检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2014年第8期36卷 611-614页

作者：孙超杨德成高荣远周国辉王海伟于力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/牛羊传染病研究创新团队黑龙江哈尔滨150001

为构建含有海肾萤光素酶(Rluc)报告基因的O型口蹄疫病毒(FMDV)亚基因组复制子,本研究在前期构建的O型FMDV cDNA感染性克隆的基础上,利用融合PCR的方法,以Rluc报告基因替换FMDV的前导蛋白Lb基因和结构蛋白P1基因,构建含有Rluc报告基因的F... 详细信息

为构建含有海肾萤光素酶(Rluc)报告基因的O型口蹄疫病毒(FMDV)亚基因组复制子,本研究在前期构建的O型FMDV cDNA感染性克隆的基础上,利用融合PCR的方法,以Rluc报告基因替换FMDV的前导蛋白Lb基因和结构蛋白P1基因,构建含有Rluc报告基因的FMDV亚基因组复制子FMDVRep。将该复制子质粒线性化后,经体外转录制备复制子全长RNA,转染BHK-21细胞,通过RT-PCR方法和间接免疫荧光试验分别检测该复制子RNA的自主复制能力以及FMDV非结构蛋白3B的表达情况。结果显示,复制子RNA在BHK-21细胞中能够进行自主复制并且能够表达病毒的非结构蛋白。Rluc活性检测结果表明,该复制子RNA在BHK-21细胞中可以高效表达Rluc,在转染后2 h^12 h Rluc活性呈线性递增,进一步反映该复制子具有良好的表达外源基因的能力。O型FMDV亚基因组复制子的构建,为深入研究FMDV的复制和翻译机制奠定了基础。

关键词： O型口蹄疫病毒海肾萤光素酶复制子

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脑心肌炎病毒IRES置换不影响口蹄疫病毒的复制和毒力

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中国预防兽医学报 2015年第11期37卷 834-837页

作者：高荣远杨德成孙超周国辉王海伟于力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/牛羊传染病研究创新团队黑龙江哈尔滨150001

内部核糖体进入位点(IRES)是微RNA病毒起始蛋白合成的关键元件。为研究IRES元件在病毒致病过程中的作用,本研究以口蹄疫病毒(FMDV)为模型,在已建立的O型FMDV c DNA感染性克隆的基础上,利用融合PCR的方法以脑心肌炎病毒(EMCV)的IRES替换F... 详细信息

内部核糖体进入位点(IRES)是微RNA病毒起始蛋白合成的关键元件。为研究IRES元件在病毒致病过程中的作用,本研究以口蹄疫病毒(FMDV)为模型,在已建立的O型FMDV c DNA感染性克隆的基础上,利用融合PCR的方法以脑心肌炎病毒(EMCV)的IRES替换FMDV的IRES,构建并拯救出含有EMCV IRES的嵌合病毒(r FMDV-EIRES)。一步生长曲线结果显示r FMDV-EIRES无论是在鼠源BHK-21细胞还是在猪源IBRS-2细胞中的复制能力均与亲本病毒相近。另外,r FMDV-EIRES对乳鼠的致病力与亲本病毒也相同。以上研究结果表明,虽然EMCV IRES与FMDV IRES一级序列存在显著差异,但二者的置换并不影响FMDV的复制和毒力,该结果有助于加深IRES在微RNA病毒复制和致病性功能的认识。

关键词：内部核糖体进入位点蛋白翻译起始口蹄疫病毒 IRES嵌合病毒拯救

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牛细小病毒病毒样颗粒的组装及其免疫原性评价

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中国预防兽医学报 2014年第12期36卷 930-934页

作者：张越常继涛于力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/牛羊传染病研究创新团队黑龙江哈尔滨150001

为研究牛细小病毒(BPV)VP2衣壳蛋白自组装病毒样颗粒(VLPs)以及VLPs的免疫原性。本研究以BPV-1型C7-5中国分离株的基因组序列为模板扩增VP2蛋白的编码基因,将其克隆至腺病毒穿梭载体p Shuttle-CMV中,利用*** BJ5183内同源重组将VP2基因... 详细信息

