检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2009年第9期39卷 779-785页

作者：黄立平刘长明危艳武陆月华郭龙军中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

利用PCV2-Cap蛋白中和性单克隆抗体建立了一种检测猪血清中PCV2中和抗体的阻断ELISA方法。用该方法与免疫过氧化物酶单层细胞试验对353份试验猪血清样品进行平行检测,结果两种方法的符合率为96.0%;该方法的敏感性为97.9%,特异性为92.4%... 详细信息

利用PCV2-Cap蛋白中和性单克隆抗体建立了一种检测猪血清中PCV2中和抗体的阻断ELISA方法。用该方法与免疫过氧化物酶单层细胞试验对353份试验猪血清样品进行平行检测,结果两种方法的符合率为96.0%;该方法的敏感性为97.9%,特异性为92.4%,且与其他几种猪病毒参考阳性血清无交叉反应。该阻断ELISA与血清中和试验的检测结果呈显著正相关(r=0.997 0),其敏感性还优于血清中和试验。用阻断ELISA对PCV2灭活疫苗免疫与攻毒试验猪血清样品进行检测,结果显示,疫苗接种后第2周就能检测到PCV2中和抗体,4周后阳转率达100%。另外,用该方法对东北三省不同地区送检的703份血清样品进行检测,结果阳性检出率为73.0%。表明,东北三省猪场中的PCV2感染率较高,危害严重。

关键词：猪圆环病毒2型中和抗体单克隆抗体阻断ELISA

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猪繁殖与呼吸综合征病毒GD3株的分离鉴定及其分子特征

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中国预防兽医学报 2009年第1期31卷 28-33页

作者：马平蔡雪辉刘永刚石文达王淑杰王洪峰李成君张琪中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

2005年从广东发病猪场采集的猪繁殖与呼吸综合征疑似病料中,分离到1株猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),命名为GD3株。采用RT-PCR、IFA对分离毒株进行鉴定,并在Marc-145细胞上完成了病毒的增殖和理化性质的鉴定。应用RT-PCR方法扩增出GD3... 详细信息

2005年从广东发病猪场采集的猪繁殖与呼吸综合征疑似病料中,分离到1株猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),命名为GD3株。采用RT-PCR、IFA对分离毒株进行鉴定,并在Marc-145细胞上完成了病毒的增殖和理化性质的鉴定。应用RT-PCR方法扩增出GD3株的6条基因大片段,扩增产物克隆于pMD18-T载体鉴定后测序,同时应用RACE技术对GD3株的5'末端进行扩增和测序。结果表明GD3株基因组全长15425nt,包含个9开放阅读框,5'UTR长189nt,3'UTR长150nt。序列分析结果表明,GD3株在分子遗传演化上介于PRRSV变异毒株(HuN4株、JXA1株)和CH-1a之间,与HuN4和JXA1之间的相似性为97.1%和97.2%;与CH-1a的核苷酸相似性为94.9%。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒分离鉴定

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鸭β-防御素2基因的克隆、表达和表达产物的生物学特性分析

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中国农业科学 2009年第10期42卷 3685-3692页

作者：王瑞琴廖文艳马得莹韩宗玺刘胜旺东北农业大学动物营养研究所中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室

【目的】从鸭组织中克隆鸭β-防御素(AvBD)2基因,在大肠杆菌中高效表达,检测重组鸭AvBD2蛋白的生物学特性。【方法】应用RT-PCR技术从鸭胰腺组织中扩增鸭AvBD2基因,根据已发现的禽β-防御素和部分哺乳类动物β-防御素-2的氨基酸序列构... 详细信息

