检索结果-内蒙古大学图书馆

应用RT-PCR方法扩增了 GoAstV(Goose astrovirus)编码内衣壳ORF2蛋白的基因2115bp,将ORF2基因克隆至原核表达载体pET32a,并在大肠杆菌BL21中得到了表达.通过SDS-PAGE分析表明,重组菌诱导后得到了大小约106kDa的ORF2蛋白,与理论值相符.We...

应用RT-PCR方法扩增了 GoAstV(Goose astrovirus)编码内衣壳ORF2蛋白的基因2115bp,将ORF2基因克隆至原核表达载体pET32a,并在大肠杆菌BL21中得到了表达.通过SDS-PAGE分析表明,重组菌诱导后得到了大小约106kDa的ORF2蛋白,与理论值相符.Western-blotting结果显示,ORF2蛋白可被鼠抗GoAstV阳性血清识别.本实验利用原核表达系统成功高效地表达了 GoAstV ORF2蛋白,融合蛋白以包涵体形式存在.

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SPF鸡不同生长阶段粪便菌群组成及多样性研究

SPF鸡不同生长阶段粪便菌群组成及多样性研究

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2017年第十五届中国北方实验动物科技年会

作者：周妍刁晨曦张圆圆于海波陆涛峰赵丽丽陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室实验动物与比较创新团队东北农业大学生命科学学院牡丹江师范学院生命科学与技术学院

目的提供SPF鸡不同生长阶段肠道菌群的组成及多样性数据。方法采集10日龄、12周龄、23周龄和52周龄SPF鸡粪便,利用IlluminaHiSeq2500高通量测序方法,对样品16S rRNA的两个高变区(V3-V4)进行测序分析,并进行了α多样性指数、β多样性指... 详细信息

目的提供SPF鸡不同生长阶段肠道菌群的组成及多样性数据。方法采集10日龄、12周龄、23周龄和52周龄SPF鸡粪便,利用IlluminaHiSeq2500高通量测序方法,对样品16S rRNA的两个高变区(V3-V4)进行测序分析,并进行了α多样性指数、β多样性指数和粪便群落特征分析。结果四个生长阶段粪便样品菌群具有相似的较高的丰富度和良好的均匀度,物种多样性无显著差异(P>0.05);厚壁菌门(Firmicutes)、变形菌门(Proteobacteria)和拟杆菌门(Bacteroidetes)丰度占95%以上;乳杆菌属(上actobacillus)、链球菌属(Streptococcus)、拟杆菌属(Bacteroides)、肠球菌属(Enterococcus)为优势菌属,不同时期丰度差异达显著水平(P<0.05)。结论四个生长阶段菌群组成多样,且优势菌群主要为有益菌。该实验结果能够为SPF鸡品质评定、健康监测和安全性评价提供依据。

关键词： SPF鸡不同生长阶段粪便菌群 16s rRNA Illumina HiSeq 2500高通量测序

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具有中和活性的鸭肠炎病毒单克隆抗体的制备与鉴定

具有中和活性的鸭肠炎病毒单克隆抗体的制备与鉴定

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第九届北京实验动物科学国际论坛

作者：王怡平张忠伟蒲路莎赵丽丽陈洪岩吉林省松原市宁江区畜牧业管理局吉林松原 138001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069

为制备抗鸭肠炎病毒(DEV)的单克隆抗体(MAb)并对其生物学活性进行鉴定,本研究采用蔗糖密度梯度离心法提纯DEV鸭胚成纤维细胞适应毒,以此作为抗原免疫BALB/c小鼠,随后取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,有限稀释法克隆杂交瘤细胞株,经间...