为研究牛细小病毒(BPV)VP2衣壳蛋白自组装病毒样颗粒(VLPs)以及VLPs的免疫原性。本研究以BPV-1型C7-5中国分离株的基因组序列为模板扩增VP2蛋白的编码基因,将其克隆至腺病毒穿梭载体p Shuttle-CMV中,利用*** BJ5183内同源重组将VP2基因插入腺病毒骨架质粒p Ad Easy-1中,获得携带BPV VP2基因的重组腺病毒质粒(p Ad-BPV-VP2)。该重组质粒经PacⅠ线性化后转染Ad293细胞,获得重组腺病毒r Ad-BPV-VP2,第8代时滴度为107.25TCID50/m L。间接免疫荧光、western blot以及电镜观察结果显示,BPV VP2蛋白可以在腺病毒系统中稳定表达,并有效组装VLPs。将r Ad-BPV-VP2肌肉注射免疫BALB/c小鼠,结果显示,针对BPV的血清Ig G和中和(VN)抗体分别于加强免疫后2周和8周达最高水平,高峰抗体可持续至15周,VN抗体的最高滴度可达1∶4 000。此外,与对照小鼠血清相比,免疫小鼠血清中的IL-2、IL-4及IFN-γ含量显著升高(p<0.05)。结果表明,r Ad-BPV-VP2免疫小鼠后可以诱导机体产生针对BPV的特异性体液和细胞免疫。本研究为BPV的免疫预防及载体的开发奠定了基础。

关键词：牛细小病毒病毒样颗粒免疫原性

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鸡传染性法氏囊病病毒VP5缺失标记疫苗的生物学特性研究

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中国预防兽医学报 2014年第8期36卷 659-662页

作者：高立李凯祁小乐高玉龙高宏雷王永强孔宪刚王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽免疫抑制病科技创新团队黑龙江哈尔滨150001

为评价鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP5缺失病毒株rHLJ0504HT△VP5的生物学特性,本研究首先对该缺失病毒与其亲本病毒rHLJ0504HT(vvIBDV HLJ0504 253/284双位点突变细胞适应病毒)进行了体外复制动力学比较研究。结果表明,VP5缺失病毒复... 详细信息

为评价鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP5缺失病毒株rHLJ0504HT△VP5的生物学特性,本研究首先对该缺失病毒与其亲本病毒rHLJ0504HT(vvIBDV HLJ0504 253/284双位点突变细胞适应病毒)进行了体外复制动力学比较研究。结果表明,VP5缺失病毒复制滴度明显低于亲本病毒(p<0.05)。动物实验结果表明,该缺失病毒可以诱导机体产生良好的免疫应答反应,免疫后10 d,其抗体水平与亲本病毒相当;并能够抵抗同源或异源超强毒的攻击,为免疫鸡提供100%保护。此外,该缺失病毒对免疫鸡无明显的致病性;VP5缺失病毒免疫组与未免疫组禽流感血凝抑制效价相当,不存在明显差异(p>0.05),表明该病毒对免疫鸡无免疫抑制作用,不影响其它疫苗的免疫效果。而且,VP5的缺失可以作为鉴定该缺失病毒的生物学标记。以上结果表明,rHLJ0504HT△VP5是一株安全有效的IBDV标记候选疫苗株。

关键词：鸡传染性法氏囊病病毒 VP5缺失标记疫苗

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鸡传染性法氏囊病病毒B节段对病毒致病性的影响

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中国预防兽医学报 2014年第7期36卷 510-514页

为研究鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)3个不同亚群B节段对病毒致病性的影响,本实验将IBDV HLJ0504超强毒株的A节段分别与3个亚群(Ⅰ亚群Gt株、Ⅱ亚群HLJ0504株及Ⅲ亚群HuB-1株)B节段进行组合,拯救了rH4AGtB、rH4AH4B和rH4AHuB3种重组病毒... 详细信息

为研究鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)3个不同亚群B节段对病毒致病性的影响,本实验将IBDV HLJ0504超强毒株的A节段分别与3个亚群(Ⅰ亚群Gt株、Ⅱ亚群HLJ0504株及Ⅲ亚群HuB-1株)B节段进行组合,拯救了rH4AGtB、rH4AH4B和rH4AHuB3种重组病毒。动物实验结果表明,rH4AHuB引起雏鸡死亡率为80%、rH4AH4B次之为73.3%、rH4AGtB仅为33.3%。此外,rH4AHuB在体内复制的能力明显高于rH4AGtB(p<0.05),但与rH4AH4B无明显差异(p>0.05)。以上结果表明,IBDV B节段影响病毒的致病性,不同亚群B节段对IBDV致病性的影响作用不同。其中,第II、III亚群的B节段能够提高病毒在体内的复制能力,从而使IBDV的致病性增强,而第I亚群的B节段则降低了病毒在体内的复制能力,使IBDV的致病性减弱。

关键词：鸡传染性法氏囊病病毒 B节段复制致病性

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牛副结核分枝杆菌的分离及鉴定

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中国预防兽医学报 2018年第12期40卷 1177-1180页

作者：刘虹秀程玉笛党光辉李田田李鹤崔子寅宋宁宁陈利苹刘思国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队黑龙江哈尔滨150069

