检索结果-内蒙古大学图书馆

现用重组AIV(H5+H7)三价灭活疫苗对近期H5和H7亚型AIV分离株的免疫效力研究

中国预防兽医学报 2022年第5期44卷 514-520页

作者：刘艳晶麻琦潘舒心和新文王燕邓国华李雁冰施建忠包红梅毛胜刚胡井雷路通刘景利郭兴福田国彬曾显营陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/国家禽流感参考实验室/国家禽类实验动物资源库黑龙江哈尔滨150069 哈尔滨维科生物技术有限公司黑龙江哈尔滨150069

为评估现用重组禽流感病毒(AIV)(H5+H7)三价灭活疫苗(H5N1 Re-11株+Re-12株,H7N9 H7-Re3株)对我国近期H5和H7亚型AIV分离株的免疫预防效果,本研究对60只3周龄SPF鸡以肌肉注射途径接种该疫苗(0.3 mL/只),另外,60只鸡注射PBS作为阴性对照... 详细信息

为评估现用重组禽流感病毒(AIV)(H5+H7)三价灭活疫苗(H5N1 Re-11株+Re-12株,H7N9 H7-Re3株)对我国近期H5和H7亚型AIV分离株的免疫预防效果,本研究对60只3周龄SPF鸡以肌肉注射途径接种该疫苗(0.3 mL/只),另外,60只鸡注射PBS作为阴性对照组;免疫3周后分组,每10只免疫鸡和10只对照鸡为一组,共6组,采集各组鸡血清并检测针对6株AIV分离株(2020年~2021年分离的4株H5N6、1株H5N8和1株H7N9亚型AIV)的相应HI抗体效价。同时用上述6株AIV分离株作为抗原差异代表株,分别以105EID50的剂量进行攻毒试验,攻毒后5 d采集各组所有存活鸡的喉头和泄殖腔拭子样品,死亡鸡样品随时采集,进行排毒检测。HI抗体检测结果显示,免疫后3周,5组免疫鸡血清中针对H5亚型Re-11株和Re-12株抗原的HI抗体效价在8log2~8.6log2,针对4株H5N6 AIV分离株(DK/HuN/S11553/2020、 DK/GD/SC001/2020、 DK/FJ/S1424/20和GS/GZ/S1569/21)和1株H5N8 AIV分离株(WS/SX/4-1/20)的平均抗体效价分别为5.0log2、4.6 log2、4.3log2、3.8 log2、3.7log2;针对H7N9 AIV H7-Re3株的HI抗体效价为7.8log2,而针对H7N9 AIV分离株CK/YN/SD024/21的平均抗体效价为4.0log2;对照组鸡血清中针对疫苗株和所有分离株的HI抗体均为阴性。表明上述分离株与现用疫苗株存在较大抗原性差异。攻毒后14 d的观察期内,所有免疫组鸡均健活,且攻击3株H5N6和1株H7N9 AIV分离株的免疫组鸡均不排毒,但攻击1株H5N6 AIV分离株(GS/GZ/S1569/21)和H5N8 AIV分离株的免疫组分别有2/10和3/10只鸡的喉头拭子样品中检测到低水平的病毒;所有对照组鸡在攻毒后4 d内全部发病、死亡,且死亡对照组鸡的喉头和泄殖腔拭子样品均呈AIV阳性。以上结果表明,以近期野鸟或家禽中分离的H5和H7亚型AIV抗原变异株攻击各组鸡后,现用的H5+H7 AIV三价灭活疫苗可对免疫鸡提供无临床发病的保护,并可有效阻止分离株在鸡体内的复制。本研究为H5和H7三价疫苗的应用及更新提供了科学依据。

关键词：禽流感 H5+H7亚型三价灭活疫苗抗原变异株免疫效力

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H10N8亚型禽流感病毒双重荧光定量RT-PCR检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2020年第12期42卷 1233-1238页

作者：包红梅田国彬曾显营王秀荣陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/国家禽流感参考实验室黑龙江哈尔滨150069

为建立检测H10N8亚型禽流感病毒(AIV)的双重荧光定量RT-PCR方法,本研究选取H10N8亚型AIV血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因中高度保守区域的核苷酸序列,设计引物和探针。通过反应条件优化,建立了针对H10N8亚型AIV的双重荧光定量RT-PCR方... 详细信息

