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鸡HspHsp90α可溶性表达及与传染性法氏囊病病毒衣壳蛋白亲和力的鉴定

中国家禽 2017年第5期39卷 17-21页

作者：高祥李辉陈玉明刘爱晶吴甜甜王永强高立高玉龙李凯刘长军崔红玉张艳萍潘青王笑梅祁小乐中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 江苏省动物重要疫病与人畜共患病协同创新中心江苏扬州225009

热激蛋白90α(Heat shock protein 90,Hsp90α)在传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease,IBDV)的致病过程中发挥重要作用。蛋白互作及其亲和力均可能导致不同的信号转导和生物效应,鸡源Hsp90α与IBDV衣壳蛋白VP2的互作已经被证... 详细信息

热激蛋白90α(Heat shock protein 90,Hsp90α)在传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease,IBDV)的致病过程中发挥重要作用。蛋白互作及其亲和力均可能导致不同的信号转导和生物效应,鸡源Hsp90α与IBDV衣壳蛋白VP2的互作已经被证明,但两者之间的亲和力尚未被鉴定。研究通过表达和纯化鸡的Hsp90α和IBDV超强毒株的VP2蛋白,运用表面等离子共振(Surface plasmon resonance,SPR)技术,揭示Hsp90α和IBDV VP2蛋白两者互作的动态过程,并确定其亲和力((KD)为7.105×10^(-8)M),为强相互作用。研究结果对进一步揭示IBDV的致病机制有重要意义。

关键词： Hsp90α 传染性法氏囊病病毒衣壳蛋白表面等离子共振亲和力

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利用SPF鸡胚分离传染性法氏囊病病毒超强毒的研究

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中国家禽 2017年第17期39卷 19-23页

作者：吴甜甜李辉刘爱晶 ALTAF Hussain 范林进王永强高立高玉龙李凯刘长军崔红玉张艳萍潘青王笑梅祁小乐中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150069 江苏高校动物重要疫病与人畜共患病协同创新中心江苏扬州225009

传染性法氏囊病病毒(IBDV)超强毒(vvIBDV)不适应鸡胚成纤维细胞培养,其分离鉴定通常采用直接接种无特定病原体(SPF)鸡的方法。然而该方法需要特殊设备,成本较高,较繁琐。研究旨在探讨SPF鸡胚作为IBDV分离工具的可行性,将IBDV阳性病料混... 详细信息

传染性法氏囊病病毒(IBDV)超强毒(vvIBDV)不适应鸡胚成纤维细胞培养,其分离鉴定通常采用直接接种无特定病原体(SPF)鸡的方法。然而该方法需要特殊设备,成本较高,较繁琐。研究旨在探讨SPF鸡胚作为IBDV分离工具的可行性,将IBDV阳性病料混悬液通过绒毛尿囊膜途径接种9~11日胚龄SPF鸡胚,并盲传三代成功分离获得vvIBDV(IBD16GX01株)。分离毒各代次序列一致,且与SPF鸡分离氨基酸同源性100%。结果表明,SPF鸡胚可用于vvIBDV的分离鉴定,为vvIBDV分子流行病学研究奠定基础。

关键词：传染性法氏囊病病毒分离鸡胚

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三种传染性法氏囊病疫苗对文昌鸡免疫效果的研究

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中国家禽 2017年第18期39卷 78-80页

作者：李辉吴甜甜曹宗喜李凯高立刘爱晶 Altaf Hussain 范林进王永强高玉龙刘长军崔红玉张艳萍潘青王笑梅林哲敏祁小乐中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150069 海南省农业科学院畜牧兽医研究所海南海口571100 江苏高校动物重要疫病与人畜共患病协同创新中心江苏扬州225009

传染性法氏囊病(Infectious bursal disease,IBD)是危害文昌鸡的重要传染病之一。为了筛选最适合文昌鸡的IBD防控措施,试验选用新型重组疫苗(rGt HLJVP2)和商品化的弱毒疫苗、中毒力疫苗,评价其免疫效果。结果显示,重组疫苗(rGt HLJVP2... 详细信息

传染性法氏囊病(Infectious bursal disease,IBD)是危害文昌鸡的重要传染病之一。为了筛选最适合文昌鸡的IBD防控措施,试验选用新型重组疫苗(rGt HLJVP2)和商品化的弱毒疫苗、中毒力疫苗,评价其免疫效果。结果显示,重组疫苗(rGt HLJVP2)组表现更高的抗体滴度,且致死性攻毒后保护率为100%,为文昌鸡的疫病科学防控提供了新思路。