为制备抗鸭肠炎病毒(DEV)的单克隆抗体(MAb)并对其生物学活性进行鉴定,本研究采用蔗糖密度梯度离心法提纯DEV鸭胚成纤维细胞适应毒,以此作为抗原免疫BALB/c小鼠,随后取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,有限稀释法克隆杂交瘤细胞株,经间接ELISA筛选,获得了 1株稳定分泌抗DEV MAb的杂交瘤细胞株2E3.鉴定结果显示,该MAb为IgM亚类,ELISA效价可达到1∶105以上;间接免疫荧光试验(IFA)中MAb可与细胞中增殖的DEV结合,Western Blot试验中MAb不与变性病毒蛋白作用,表明该MAb可能是构象表位的单抗;病毒中和试验表明,该MAb具有较强的病毒中和活性.本试验获得的一株具有DEV中和活性的MAb杂交瘤细胞株,为建立DEV的检测方法和DEV的相关研究提供了材料支持.

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鉴别禽致病性大肠杆菌与禽非致病性大肠杆菌多重PCR检测方法的建立及初步应用

鉴别禽致病性大肠杆菌与禽非致病性大肠杆菌多重PCR检测方法的建...

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第九届北京实验动物科学国际论坛

作者：王怡平孙畅赵丽丽陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069 牡丹江师范学院生命科学与技术学院牡丹江 157011

为建立一种快速鉴别禽致病性大肠杆菌(Avian pathogenic Escherichia coli,APEC)和禽非致病性大肠杆菌(Avian non-pathogenic Escherichia coli,ANPEC)的多重PCR检测方法,本研究针对APEC的iss、cvaC、irp2、iucD、iroN和tsh共6个毒力基因的序列进行分析,分别设计合成6对特异性引物,通过正交组合法优化引物比例和梯度法确定最佳退火温度,并进一步完善了方法的敏感性、特异性和判定标准,建立了一种快速灵敏检测APEC的多重PCR检测方法,并初步应用该方法对本实验室102株大肠杆菌样本鉴定和分群。结果显示：该多重PCR方法对菌液最低检测浓度为5×107 cfu/mL;对其他种属的4株革兰氏阳性菌和5株革兰氏阴性菌无扩增。检测实验室保存的鸭源APEC和ANPEC各10株,通过比较两者所含毒力基因的分布情况及数量,建立多重PCR判定标准即所含毒力基因数大于等于3者为APEC阳性菌株。初步应用该方法检测实验室分离保存的23株APEC和79株ANPEC,同时进一步验证了其准确性。结果表明：APEC检出率为100％,ANPEC的检出率亦为100％。以上结果充分说明本研究建立的多重PCR方法特异性强、灵敏度高、简便快捷,可进一步应用于禽类的APEC和ANPEC快速鉴别诊断和APEC的分子流行病学调查。

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SPF鸡育雏期加热方式的选择

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畜牧与兽医 2024年第12期56卷 29-34页

作者：张伟于海波杨鸣发王园园李昌文夏长友中国农业科学院哈尔滨兽医研究所国家禽类实验动物资源库动物疫病防控全国重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室黑龙江哈尔滨150069

旨在通过对存活率、增重、体重均匀度3个可以衡量育雏好坏的关键指标的对比,选择出1种对SPF雏鸡生长更为有利的加热方式。将480只1日龄SPF雏鸡分为4组,每组3个重复,每个重复40只,分别放置在采用翘片管(翘片管组)、黄光红外灯泡(黄光组)... 详细信息

旨在通过对存活率、增重、体重均匀度3个可以衡量育雏好坏的关键指标的对比,选择出1种对SPF雏鸡生长更为有利的加热方式。将480只1日龄SPF雏鸡分为4组,每组3个重复,每个重复40只,分别放置在采用翘片管(翘片管组)、黄光红外灯泡(黄光组)、暖风机(暖风机组)、红光红外灯泡(红光组)加热方式的隔离器内,饲养至28日龄,在育雏期间(0~4周龄)每周统计动物存活率、平均增重及体重均匀度。结果:黄光组4周的存活率为95%,其他3组的4周存活率为100%,表明黄光组的存活率最低;增重方面,翘片管组和暖风机组的4周累计增重显著高于其他两组(P<0.05);体重均匀度方面,暖风机组和红光组均为80%,高于其他两组;为确定差异产生的原因,对各组隔离器内部的平均温度、温度均匀度和平均照度进行了检测,4组平均温度差异不显著(P>0.05),但是翘片管组的最大温差明显大于其他3组;平均照度方面,黄光组和红光组显著高于翘片管组和暖风机组(P<0.05)。综上,通过多个指标的比较研究提示,暖风机组温度均匀度好、光照强度最佳,SPF雏鸡的存活率高、平均增重多、体重均匀度好,不损害饲养员职业健康,安全经济方面也较好,是SPF鸡育雏比较理想的加热方式。