为建立检测H10N8亚型禽流感病毒(AIV)的双重荧光定量RT-PCR方法,本研究选取H10N8亚型AIV血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因中高度保守区域的核苷酸序列,设计引物和探针。通过反应条件优化,建立了针对H10N8亚型AIV的双重荧光定量RT-PCR方法。该方法可特异性地检测出H10N8亚型AIV的HA和NA基因,与其它亚型AIV及其他常见禽呼吸道病原均无交叉反应;能够检测到AIV的最低检出量为10-1 EID50/0.1 mL,比常规RT-PCR方法敏感100倍;批内和批间重复性试验的变异系数(CV)均小于2%。SPF鸡感染试验样品检测结果显示,该双重荧光定量RT-PCR方法和病毒分离鉴定方法的符合率为94.44%,与常规RT-PCR方法的符合率为88.23%,而常规RT-PCR方法与病毒分离方法的符合率为83.33%,表明该方法与病毒分离方法的准确率更接近,可以用于临床检测。本实验结果表明H10N8亚型AIV的双重荧光定量RT-PCR方法特异性强、敏感性高、重复性好、操作简便,为H10N8亚型AIV的检测及监测提供了有力的技术手段。

关键词：禽流感 H10N8 双重荧光定量RT-PCR 检测方法

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关于高致病性禽流感灭活疫苗的认知和应用误区

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畜牧兽医科技信息 2021年第10期37卷 7-9页

作者：麻琦宋守生任殿新戈永军田国彬曾显营中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/国家禽流感参考实验室黑龙江哈尔滨150069 内蒙古赤峰市敖汉旗农牧局内蒙古赤峰024300 敖汉惠丰种禽有限责任公司内蒙古赤峰024300

养禽业是农业、农村发展和农民增收的重要组成部分。近20年来,H5和H7N9亚型高致病性禽流感先后对我国家禽养殖业造成严重危害,同时威胁人类健康,引起重大公共卫生关注。疫苗免疫联合扑杀的措施是我国有效控制禽流感的重要策略。国家禽... 详细信息

养禽业是农业、农村发展和农民增收的重要组成部分。近20年来,H5和H7N9亚型高致病性禽流感先后对我国家禽养殖业造成严重危害,同时威胁人类健康,引起重大公共卫生关注。疫苗免疫联合扑杀的措施是我国有效控制禽流感的重要策略。国家禽流感参考实验室创制出一系列防控疫苗并应用,有效控制了我国H5和H7亚型禽流感,保障养禽业健康发展,稳定了禽蛋产品的供应,并成功从家禽源头阻断了人感染H7N9流感病毒,产生巨大经济和社会效益。但在临床应用中,对疫苗的认知和应用还存在一些误区,成为形成家禽免疫防控薄弱环节的重要因素。本文简要总结和分析了对疫苗的相关认知和应用误区,并提出科学建议,以期为高致病性禽流感防控实践提供参考。

关键词：高致病性禽流感疫苗认识和使用误区

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重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株)对商品肉鸡的免疫效力研究

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中国预防兽医学报 2019年第6期41卷 611-615页

作者：吴姣姣曾显营陈晓涵臧金凯包红梅施建忠邓国华郭兴福刘景利毛胜刚杨帆陈志宇孙项楠路通陈化兰田国彬中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/国家禽流感参考实验室黑龙江哈尔滨150069 哈尔滨维科生物技术有限公司黑龙江哈尔滨150069

为评估重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株)对商品肉鸡的免疫保护效果,本研究将该疫苗按照现地免疫程序分别接种10日龄白羽肉鸡和14日龄黄羽肉鸡,疫苗接种前和接种后每周采血,分离血清,检测H5亚型Re-8株和H7... 详细信息

