PCR检测结果显示,无论DHC还是PMA对感染细胞代谢基因的总体转录水平均无明显影响。高内涵成像技术检测结果显示,DHC和PMA显著加剧ILTV感染细胞的凋亡(P<0.05)。综上所述,本研究结果显示DHC和PMA均能够在不影响感染细胞代谢基因表达的情况下,通过加剧ILTV感染细胞的凋亡有效抑制ILTV的感染。本研究在ILTV体外感染模型中证明药理激活p38/MAPK信号通路具有高效的抗病毒作用,为治疗ILTV的感染提供了新的思路,对其他疱疹病毒感染的防治研究也具有借鉴意义。

关键词：传染性喉气管炎病毒 p38丝裂原活化蛋白激酶转录谱凋亡

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鸡传染性喉气管炎病毒gG蛋白间接竞争ELISA方法的建立及初步应用

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中国预防兽医学报 2023年第7期45卷 704-709,728页

作者：郭鹏宇赵妍刘胜旺中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室禽呼吸道传染病创新团队黑龙江哈尔滨150069

鸡传染性喉气管炎是由鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)引起鸡的一种急性、高度接触性呼吸道传染病。为建立检测该病毒g G蛋白的间接竞争ELISA方法,本研究以原核系统表达ILTV g G蛋白,并采用切胶纯化该重组g G蛋白(rg G)后经western blot检... 详细信息

鸡传染性喉气管炎是由鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)引起鸡的一种急性、高度接触性呼吸道传染病。为建立检测该病毒g G蛋白的间接竞争ELISA方法,本研究以原核系统表达ILTV g G蛋白,并采用切胶纯化该重组g G蛋白(rg G)后经western blot检测纯化的rg G (P-rg G)与本研究室制备的g G蛋白单克隆抗体(MAb) 3C8的反应原性。将MAb 3C8采用Protein G亲和层析柱纯化后与HRP偶联(HRP-3C8),利用间接ELISA法测定纯化HRP-3C8的效价。结果显示,P-rg G与MAb 3C8发生了特异性反应,在30 ku处出现特异性条带。纯化的HRP-3C8效价达1∶51 200。以P-rg G作为包被抗原,以纯化的HRP-3C8作为检测抗体,通过对各反应条件优化后初步建立了ILTV g G蛋白间接竞争ELISA (ic-ELISA)检测方法。条件优化结果显示,P-rg G包被量为12.5 ng/孔,HRP-3C8抗体稀释度为1∶10 000,将待检样品与HRP-3C8抗体在37℃孵育40 min后加入ELISA板再反应20 min,TMB底物反应10 min。将待检样品的抑制率(PI)≥31.08%判为阳性;采用该方法分别检测ILTV、新城疫病毒(NDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、鸡痘病毒(FPV),通过计算PI,评估该方法的特异性;按照Reed-Muench法测定ILTV K317株的鸡胚半数感染量(EID_(50)),再将该病毒2倍倍比稀释(1∶10~1∶2 560)后,以该ic-ELISA方法检测,评估该方法的敏感性;利用同批次和不同批次P-rg G分别包被ELISA板,采用该ic-ELISA方法检测ILTV阳性及阴性样品,评估该方法的重复性。结果显示,该方法除了能检测ILTV外,其余相关病毒均为阴性结果;将ILTV稀释至1∶320时检测结果仍为阳性,相当于75 EID_(50)/0.1 m L;批内、批间重复性试验的变异系数均小于10%。利用该方法及荧光定量PCR (q PCR)分别检测50份临床ILTV、IBV和FPV感染鸡的口咽拭子和喉头组织、10份ILTV活疫苗,该方法检测结果显示,阳性检测率为73.3%(44/60),阴性率为26.7%(16/60)。q PCR的检测结果显示,阳性检测率为81.7%(49/60),阴性率为18.3%(11/60),二者的阴、阳性符合率分别为90.9%和87.8%,总符合率为88.3%。本研究建立的ILTV g G蛋白ic-ELISA方法特异性强、敏感性高、重复性好,可以用于检测实验室和临床ILTV感染的不同样品,为ILTV及其疫苗的检测提供了新的技术手段。

关键词：鸡传染性喉气管炎病毒 gG蛋白单克隆抗体间接竞争ELISA

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Rho GTP酶和肌动蛋白细胞骨架对新城疫病毒在细胞间传播的影响

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中国兽医科学 2024年第10期54卷 1287-1294页

作者：张智颖孙军峰师乾凯赵冉王芳芳李慧昕韩宗玺刘胜旺中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室禽呼吸道传染病创新团队黑龙江哈尔滨150069

为探究Rho GTP酶及肌动蛋白细胞骨架对新城疫病毒(NDV)诱导的细胞间膜融合以及病毒复制和扩散的影响,本研究利用特异性针对Rho GTP酶和肌动蛋白细胞骨架的抑制剂处理细胞,评估其对NDV复制以及细胞间膜融合的影响,结果显示,抑制剂处理能... 详细信息