关键词：传染性法氏囊病(IBD) 重组疫苗文昌鸡免疫

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猪鼻支原体的分离鉴定及其对巴马猪的致病性试验

猪鼻支原体的分离鉴定及其对巴马猪的致病性试验

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第四十三届养猪产业博览会暨研讨会

作者：危艳武张志慧黄立平刘建波吴洪丽刘丹李胜斌王一平张辉夏伟刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

从临床呼吸道疾病的患猪肺脏分离到一株猪鼻支原体(Mhr),命名为Mhr-DL株.对该菌株16S rna基因序列分析证实,它与GenBank下载的Mhr(AB680688)、猪肺炎支原体(Mhp:NR_074745)和猪滑液支原体(My:KC512403)的同源性分别为99.3％、92.8％和7... 详细信息

从临床呼吸道疾病的患猪肺脏分离到一株猪鼻支原体(Mhr),命名为Mhr-DL株.对该菌株16S rna基因序列分析证实,它与GenBank下载的Mhr(AB680688)、猪肺炎支原体(Mhp:NR_074745)和猪滑液支原体(My:KC512403)的同源性分别为99.3％、92.8％和74.0％.取Mhr-DL株培养物(1.8×109CCU/mL)经腹腔和气管途径接种SPF小型巴马猪,临床症状表现为精神沉郁、粪便干燥、食欲不振、结膜炎、体温高达41.6℃;剖检病理表现为肺脏、肝脏、脾脏等器官纤维渗出,淋巴结充血肿胀、胸膜炎、腹膜炎、肺脏呈虾肉样病变.菌株核酸检测发现,肺脏和扁桃体检出率最高;组织病理表现为间质性肺炎,淋巴细胞增生、坏死、崩解,肾毛细血管淤血,小肠固有层大量嗜酸性粒细胞浸润、肠绒毛结构不完整,心脏小血管淤血,脾白髓内淋巴细胞增生.本研究获得的Mhr-DL菌株,为开展Mhr感染引起的疫病防控技术的研究奠定了基础.

关键词：猪鼻支原体分离鉴定工艺巴马猪致病性

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临床条件下PCV2灭活苗仔猪免疫程序优化试验

临床条件下PCV2灭活苗仔猪免疫程序优化试验

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第四十三届养猪产业博览会暨研讨会

作者：张志慧危艳武黄立平吴洪丽刘丹夏伟刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

为了比较PCV2灭活苗(LG株)不同免疫程序对临床仔猪的免疫效果,本研究依据不同的免疫时间、免疫剂量和免疫次数设计了10组免疫程序.在临床条件下,从试验猪场中选取2～4周龄仔猪50头,随机分组10组,每组5头.采用PCR和IPMA检测疫苗免疫血清... 详细信息

为了比较PCV2灭活苗(LG株)不同免疫程序对临床仔猪的免疫效果,本研究依据不同的免疫时间、免疫剂量和免疫次数设计了10组免疫程序.在临床条件下,从试验猪场中选取2～4周龄仔猪50头,随机分组10组,每组5头.采用PCR和IPMA检测疫苗免疫血清中病毒核酸和抗体消长情况.检测抗体结果显示,对于疫苗单剂量一次免疫组,免疫后28d,4周龄仔猪PCV2抗体效价增长显著(p＜0.05);对于疫苗加强免疫组,免疫后28d各组抗体效价均显著提高(p＜0.05).病毒核酸检测显示,疫苗加强免疫组能够更好地清除病毒血症,4周龄仔猪疫苗单剂量免疫组效果次之.综合病毒核酸和抗体产生消长规律,推荐2种免疫程序:加强免疫:首免3周龄单剂量免疫,间隔3w加强免疫;一次性免疫:4周龄实施单剂量疫苗免疫.此外,仔猪疫苗免疫时母源抗体效价对疫苗免疫的影响试验表明,在低水平的母源抗体实施疫苗免疫时,免疫后产生的抗体水平较高,而高水平的母源抗体免疫时,仔猪抗体水平无明显变化.