【目的】从鸭组织中克隆鸭β-防御素(AvBD)2基因,在大肠杆菌中高效表达,检测重组鸭AvBD2蛋白的生物学特性。【方法】应用RT-PCR技术从鸭胰腺组织中扩增鸭AvBD2基因,根据已发现的禽β-防御素和部分哺乳类动物β-防御素-2的氨基酸序列构建系统进化树,将该基因克隆到大肠杆菌原核表达载体pGEX-6p-1上进行原核表达,对该重组蛋白进行纯化,测定体外抗菌活性与理化特性。【结果】鸭胰腺组织中克隆出鸭AvBD2基因的cDNA大小为195bp,编码64个氨基酸。同源性分析表明,鸭AvBD2与其它物种AvBD2同源性较高。凝胶电泳结果显示重组鸭AvBD2蛋白在原核高效表达(分子量约为32kD),对多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌有较高抗菌活性,对大肠杆菌与猪霍乱沙门氏菌的抗菌活性较弱。重组鸭AvBD2蛋白对上述细菌的最小抑菌浓度为15.25～125μg·ml-1,对猪霍乱沙门氏菌最小抑菌浓度大于400μg·ml-1。重组鸭AvBD2蛋白在-20～100℃或pH3～12条件下处理30min后仍有抗金黄色葡萄球菌作用。【结论】克隆并表达了鸭AvBD2基因,表达产物具有抗菌活性,对温度和酸碱度有较高的稳定性。

关键词：鸭 AvBD2 遗传进化重组蛋白抗菌活性

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重组鸡β-防御素5-β-防御素10双分子蛋白的构建及其理化特性分析

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农业生物技术学报 2009年第1期17卷 41-46页

作者：马得莹刘胜旺韩宗玺单安山东北农业大学动物营养研究所中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室

鸡抗菌肽属禽β-防御素(AvBD)类,是鸡先天性免疫的重要组成部分。研究将AvBD10基因定向插入到AvBD5-pGEX SalⅠ和NotⅠ双酶切位点上,构建了AvBD5-pGEX-AvBD10双基因共表达重组载体。将重组质粒转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21,于37... 详细信息

鸡抗菌肽属禽β-防御素(AvBD)类,是鸡先天性免疫的重要组成部分。研究将AvBD10基因定向插入到AvBD5-pGEX SalⅠ和NotⅠ双酶切位点上,构建了AvBD5-pGEX-AvBD10双基因共表达重组载体。将重组质粒转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21,于37℃不同时间进行诱导表达,SDS-PAGE检测外源基因的表达。结果表明,重组AvBD5-AvBD10双分子融合蛋白的分子量约为36 kD,重组双分子蛋白占菌体总蛋白的35%,重组菌表达产物以包涵体形式存在。重组双分子蛋白经纯化后,分别以对数生长中期的大肠杆菌[BL21(DE3-)株]与致病性链球菌[Streptococcus(CAB株)]为检测菌,利用薄层平皿琼脂糖孔穴扩散法测定了重组双分子蛋白的抗菌活性,结果表明,重组双分子蛋白对这两种细菌都具有抗菌活性。并且对温度和pH有很高的稳定性,在-70～100℃或pH 3～12处理30 min仍具有抗菌活性。

关键词：鸡β-防御素重组双分子蛋白抗菌活性

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鸭β-防御素9基因的克隆、组织分布及其原核表达

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中国农业科学 2009年第4期42卷 1406-1412页

作者：廖文艳马得莹刘胜旺韩宗玺东北农业大学动物营养研究所中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室

【目的】从鸭组织中克隆鸭β-防御素9(AvBD9)基因,在原核表达重组鸭AvBD9蛋白;研究重组鸭AvBD9蛋白的体外抗菌活性与理化特性。【方法】采用RT-PCR法,从鸭肝脏组织中扩增鸭AvBD9基因,测定该基因在鸭各组织器官中的分布;将鸭AvBD9基因克... 详细信息