为进一步确定新疆某奶牛场疑似感染副结核病的病原菌,本研究采集了37头疑似患病奶牛的直肠刮取物,应用卵黄琼脂培养基对其进行分枝杆菌的分离培养,经菌落形态观察、抗酸染色以及多重PCR等方法对分离菌进行病原学鉴定,并利用副结核分枝... 详细信息

为进一步确定新疆某奶牛场疑似感染副结核病的病原菌,本研究采集了37头疑似患病奶牛的直肠刮取物,应用卵黄琼脂培养基对其进行分枝杆菌的分离培养,经菌落形态观察、抗酸染色以及多重PCR等方法对分离菌进行病原学鉴定,并利用副结核分枝杆菌亚型鉴定引物进行PCR扩增及测序分析。结果显示,分离培养的7株分离菌均为抗酸染色阳性的分枝杆菌;经多重PCR鉴定,其中3株谱型与副结核分枝杆菌k10参考株一致;进一步通过基因分型的PCR扩增及测序分析,确定这3株分离菌均为牛副结核分枝杆菌。本研究为进一步开展该菌病原学和流行病学研究提供了必要的研究资料。

关键词：副结核分枝杆菌分离培养多重PCR 亚型鉴定

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牛副结核分枝杆菌多组分亚单位疫苗的初步研究

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中国预防兽医学报 2018年第10期40卷 940-944页

作者：程玉笛党光辉李鹤李哲刘虹秀宋宁宁刘思国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队黑龙江哈尔滨150069

为筛选出最佳的预防副结核病的候选疫苗,本研究评价了副结核分枝杆菌(MAP)培养上清、MAP细胞壁和MAP灭活菌体的免疫保护效果。将160只6周龄雌性BALB/c小鼠随机分为8组,每组20只,分别为PBS组、菌影(Ghost)组、弗氏不完全佐剂(IFA)组、上... 详细信息

为筛选出最佳的预防副结核病的候选疫苗,本研究评价了副结核分枝杆菌(MAP)培养上清、MAP细胞壁和MAP灭活菌体的免疫保护效果。将160只6周龄雌性BALB/c小鼠随机分为8组,每组20只,分别为PBS组、菌影(Ghost)组、弗氏不完全佐剂(IFA)组、上清+Ghost组、上清+IFA组、细胞壁+Ghost组、细胞壁+IFA组和灭活苗组,分别经皮下注射免疫后在不同的时间点采集小鼠尾静脉血,利用间接ELISA检测小鼠血清中抗体效价。三免后以5×10~8cfu/只剂量进行腹腔攻毒。结果显示:细胞壁+IFA组小鼠的抗体水平明显高于其它组(p<0.001),细胞壁+Ghost组次之(p<0.001);除阴性对照组外,各组小鼠IgG1的滴度均高于IgG2a (p<0.001);细胞壁+IFA组和细胞壁+Ghost组的小鼠脾脏淋巴细胞培养上清中IFN-γ、IL-4和IL-10的含量显著高于其它实验组(p<0.001);细胞壁+IFA组IL-2的含量明显高于其它实验组(p<0.001),细胞壁+Ghost组次之(p<0.01);细胞壁+IFA组小鼠的肝脏、脾脏和小肠组织的荷菌量显著少于其它实验组(p<0.01),细胞壁+Ghost组次之(p<0.05),表明MAP细胞壁可以刺激机体产生较高水平的抗体,机体的免疫反应倾向于体液免疫,且细胞壁对攻毒小鼠的保护效果最好。本研究为反刍动物副结核病疫苗的研制提供了实验依据。

关键词：副结核分枝杆菌培养上清细胞壁灭活苗

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副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素各亚基处理PK-15细胞的基因表达谱分析

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中国预防兽医学报 2015年第5期37卷 371-374页

作者：牛惠李艳玲周泷李大鹏张艳禾李刚谢芳王春来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队黑龙江哈尔滨150001

为研究副猪嗜血杆菌(***)细胞致死膨胀毒素(CDT)各亚基(Cdt A、Cdt B和Cdt C)的相关生物学功能,本研究采用基因芯片技术对以CDT各亚基处理的PK-15细胞基因表达谱进行检测和分析。通过比较各亚基处理细胞与空白对照细胞基因表达谱的检测... 详细信息

为研究副猪嗜血杆菌(***)细胞致死膨胀毒素(CDT)各亚基(Cdt A、Cdt B和Cdt C)的相关生物学功能,本研究采用基因芯片技术对以CDT各亚基处理的PK-15细胞基因表达谱进行检测和分析。通过比较各亚基处理细胞与空白对照细胞基因表达谱的检测结果显示,Cdt A、Cdt B和Cdt C作用PK-15细胞后,处理细胞中分别有91个基因、126个基因及135个基因出现差异表达变化。根据芯片结果选取变化较显著的基因进行荧光定量RT-PCR验证,结果与基因芯片检测结果基本一致。基因注释(GO)分析表明,这些蛋白分别参与免疫系统调节、生物调控、代谢过程和定位等过程。本研究结果为进一步研究CDT的致病作用机制奠定了基础。