关键词：仔猪养殖猪圆环病毒2型灭火疫苗免疫程序母源抗体

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牛病毒性腹泻病毒p80蛋白的表达及其单克隆抗体的制备

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黑龙江畜牧兽医 2016年第7期 1-4,273页

作者：杨立新朱远茂周跃辉任建乐马磊杨婷薛飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室哈尔滨150001

为了制备牛病毒性腹泻病毒（BVDV）p80蛋白单克隆抗体,试验采用BVDV接种牛肾细胞（MDBK）,提取病毒RNA,通过RT-PCR扩增出BVDV的p80基因,将其定向克隆到原核表达载体pET30a,得到重组表达质粒pET30a-p80。将重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE... 详细信息

为了制备牛病毒性腹泻病毒（BVDV）p80蛋白单克隆抗体,试验采用BVDV接种牛肾细胞（MDBK）,提取病毒RNA,通过RT-PCR扩增出BVDV的p80基因,将其定向克隆到原核表达载体pET30a,得到重组表达质粒pET30a-p80。将重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）表达菌,挑选单菌落并扩大培养,经IPTG诱导和SDS-PAGE以及Western-blot分析表明重组蛋白p80获得了表达,分子质量约为44ku。同时用浓缩的BVDV培养液免疫6-8周龄的Balb/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与SP2/0细胞进行融合。利用纯化的重组蛋白p80作为检测抗原的间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞,经过3次亚克隆后对获得的杂交瘤细胞进行间接免疫荧光（IFA）和抗体亚类鉴定及腹水的制备和效价的测定。结果表明：重组p80蛋白具有很好的反应性;获得8株稳定分泌针对BVDVp80蛋白的杂交瘤细胞株,分别为3E3、2A4、8H9、3G3、2B3、3G2、2G2和4A11;8株杂交瘤细胞株接种Balb/c小鼠制备腹水,采用BVDV作为包被原的间接ELISA方法测得其效价为1×10^5-1×10^7;8株杂交瘤细胞所分泌的MAb具有良好的反应性和特异性;8株单克隆抗体的抗体亚类均为IgM/κ。说明制备的重组p80蛋白单克隆抗体可试用于建立检测BVDV抗原的诊断方法。

关键词：牛病毒性腹泻病毒 RT-PCR p80蛋白免疫印迹试验单克隆抗体 IgM 间接免疫荧光试验

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驴感染马流感病毒的现状与危害

驴感染马流感病毒的现状与危害

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第三届(2017)中国驴业发展大会暨第七届驴产业发展高峰论坛

作者：孙金辉郭巍胡哲王晓钧中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室马传染病与慢病毒研究团队吉林农业大学动物科技学院

2016年以来,随着养驴业的蓬勃发展,各地养殖户不断的引种,导致驴群中各种疾病的发生,其中最常见的为驴感染马流感病毒。马流感(Equine influenza),是由正粘病毒科(Orthom yxoviridae)流感病毒属(Influenza virus)A型流感病毒引起马属动... 详细信息

2016年以来,随着养驴业的蓬勃发展,各地养殖户不断的引种,导致驴群中各种疾病的发生,其中最常见的为驴感染马流感病毒。马流感(Equine influenza),是由正粘病毒科(Orthom yxoviridae)流感病毒属(Influenza virus)A型流感病毒引起马属动物的一种急性暴发式流行的传染病。马流感传播迅速,在马群中发病率高,但病死率低,世界动物卫生组织(Office International Des Epizooties,OIE)将其列为法定报告传染病。到目前为止,马流感仅有

关键词：马流感病毒亚单位疫苗马属动物

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鸡马立克氏病强弱病毒株PCR鉴别检测方法在诊断中的应用评价

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中国预防兽医学报 2016年第7期38卷 567-571页

作者：吕红超张艳萍孙国荣高玉龙李志杰郑惠文包珂岩王笑梅刘长军中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为在现地准确诊断鸡马立克氏病(MD)以及区分发病鸡中MD病毒(MDV)野毒株和疫苗株的感染,本研究选择MDV血清1型(MDV-1)基因组中两个特有的、强弱毒株存在序列差异的基因片段132 bp重复序列(132 bpr)和meq基因作为靶基因,建立了MDV的PCR检... 详细信息