【目的】从鸭组织中克隆鸭β-防御素9(AvBD9)基因,在原核表达重组鸭AvBD9蛋白;研究重组鸭AvBD9蛋白的体外抗菌活性与理化特性。【方法】采用RT-PCR法,从鸭肝脏组织中扩增鸭AvBD9基因,测定该基因在鸭各组织器官中的分布;将鸭AvBD9基因克隆到大肠杆菌原核表达载体pGEX-6p-1上,构建重组表达质粒pGEX-duckAvBD9,将重组质粒转化大肠杆菌BL21,用IPTG诱导表达;亲和层析纯化蛋白,利用薄层平皿琼脂糖孔穴扩散法测定重组鸭AvBD9蛋白的体外抗菌活性与理化特性。【结果】从鸭肝脏组织中克隆得到鸭AvBD9基因,序列分析表明该基因大小为204bp,前体肽包括67个氨基酸残基。AvBD9基因在鸭体内广泛分布。SDS-PAGE电泳表明鸭AvBD9基因在大肠杆菌中高效表达,表达的重组鸭AvBD9融合蛋白以包涵体的形式存在,分子量约31kD。重组鸭AvBD9蛋白对大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、嗜酸乳杆菌、枯草芽胞杆菌有抗菌活性,在-70～100℃或pH3～10处理30min后仍有抗多杀性巴氏杆菌作用。【结论】鸭AvBD9基因为204bp,编码67个氨基酸残基,在鸭组织中广泛分布。重组鸭AvBD9蛋白基因在大肠杆菌中高效表达,该重组蛋白具有广谱的抗菌活性,对温度和酸碱性有较高的稳定性。

关键词：鸭 AvBD9 组织分布重组蛋白抗菌活性

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猪流行性腹泻病毒N蛋白的真核表达及其亚细胞定位的初步分析

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畜牧兽医学报 2009年第5期40卷 691-696页

作者：吕茂杰冯力时洪艳陈建飞孙东波申识川崔小辰王承宝范秀萍中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室哈尔滨150001 东北农业大学哈尔滨150030

以构建的含有编码猪流行性腹泻病毒CV777株核衣壳蛋白(N)基因的阳性质粒pMDT-18-N为模板,用含有KpnⅠ和XhoⅠ酶切位点的上、下游引物扩增获得N基因,该PCR产物经KpnⅠ和XhoⅠ双酶切后定向克隆到经相同双酶切的真核表达载体pcDNA3.1(+)中... 详细信息

以构建的含有编码猪流行性腹泻病毒CV777株核衣壳蛋白(N)基因的阳性质粒pMDT-18-N为模板,用含有KpnⅠ和XhoⅠ酶切位点的上、下游引物扩增获得N基因,该PCR产物经KpnⅠ和XhoⅠ双酶切后定向克隆到经相同双酶切的真核表达载体pcDNA3.1(+)中,经过酶切鉴定和测序鉴定,将构建的重组质粒命名为pcD-NA3.1(+)-N,且未发现碱基的缺失和插入。用脂质体法将pcDNA3.1(+)-N转染Vero E6细胞,在48 h后,以针对猪流行性腹泻病毒核衣壳蛋白的鼠源`多抗血清进行Western blot、免疫荧光检测,并运用共聚焦显微镜分析N蛋白的亚细胞定位。结果表明N基因能在真核细胞Vero E6中正确表达,共聚焦分析结果表明N蛋白在细胞质和细胞核中定位。

关键词：猪流行性腹泻病毒核衣壳蛋白真核表达亚细胞定位

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山羊痘病毒p32基因原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2009年第12期31卷 945-948页

作者：王芳雷震于力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为了建立山羊痘病毒(GPV)抗体快速检测方法,本研究通过人工合成密码子优化的GPVp32基因,并在大肠杆菌中进行截短表达(p32-opti)。表达的重组p32-opti蛋白主要以包涵体形式存在,Western blot分析表明,p32-opti与GPV标准阳性血清具有良好... 详细信息

为了建立山羊痘病毒(GPV)抗体快速检测方法,本研究通过人工合成密码子优化的GPVp32基因,并在大肠杆菌中进行截短表达(p32-opti)。表达的重组p32-opti蛋白主要以包涵体形式存在,Western blot分析表明,p32-opti与GPV标准阳性血清具有良好的抗原性。以纯化的重组p32-opti蛋白作为ELISA包被抗原,建立间接ELISA抗体检测方法。该方法检测小反刍兽疫、蓝舌病和口蹄疫阳性血清均无交叉反应;与中和试验(VNT)比较,两者的符合率为95.7%;ELISA批内和批间重复性试验显示,OD值的变异系数小于10%。上述结果表明,该ELISA检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性。对来自黑龙江、内蒙古和新疆自治区的390份山羊和绵羊血清进行检测,抗体阳性率为80.2%,表明这些地区的山羊和绵羊群普遍存在羊痘病毒抗体。本研究建立的间接ELISA方法可用于GPV感染的流行病学调查以及疫苗接种动物的抗体水平监测。