为评估重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株)对商品肉鸡的免疫保护效果,本研究将该疫苗按照现地免疫程序分别接种10日龄白羽肉鸡和14日龄黄羽肉鸡,疫苗接种前和接种后每周采血,分离血清,检测H5亚型Re-8株和H7亚型H7-Re1株禽流感病毒(AIV)HI抗体滴度,并在初次免疫后3周和出栏时以鼻腔感染方式分别进行攻毒试验。结果显示,免疫前,所有肉鸡血清中H7亚型H7-Re1株AIV HI抗体滴度均低于1log2,H5亚型Re-8株AIV平均HI抗体滴度分别为5.3log2(白羽肉鸡)和4.1log2(黄羽肉鸡);一次免疫的白羽肉鸡在免疫后3周至出栏时,2种亚型AIV平均HI抗体滴度在6.0log2~6.7log2;2次免疫的黄羽肉鸡在初次免疫后3周至出栏时,2种亚型AIV平均HI抗体滴度均在6.0log2以上。在一次免疫后3周时和出栏时,采用高致病性H5、H7亚型AIV攻毒后,对照组白羽肉鸡和黄羽肉鸡均全部死亡,免疫组白羽肉鸡和黄羽肉鸡均不发病、不排毒、不死亡,获得100%的免疫保护。本研究结果表明,重组AIV二价灭活疫苗对商品肉鸡具有良好的免疫效果,为该疫苗的现地应用提供了参考依据。

关键词：禽流感灭活疫苗 H5+H7 商品肉鸡免疫效力

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Re-8株H5亚型禽流感灭活疫苗对野鸟源H5N8流感病毒的免疫保护性研究

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中国预防兽医学报 2018年第7期40卷 616-620页

作者：臧金凯吴姣姣曾显营石文军刘丽玲包红梅陈晓涵陈化兰田国彬中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/国家禽流感参考实验室黑龙江哈尔滨150069

为评估当前应用的Re-8株种毒相关禽流感灭活疫苗对野鸟源H5N8流感病毒的免疫预防效果,本研究将重组禽流感病毒(AIV)H5亚型Re-8株灭活疫苗(H5N1亚型,Re-8株)和重组AIV(H5+H7)灭活疫苗(H5N1Re-8株+H7N9 H7 Re-1株)分别以0.3 m L/只的剂量... 详细信息

为评估当前应用的Re-8株种毒相关禽流感灭活疫苗对野鸟源H5N8流感病毒的免疫预防效果,本研究将重组禽流感病毒(AIV)H5亚型Re-8株灭活疫苗(H5N1亚型,Re-8株)和重组AIV(H5+H7)灭活疫苗(H5N1Re-8株+H7N9 H7 Re-1株)分别以0.3 m L/只的剂量接种3周龄SPF鸡,免疫3周时进行HI抗体检测和攻毒试验。结果显示,上述2种疫苗免疫的SPF鸡血清中针对H5亚型Re-8株抗原的HI抗体均在8 log2以上,以105EID50的剂量、鼻腔感染途径攻击野鸟源H5N8病毒BHG/QH/2/16和BHG/Tibet/3/16后,所有免疫组鸡在14 d观察期内均全部健活,不排毒,而对照组鸡在攻毒后4 d内全部发病、死亡、排毒。现地免疫重组AIV H5亚型三价灭活疫苗(Re-6株+Re-7株+Re-8株)的商品蛋鸡直接进行HI抗体检测和攻毒试验,结果显示,免疫蛋鸡血清中针对Re-8株抗原的HI抗体平均滴度为8.3 log2,以相同攻毒方式和剂量分别攻击2株H5N8病毒后,免疫鸡也获得完全免疫保护,不发病、不死亡、不排毒。本研究结果表明,含有重组AIV H5 Re-8株抗原的灭活疫苗可有效防控野鸟源H5N8流感病毒,为我国及其他国家H5N8亚型禽流感免疫防控提供了科学依据。

关键词：禽流感 Re-8株灭活疫苗免疫保护 H5N8 野鸟

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反向遗传学技术在流感病毒研究和防控中的应用

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中国科学：生命科学 2015年第10期45卷 1051-1066页

作者：李呈军陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室国家禽流感参考实验室哈尔滨150001

流感病毒严重危害动物和人类健康.完全以质粒为基础的反向遗传系统的建立在流感病毒研究和防控领域是一个具有里程碑意义的事件.作为一个强有力的工具,反向遗传技术的应用拓宽和加深了流感病毒的基础和应用研究,在人流感和动物流感的防... 详细信息

流感病毒严重危害动物和人类健康.完全以质粒为基础的反向遗传系统的建立在流感病毒研究和防控领域是一个具有里程碑意义的事件.作为一个强有力的工具,反向遗传技术的应用拓宽和加深了流感病毒的基础和应用研究,在人流感和动物流感的防控中发挥了重要的作用.本文简要回顾了流感病毒反向遗传技术的发展历程,重点介绍了该技术在流感病毒致病性、跨宿主传播以及疫苗研制方面的研究进展.