关键词：副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素表达谱基因芯片

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结核分枝杆菌三基因融合表达的亚单位疫苗研究

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中国预防兽医学报 2017年第11期39卷 927-931页

作者：王磊党光辉李鹤宋宁宁陈利苹刘思国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队黑龙江哈尔滨150069

为筛选出安全、有效的抗结核分枝杆菌感染的亚单位疫苗,本研究选择了9个结核分枝杆菌的重要抗原(Rv0199、Rv0394c、Omp A、Rv3802c、Ag85a、TB10.4、Rv2660c、Rv0125、Mpt51),利用小鼠模型评价其免疫效果。每3个抗原一组串联融合表达,... 详细信息

为筛选出安全、有效的抗结核分枝杆菌感染的亚单位疫苗,本研究选择了9个结核分枝杆菌的重要抗原(Rv0199、Rv0394c、Omp A、Rv3802c、Ag85a、TB10.4、Rv2660c、Rv0125、Mpt51),利用小鼠模型评价其免疫效果。每3个抗原一组串联融合表达,将其分别与弗氏不完全佐剂及沙门氏菌菌蜕混合,共分成7组,通过皮下注射的方式免疫小鼠,共免疫3次。每次免疫后两周检测其血清抗体分型与效价、脾脏淋巴细胞的分化及其细胞因子的分泌。结果表明,这些融合蛋白均能够刺激机体产生高滴度的抗体,具有较强的免疫原性,其中融合蛋白Rv0199-Rv0394c-Omp A在一免后2周即可以刺激机体产生较高滴度的抗体。抗体分型结果显示,除阴性对照组外,其余组小鼠血清中Ig G1的滴度均高于Ig G2a。并且机体的免疫反应倾向于体液免疫。其中,沙门氏菌菌蜕的佐剂作用与商品化的弗氏不完全佐剂免疫效果一致。本研究为研制结核分枝杆菌亚单位疫苗奠定了基础。

关键词：结核分枝杆菌亚单位疫苗佐剂免疫反应

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犬瘟热病毒F蛋白融合信号肽单克隆抗体的制备及其表位的鉴定

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中国预防兽医学报 2023年第5期45卷 523-528页

作者：崔赛赛李博韬刘家森康洪涛杨鸣发姜骞曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/宠物疫病创新团队黑龙江哈尔滨150069

为制备犬瘟热病毒(CDV)F蛋白融合信号肽(FSP)的单克隆抗体(MAb),本研究通过原核表达系统表达CDV HLJ1-13株重组FSP蛋白(rFSP)。将其免疫BALB/c小鼠,通过间接ELISA方法筛选到1株能够稳定分泌抗FSP蛋白MAb的杂交瘤细胞株G8D6E3E5,亚类鉴... 详细信息

为制备犬瘟热病毒(CDV)F蛋白融合信号肽(FSP)的单克隆抗体(MAb),本研究通过原核表达系统表达CDV HLJ1-13株重组FSP蛋白(rFSP)。将其免疫BALB/c小鼠,通过间接ELISA方法筛选到1株能够稳定分泌抗FSP蛋白MAb的杂交瘤细胞株G8D6E3E5,亚类鉴定结果显示该株MAb重链为Ig G2a型,轻链为κ型。构建一系列表达部分重叠的重组FSP片段,经western blot鉴定该株MAb识别的抗原区域为aa1~aa55,通过合成一系列重叠多肽,经ELISA进一步鉴定该株MAb识别的抗原表位为^(21)QQHSTRSTET^(30)。采用western blot检测该株MAb与r FSP的反应原性;采用间接免疫荧光试验(IFA)检测该株MAb与天然FSP的反应原性。Western blot结果显示,CDV Snyder Hill和HLJ1-13株r FSP蛋白样品在34 ku左右均出现特异性条带;IFA结果显示,感染CDV Snyder Hill株48 h后的vero细胞出现红色荧光。以上结果表明,该株MAb既能够与原核表达的CDV Snyder Hill和HLJ1-13株的r FSP蛋白反应,也能够与天然表达的CDV Snyder Hill株FSP蛋白反应。上述研究结果为CDV的检测以及FSP生物学功能的研究奠定了坚实基础。

关键词：犬瘟热病毒 F蛋白融合信号肽单克隆抗体

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