关键词： GPV p32基因大肠杆菌表达 ELISA

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Asia1型和O型口蹄疫病毒中和性单克隆抗体的免疫保护性

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中国预防兽医学报 2009年第4期31卷 300-304页

作者：周国辉于力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

本研究用微量中和试验鉴定具有中和活性的口蹄疫病毒(FMDV)单克隆抗体,进而用乳鼠保护试验在体内验证单克隆抗体对FMDV感染的免疫保护作用。结果表明,针对Asia1型和O型FMDV的单克隆抗体3E11和8E8腹水的半数保护量(PD50)分别为1995和2371... 详细信息

本研究用微量中和试验鉴定具有中和活性的口蹄疫病毒(FMDV)单克隆抗体,进而用乳鼠保护试验在体内验证单克隆抗体对FMDV感染的免疫保护作用。结果表明,针对Asia1型和O型FMDV的单克隆抗体3E11和8E8腹水的半数保护量(PD50)分别为1995和2371;仅用8PD50单抗3E11和11PD50单抗8E8,就可完全保护乳鼠耐受致死剂量Asia1型和O型FMDV的攻击。被动免疫的乳鼠在攻毒后体重增长的百分率随单抗腹水浓度的升高而增加,而且随着单抗腹水浓度的升高,乳鼠的起始死亡时刻后延、终点死亡时刻前移。

关键词：口蹄疫病毒中和性单克隆抗体保护性免疫

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猪细小病毒灭活疫苗安全性试验及佐剂的筛选

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中国预防兽医学报 2009年第6期31卷 462-465页

作者：张超范崔尚金苗岚飞陈长木中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

本研究以猪细小病毒(PPV)现地分离株(BQ)第30代细胞培养毒株作为灭活疫苗研究用种毒,通过优化病毒增殖条件和培养方法,获得较高滴度的病毒传代细胞培养物用于PPV灭活疫苗的制备。PPV细胞培养毒株分别用甲醛和β-丙内酯进行灭活,对2种灭... 详细信息

本研究以猪细小病毒(PPV)现地分离株(BQ)第30代细胞培养毒株作为灭活疫苗研究用种毒,通过优化病毒增殖条件和培养方法,获得较高滴度的病毒传代细胞培养物用于PPV灭活疫苗的制备。PPV细胞培养毒株分别用甲醛和β-丙内酯进行灭活,对2种灭活剂灭活的病毒液分别用国产铝胶佐剂、进口矿物质白油佐剂以及法国赛比克公司的MONTANIDETMISA 206、ISA15AVG、IMS251CVG 3种佐剂制备10种灭活疫苗,然后分别进行10日龄乳鼠、60日龄仔猪、不同妊娠阶段母猪的安全性试验及成年豚鼠的免疫效果对比试验。通过比较不同灭活疫苗的安全性和对成年豚鼠的免疫效果,初步确认甲醛灭活的病毒液与佐剂ISA15AVG的组合为PPV灭活疫苗的最佳灭活剂和佐剂组合。

关键词：猪细小病毒灭活疫苗生产工艺安全性

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冠状病毒核衣壳蛋白细胞核定位特征的研究进展

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中国预防兽医学报 2009年第7期31卷 577-580页

作者：吕茂杰冯力陈建飞时洪艳中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

冠状病毒属于尼多病毒目（Nidovirales），冠状病毒科（Coronaviridae），冠状病毒属（Coronavirus）成员，为单股正链RNA病毒，根据其基凶组和抗原性的特征又分为3个群：第1群主要包括猪传染性胃肠炎病毒（Transmissible gastroenterit... 详细信息

冠状病毒属于尼多病毒目（Nidovirales），冠状病毒科（Coronaviridae），冠状病毒属（Coronavirus）成员，为单股正链RNA病毒，根据其基凶组和抗原性的特征又分为3个群：第1群主要包括猪传染性胃肠炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus，TGEV）、

关键词：冠状病毒属细胞核定位核衣壳蛋白特征猪传染性胃肠炎病毒正链RNA病毒冠状病毒科 virus

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