为探究Rho GTP酶及肌动蛋白细胞骨架对新城疫病毒(NDV)诱导的细胞间膜融合以及病毒复制和扩散的影响,本研究利用特异性针对Rho GTP酶和肌动蛋白细胞骨架的抑制剂处理细胞,评估其对NDV复制以及细胞间膜融合的影响,结果显示,抑制剂处理能够显著抑制NDV在细胞中的复制滴度以及病毒引起的细胞间膜融合。激光共聚焦观察结果显示,NDV的融合蛋白(F)与细胞的肌动蛋白存在共定位分布。通过反向遗传技术构建了表达绿色荧光蛋白的重组NDV,并通过共感染培养试验证实了Rho GTP酶和肌动蛋白细胞骨架参与了NDV在细胞间的扩散和传播。本研究结果为深入探索Rho GTP酶和肌动蛋白细胞骨架在NDV感染生活周期中的作用奠定了基础。

关键词：新城疫病毒 Rho GTP酶肌动蛋白细胞骨架细胞间传播

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鹅源class I类NDV生物学特性的研究及荧光定量RT-PCR检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2024年第9期46卷 923-930页

作者：李长宇孙军峰赵冉王芳芳韩宗玺刘胜旺黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室/禽呼吸道传染病创新团队黑龙江哈尔滨150069

为了解鹅源class I类新城疫病毒(NDV)的生物学特性,本研究以2022年在安徽活禽市场的鹅中分离到的AH713/22株为研究对象,测定其全基因组序列,分析其基因组分子特征和遗传进化特性;将AH713/22株感染鸡胚,接种1日龄雏鸡脑内,分析其致病性;... 详细信息

为了解鹅源class I类新城疫病毒(NDV)的生物学特性,本研究以2022年在安徽活禽市场的鹅中分离到的AH713/22株为研究对象,测定其全基因组序列,分析其基因组分子特征和遗传进化特性;将AH713/22株感染鸡胚,接种1日龄雏鸡脑内,分析其致病性;利用制备的单因子血清进行交叉血凝抑制试验,分析其抗原性;将AH713/22株56℃水浴不同时间后检测HA效价,分析其耐热特性。结果显示,AH713/22株基因组长15198 bp,具有典型的class I类NDV的基因组结构和分子特征,属于基因1.1.2亚型。F蛋白裂解位点为ERQERL,HN蛋白长度不同于已往报道的病毒株,含有618个氨基酸;鸡胚平均死亡时间(MDT)为134 h,1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)为0.32,表明AH713/22属于弱毒株;抗原性检测结果显示AH713/22株与class II类基因II型NDV以及class I类代表性NDV之间存在不同程度的抗原性差异;耐热性试验显示AH713/22株在56℃热处理60 min后HA效价仍无显著变化,表明AH713/22株具有优良的热稳定性。进一步基于class I类基因1.1.2亚型NDV F基因的序列比对分析,针对其保守区域设计引物和探针,建立了荧光定量RT-PCR检测方法,结果显示该方法对质粒标准品的检测限为10^(2)拷贝数/μL,且能够特异性的检测class I类1.1.2亚型NDV,与其他常见的禽呼吸道病原核酸均无交叉反应。该方法用于临床样品检测结果与常规PCR检测结果一致。本研究系统鉴定了一株鹅源class I类NDV的遗传和分子生物学特性,加深了对我国class I类NDV遗传演化的认知,并建立了适用于我国优势基因型(1.1.2亚型)NDV的检测方法,为class I类NDV的监测和流行病学调查提供了技术支撑。

关键词：新城疫病毒鹅分子特征抗原性热稳定性荧光定量RT-PCR方法

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传染性支气管炎病毒诱导Vero细胞发生自噬促进病毒的复制

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中国兽医科学 2024年第8期54卷 1019-1026页

作者：杨雪晴孙军峰李慧昕韩宗玺刘胜旺黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室禽呼吸道传染病创新团队黑龙江哈尔滨150069

为探究禽传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)能否诱导细胞自噬及其对病毒复制的影响,本研究利用IBV细胞适应株CEA接种DF-1和Vero细胞,通过Western-blot、透射电镜和激光共聚焦显微镜检测自噬通路关键蛋白LC3和P62的... 详细信息

为探究禽传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)能否诱导细胞自噬及其对病毒复制的影响,本研究利用IBV细胞适应株CEA接种DF-1和Vero细胞,通过Western-blot、透射电镜和激光共聚焦显微镜检测自噬通路关键蛋白LC3和P62的表达和分布以及自噬小体的形成情况,并通过自噬抑制剂和诱导剂处理评估了自噬对IBV复制的影响。结果显示,IBV不能在DF-1细胞中诱导LC3的转化,但能够诱导Vero细胞中LC3-II和P62的水平升高,并能在Vero细胞中诱导形成自噬小体以及LC3-II向自噬体中的聚集,表明IBV能够诱导Vero细胞发生完整自噬。用自噬抑制剂渥曼青霉素和氯喹处理细胞能够抑制IBV诱导的自噬以及病毒的复制,而用自噬激活剂雷帕霉素处理则能够促进病毒的复制。综上所述,IBV能够在Vero细胞中诱导自噬的发生,从而促进病毒的复制。

关键词：禽传染性支气管炎病毒自噬病毒复制

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