关键词：反向遗传技术流感病毒致病性跨宿主传播疫苗研制

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一株虎源H5N1亚型禽流感病毒的分离鉴定及生物学特性研究

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中国预防兽医学报 2015年第12期37卷 908-911页

作者：崔艳芳王德丽刘丽娜赵璐刘丽玲田国彬曾显营李雁冰陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/国家禽流感参考实验室黑龙江哈尔滨150001

2015年2月,从广西省南宁市动物园发病并死亡的白虎组织样品内分离到一株H5N1亚型禽流感病毒(AIV),命名为A/tiger/Guangxi/1/2015(H5N1)(简称Tiger/GX/1/15)。本研究对该分离株的全基因序列进行测定,并对其致病性进行研究。基因组序列分... 详细信息

2015年2月,从广西省南宁市动物园发病并死亡的白虎组织样品内分离到一株H5N1亚型禽流感病毒(AIV),命名为A/tiger/Guangxi/1/2015(H5N1)(简称Tiger/GX/1/15)。本研究对该分离株的全基因序列进行测定,并对其致病性进行研究。基因组序列分析表明:该病毒的HA基因属于Clade 2.3.2.1分支,HA蛋白的裂解位点处具有多个连续碱性氨基酸(^(341)RRRKR^(345)),具备高致病性禽流感病毒(HPAIV)的典型分子特征。BLAST分析显示该分离株的各基因节段分别与H5N1和H9N2亚型AIV的相应基因节段具有较高的相似性,推测该分离株为一株重组病毒。该病毒在小鼠的肺和鼻甲骨中能够进行有效的复制,对鼠的半数致死量(MLD_(50))>5.52 logEID_(50),对小鼠具有中等致病性。以上结果表明:该分离株未经适应便具备感染小鼠并对小鼠具有较高致死的能力。

关键词：禽流感病毒 H5N1亚型重组进化分析

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H7N9亚型禽流感病毒RT-PCR检测方法建立

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中国农业科学 2015年第15期48卷 3050-3055页

作者：王云鹤包红梅孙佳善李雁冰徐晓龙王子龙施建忠曾显营王秀荣陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室/国家禽流感参考实验室河北农业大学动物科技学院

【目的】2013年3月,中国国家卫生和计划生育委员会宣布在上海、安徽地区发现了人感染H7N9亚型流感病毒事件,由于这种新型重组H7N9流感病毒未曾有过感染人或者动物的报道,因此出现了一系列亟待解决的问题,引起了全世界范围的广泛关注。根... 详细信息

【目的】2013年3月,中国国家卫生和计划生育委员会宣布在上海、安徽地区发现了人感染H7N9亚型流感病毒事件,由于这种新型重组H7N9流感病毒未曾有过感染人或者动物的报道,因此出现了一系列亟待解决的问题,引起了全世界范围的广泛关注。根据H7N9亚型禽流感病毒HA和NA核苷酸序列,设计并合成靶基因为HA和NA的2对引物,建立快速检测H7N9亚型禽流感病毒的一步法RT-PCR检测方法。【方法】根据测序结果,用DNAStar生物软件进行同源性分析比较,选出H7和N9基因中高度保守且特异的核苷酸区域,用oligo6.0软件设计针对H7和N9基因的引物。用Trizol LS提取RNA,采用一步法Access RT-PCR扩增反应液,建立了一步法检测H7N9亚型禽流感病毒RT-PCR方法。以H7N9亚型流感病毒为阳性对照,其他亚型流感病毒以及新城疫、传染性支气管炎、传染性法氏囊等其他禽病病原作为阴性对照,按所建立的反应体系和反应程序进行RT-PCR反应,验证所建立方法的特异性。对病毒含量为106.5 EID50·m L-1的H7N9亚型禽流感病毒尿囊液依次进行10倍倍比稀释,提取RNA用RT-PCR方法检测,评价其敏感性。另外,采取双盲试验用荧光定量RT-PCR对该方法进行了比对验证。【结果】用H7亚型特异性引物检测H1—H15亚型禽流感病毒和鸡新城疫病毒等其他禽病病原,除H7亚型流感病毒外,其他样品均为阴性;用N9亚型特异性引物检测N1—N9亚型禽流感病毒和其他禽病病原,仅当前流行的H7N9亚型AIV样品有特异性目的条带,与其他N1—N9亚型禽流感病毒和鸡新城疫病毒等其他禽病病原均无交叉反应。通过对H7N9亚型禽流感病毒尿囊液进行10倍倍比稀释检测,证实该方法最低检出量为1.4×102.5 EID50·m L-1,并可以从阳性棉拭子浸出液中扩增出目的基因片段。【结论】该RT-PCR方法具有特异性强和准确率高的特点,可以作为H7N9亚型AIV核酸检测的一种有效候选方法。

