检索结果-内蒙古大学图书馆

中国比较医学杂志 2007年第8期17卷 448-454,F0003页

作者：刘怀然刘家森胡迎东陈洪岩单安山曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部实验动物质量监督检验测试中心沈阳农业大学畜牧兽医学院沈阳110161 东北农业大学动物科技学院

目的将兔出血症病毒(RHDV)VP60全长基因在昆虫细胞-杆状病毒系统中表达,验证重组蛋白形成病毒样颗粒(VLPs)的能力及其生物学特性,探讨VLPs作为检测抗原及亚单位疫苗的潜力。方法用Bac-to-Bac系统体外表达RHDVVP60全长基因。以免疫荧光及... 详细信息

目的将兔出血症病毒(RHDV)VP60全长基因在昆虫细胞-杆状病毒系统中表达,验证重组蛋白形成病毒样颗粒(VLPs)的能力及其生物学特性,探讨VLPs作为检测抗原及亚单位疫苗的潜力。方法用Bac-to-Bac系统体外表达RHDVVP60全长基因。以免疫荧光及Western blotting检测蛋白表达情况及确定蛋白最佳表达条件;免疫电镜观察VLPs形态,并对VLPs的血凝性、免疫原性进行检测。结果SDS-PAGE电泳分析表明,表达的重组蛋白分子量大小约为68KDa,在免疫荧光、琼脂扩散、ELISA试验中均与RHD多克隆抗血清特异性反应;接种重组病毒的Sf9细胞裂解液在电镜下可观察到与RHDV形态相似的VLPs;该VLPs可凝集人“O”、“B”型红细胞,凝集可被RHD多克隆抗血清所抑制;含VLPs的Sf9细胞裂解液可不经纯化用作间接ELISA抗原,所建立的ELISA方法与进口商品化试剂盒相比,特异性良好,敏感性、检出率稍低;将含VLPs的细胞裂解液加氟氏佐剂免疫兔,HI效价可达1∶40,可经受致死量病毒攻击。结论RHDV-VLPs的获得及其良好的免疫原性,为RHD血清学检测试剂的标准化、亚单位疫苗研制应用奠定基础,同时在转移载体及RHDV受体方面研究亦有潜在应用价值。

关键词：兔出血症病毒基因,VP60 昆虫细胞病毒样颗粒

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仙台病毒分子生物学研究进展

仙台病毒分子生物学研究进展

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中国实验动物学会第七届学术年会

作者：许大明刘怀然曲连东刘家森中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部实验动物质量监督检验测试中心中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部实验动物质量监督检验测试中心中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部实验动物质量监督检验测试中心中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部实验动物质量监督检验测试中心

仙台病毒属副粘病毒科鼠副流感病毒1型病毒,为有囊膜、不分节段的单股负链RNA病毒。其副粘病毒特有的基因组结构与复制模式、对外源基因的高效转移与表达,以及广泛的宿主和组织噬性,使得近年来关于仙台病毒作为基因治疗及疫苗载体的研... 详细信息

仙台病毒属副粘病毒科鼠副流感病毒1型病毒,为有囊膜、不分节段的单股负链RNA病毒。其副粘病毒特有的基因组结构与复制模式、对外源基因的高效转移与表达,以及广泛的宿主和组织噬性,使得近年来关于仙台病毒作为基因治疗及疫苗载体的研究日渐增多,从而对仙台病毒分子生物学研究有了新的进展。

关键词：仙台病毒基因组结构蛋白非结构蛋白载体

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兔出血症病毒单克隆抗体的制备及鉴定

兔出血症病毒单克隆抗体的制备及鉴定

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中国实验动物学会第七届学术年会

作者：刘怀然秦海斌刘家森司昌德韩凌霞姜骞曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部实验动物质量监督检验测试中心中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部实验动物质量监督检验测试中心中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部实验动物质量监督检验测试中心中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部实验动物质量监督检验测试中心中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部实验动物质量监督检验测试中心中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部实验动物质量监督检验测试中心中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部实验动物质量监督检验测试中心

目的利用杂交瘤技术制备抗兔出血症病毒(RHDV)单克隆抗体,为RHDV检测方法建立及相关研究奠定基础。方法自病料中经蔗糖密度梯度离心法纯化病毒,免疫BALB／c小鼠,以杂交瘤技术制备抗RHDV单克隆抗体,用昆虫细胞表达重组VP60蛋白建立的间接... 详细信息

目的利用杂交瘤技术制备抗兔出血症病毒(RHDV)单克隆抗体,为RHDV检测方法建立及相关研究奠定基础。方法自病料中经蔗糖密度梯度离心法纯化病毒,免疫BALB／c小鼠,以杂交瘤技术制备抗RHDV单克隆抗体,用昆虫细胞表达重组VP60蛋白建立的间接ELISA方法检测单抗杂交瘤细胞上清及小鼠腹水效价,并对单抗亚类、杂交瘤细胞染色体数目及细胞稳定性进行鉴定和检测。结果经3轮融合筛选,共得到6株稳定分泌抗RHDV单克隆抗体的杂交瘤细胞。间接ELISA 检测,杂交瘤细胞腹水效价分别达到1:3×104、1:3×104、1:4000、1:8000、1:3000、1:3×104:亚类鉴定结果表明6株单抗分属IgG1、IgG2b、IgM三个亚类;杂交瘤细胞染色体计数为87-89条。杂交瘤细胞冻存6个月后复苏,在20代传代过程中分泌的抗体效价变化不大,表明6株杂交瘤细胞均具有很好的稳定性。结论本实验获得了特异性良好的抗RHDV单克隆抗体杂交瘤细胞,可用于RHDV检测方法建立及相关研究中。

关键词：兔出血症病毒单克隆抗体

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