关键词： SPF鸡育雏加热方式

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实验用SPF大白猪和长白猪母系遗传结构分析

实验用SPF大白猪和长白猪母系遗传结构分析

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第九届北京实验动物科学国际论坛

作者：高彩霞辛畅权金强陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室150069黑龙江省哈尔滨市香坊区哈平路678号中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室150069黑龙江省哈尔滨市香坊区哈平路678号东北农业大学生命科学学院 150030黑龙江省哈东北农业大学生命科学学院 150030黑龙江省哈尔滨市香坊区木材街59号

无特定病原体(specific pathogen free,SPF)大白猪(Sus scrofa)和长白猪(Sus scrofa)作为重要的实验动物,已净化了 14种病原,生殖生理和血液生理生化特性基本稳定,与其他实验用小型猪相比差异不大;且群体遗传分化较小,遗传结构稳定,作...

无特定病原体(specific pathogen free,SPF)大白猪(Sus scrofa)和长白猪(Sus scrofa)作为重要的实验动物,已净化了 14种病原,生殖生理和血液生理生化特性基本稳定,与其他实验用小型猪相比差异不大;且群体遗传分化较小,遗传结构稳定,作为实验动物初步用于疫病研究具有较好的效果.然而众所周知,猪群个体差异所表现的遗传多样性对实验结果会产生较大的影响,可导致动物实验重复性差,数据结果离散度高,因此对其进行遗传学质量控制研究十分必要.为分析实验用SPF大白猪、长白猪的线粒体 DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)控制区(displacement-loop region,D-loop 区)遗传多样性,揭示其母系遗传结构,本研究提取SPF大白猪和长白猪基因组DNA,同时以我国地方品种巴马小型猪和融水小型猪为对照,应用PCR技术扩增其mtDNA D-loop区,进行测序比对.结果显示,PCR扩增长度约为1500 bp左右,与预期结果一致.107个样本中共检测到40个多态位点,其中有34个转换,6个颠换,转换频率远高于颠换,由此界定为13个单倍型,与地方品种相比,大白猪和长白猪单倍型数较少,分别含有3种和2种特有单倍型,只有1个共享单倍型H4.两猪群中各存在1个优势单倍型,频率分别为17.76％和28.97％.将13种单倍型序列提交到GenBank,并获得相应检索号MH113789-MH113801.单倍型多样度(Hd)分析,融水小型猪单倍型多样度最高(0.767),长白猪最低(0.429),大白猪和巴马小型猪分别为0.566和0.503.此外,中介网络关系图显示13种单倍型分为3个不同进化枝,与系统进化树结果相同.大部分大白猪、长白猪与欧洲猪种亲缘关系较近;大部分巴马小型猪、融水小型猪与亚洲本地猪种亲缘关系较近;而2个大白猪单倍型、共享单倍型与琉球野猪遗传距离较近,聚集在同一分支.这也符合大白猪和长白猪是引进品种,而巴马小型猪和融水小型猪是我国自主培育的地方品种特征.本研究表明与我国地方猪品种相比,实验用SPF大白猪和长白猪种群的单倍型数较少,各存在1个优势单倍型,遗传多样性低,具有清晰的母系遗传结构.总之,SPF大白猪和长白猪mtDNAD-loop区遗传特征的分析进一步明确了其母系遗传结构,为继续对SPF大白猪和长白猪的实验动物标准化研究奠定了基础,也丰富了实验动物资源,有利于实验动物科学的研究.

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