关键词：禽流感病毒 H7N9亚型 RT-PCR

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禽流感病毒NS1蛋白与ANXA2蛋白相互作用的研究

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中国预防兽医学报 2015年第12期37卷 899-902页

作者：马勇包红梅王文超孙佳善赵玉辉王秀荣陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/国家禽流感参考实验室黑龙江哈尔滨150001 阳农业大学畜牧兽医学院辽宁沈阳110161

为鉴定与禽流感病毒(AIV)NS1蛋白相互作用的宿主蛋白,本研究以AIV GD1322株感染人肺泡上皮细胞(A549),利用NS1蛋白的单克隆抗体(MAb)进行免疫沉淀反应(IP)筛选与其结合的宿细胞蛋白,并经质谱鉴定确认膜联蛋白A2(ANXA2)与NS1蛋白之间可... 详细信息

为鉴定与禽流感病毒(AIV)NS1蛋白相互作用的宿主蛋白,本研究以AIV GD1322株感染人肺泡上皮细胞(A549),利用NS1蛋白的单克隆抗体(MAb)进行免疫沉淀反应(IP)筛选与其结合的宿细胞蛋白,并经质谱鉴定确认膜联蛋白A2(ANXA2)与NS1蛋白之间可能存在相互作用关系。免疫共沉淀(Co-IP)试验结果显示ANXA2与NS1蛋白之间具有稳定的相互作用关系;而且,Pull-down试验证明ANXA2与NS1蛋白之间为直接的相互作用。此外,激光共聚焦试验表明NS1和ANXA2共定位于胞浆中。本研究首次鉴定AIV NS1蛋白与宿主蛋白ANXA2间存在相互作用,为进一步研究AIV NS1蛋白的功能奠定了基础。

关键词：禽流感病毒 NS1蛋白 ANXA2蛋白蛋白互作

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H5亚型禽流感病毒HA蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

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中国兽医科学 2015年第5期45卷 453-457页

作者：卢昆鹏崔鹏飞张芳王晶肖红波邓国华陈化兰湖南农业大学动物医学学院湖南长沙410128 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所国家禽流感参考实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为制备Clade 2.3.2分支H5亚型禽流感病毒HA蛋白的单克隆抗体,以灭活的超速离心浓缩纯化的H5N1亚型禽流感病毒A/duck/Guangdong/S1322/2010(DK/GD/S1322/2010)免疫6~8周龄的雌性BALB/c小鼠。取免疫后小鼠脾细胞,使其与骨髓瘤细胞(SP2/0)... 详细信息

为制备Clade 2.3.2分支H5亚型禽流感病毒HA蛋白的单克隆抗体,以灭活的超速离心浓缩纯化的H5N1亚型禽流感病毒A/duck/Guangdong/S1322/2010(DK/GD/S1322/2010)免疫6~8周龄的雌性BALB/c小鼠。取免疫后小鼠脾细胞,使其与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,通过血凝抑制(HI)和ELISA方法筛选,共获得2株能够稳定分泌HA蛋白特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株A4和D11。2株单克隆抗体的重链均为IgG1,轻链均为κ链。经HI检测,A4和D11的细胞培养上清和腹水的抗体效价分别为23、22和211、211。HI和中和试验结果显示,这2株单克隆抗体与Clade 2.3.2.B分支和Clade 2.3.2.C分支的病毒反应性良好,而与Clade 2.3.4和Clade 7分支的病毒均不反应。间接免疫荧光试验结果表明,这2株单克隆抗体能够识别MDCK细胞内感染的H5亚型禽流感病毒DK/GD/S1322/2010。结果表明,本研究制备的2株单克隆抗体为H5亚型禽流感病毒的检测和诊断奠定了物质基础。

关键词：禽流感病毒单克隆抗体血凝素

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