为在现地准确诊断鸡马立克氏病(MD)以及区分发病鸡中MD病毒(MDV)野毒株和疫苗株的感染,本研究选择MDV血清1型(MDV-1)基因组中两个特有的、强弱毒株存在序列差异的基因片段132 bp重复序列(132 bpr)和meq基因作为靶基因,建立了MDV的PCR检测方法。特异性试验和敏感性试验表明该PCR方法特异性强,敏感性高,132 bpr和meq基因两对引物对阳性重组质粒的检测下限分别为1.0×103拷贝/μL和1.0×102拷贝/μL。通过对近10年的1057份临床样品的检测对该PCR方法进行应用评价。结果表明病毒分离与PCR检测结果的符合率为100%,PCR检测结果可信度高;琼脂扩散试验(AGP)对MDV PCR检测阳性样品的检测阳性率为86.25%,PCR法检测敏感性明显高于AGP法。此外,对分离病毒株meq基因序列分析结果表明,所有分离株均具有中国野毒株特征,即突变主要出现于其编码蛋白的6个氨基酸中(K77E、D80 Y、V115 A、T139 A、P176 R或P217A),表明该PCR检测方法具有良好的特异性。本研究建立的MDV PCR检测方法特异性强、灵敏度高,具有良好的实用性,可以用于MD的临床诊断。

关键词：鸡马立克氏病 PCR检测 meq基因 132 bp重复序列临床诊断

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表达新城疫病毒F基因重组鸭肠炎病毒的构建

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中国预防兽医学报 2016年第2期38卷 92-95页

作者：张苗苗李慧昕韩宗玺刘怀然王玉龙邵昱昊孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 甘肃农业大学动物医学学院甘肃兰州730070

为构建表达鸡新城疫病毒(NDV)F基因的重组鸭肠炎病毒(DEV),本研究以实验室前期构建的表达绿色荧光蛋白的重组DEV(r DEV-US10-EGFP)为基础,通过PCR扩增NDV F基因,构建了携带F基因表达盒的转移质粒p US10-TPA-F。将转移质粒与r DEV-US10-E... 详细信息

为构建表达鸡新城疫病毒(NDV)F基因的重组鸭肠炎病毒(DEV),本研究以实验室前期构建的表达绿色荧光蛋白的重组DEV(r DEV-US10-EGFP)为基础,通过PCR扩增NDV F基因,构建了携带F基因表达盒的转移质粒p US10-TPA-F。将转移质粒与r DEV-US10-EGFP基因组DNA共转染鸡胚成纤维细胞。经过反向蚀斑筛选,获得表达NDV F基因的r DEV-US10-F。对重组区域US10基因测序结果表明,F基因正确插入至US10基因编码区内。将重组病毒传至15代,F基因仍能够稳定表达,表明重组病毒具有稳定的遗传特性,并且与亲本病毒株具有相似的生长曲线。本研究为研发NDV-DEV活载体疫苗奠定了基础。

关键词：新城疫病毒 F基因鸭肠炎病毒重组病毒

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2014年部分地区猪流行性腹泻病毒流行病学调查

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中国预防兽医学报 2016年第4期38卷 335-338页

作者：常铁城陈建飞冯力倪宏波黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为了解猪流行性腹泻病毒(PEDV)的流行情况,本研究利用RT-PCR方法对2014年来自全国11个省市42个猪场的165份病料样品进行了检测。结果显示,在检测的42个猪场中,共有36个猪场显示PEDV阳性,猪场阳性率为85.71%。其中单独感染PEDV的猪场有25... 详细信息

为了解猪流行性腹泻病毒(PEDV)的流行情况,本研究利用RT-PCR方法对2014年来自全国11个省市42个猪场的165份病料样品进行了检测。结果显示,在检测的42个猪场中,共有36个猪场显示PEDV阳性,猪场阳性率为85.71%。其中单独感染PEDV的猪场有25个,占总数的59.52%;混合感染PEDV和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的猪场有2个,占总数的4.76%,PEDV和猪轮状病毒(Po RV)混合感染猪场有7个,占总数的16.67%;3种病毒均混合感染的猪场有2个,占总数的4.76%。结果表明PEDV在我国的猪腹泻病病原中仍占主导地位。对2014年分离的21株PEDV ORF3基因进行测序分析,并与Gen Bank中登录的12株国内外PEDV参考株相关序列进行遗传变异分析。这33个PEDV株的ORF3基因系统发育树显示,目前我国的PEDV现地病毒株分布在Ⅰ群中的Ⅰ-Ⅰ亚群和Ⅰ-Ⅲ亚群。

关键词：猪流行性腹泻病毒流行病学调查 ORF3基因序列分析

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