检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：秦立廷祁小乐高玉龙高宏雷王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室

传染性法氏囊病病毒(IBDV)是双链RNA病毒,属于双RNA病毒科(Birnaviridae)禽双RNA病毒属(Avibirnavirus),其基因组由A、B两个节段组成,编码4个结果VP1-VP4和非结构蛋白VP5。已有报道,VP5蛋白在病毒复制和体内外致病性中发挥重要作用,其... 详细信息

传染性法氏囊病病毒(IBDV)是双链RNA病毒,属于双RNA病毒科(Birnaviridae)禽双RNA病毒属(Avibirnavirus),其基因组由A、B两个节段组成,编码4个结果VP1-VP4和非结构蛋白VP5。已有报道,VP5蛋白在病毒复制和体内外致病性中发挥重要作用,其分子机制至今不清楚。本研究利用体外定点突变法,缺失IBDVGt株VP5基因。在基因组两端分别引入锤头状核酶序列(HamRz)和丁肝病毒核酶序列(HdvRz)。将带有核酶序列的IBDV基因组插入载体pCAGG的β肌动蛋白启动子下游,构建了IBDV感染性克隆pCAGGmGtA△VP5HRT,该感染性克隆与pCAGGmGtBHRT共转染DFⅠ细胞。RT-PCR、间接免疫荧光、均显示拯救出了重组IBDV。IBDV非结构蛋白VP5基因缺失感染性克隆的成功构建为从分子水平上深入研究5基因功能奠定了基础。

关键词：传染性法氏囊病病毒 VP5 核酶结构病毒拯救

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鸡传染性喉气管炎研究进展

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兽医导刊 2008年第11期 26-29页

作者：王云峰石星明王玫童光志杨桂花孙鹏中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院上海兽医研究所上海200232

鸡传染性喉气管炎（ILT）是一种由α-疱疹病毒，即鸡传染性喉气管炎病毒（ILTV）引起的鸡的急性上呼吸道传染病。本病的特征为呼吸困难、喘气、咳出带血分泌物、喉部和气管黏膜肿胀、出血，并形成糜烂，该病急性暴发时的发病率为90％～... 详细信息

鸡传染性喉气管炎（ILT）是一种由α-疱疹病毒，即鸡传染性喉气管炎病毒（ILTV）引起的鸡的急性上呼吸道传染病。本病的特征为呼吸困难、喘气、咳出带血分泌物、喉部和气管黏膜肿胀、出血，并形成糜烂，该病急性暴发时的发病率为90％～100％，死亡率为5％～70％（平均20％），蛋鸡的产蛋量明显下降，是危害养禽业的重要疫病之一，被国际兽医局在《国际动物卫生法典》1999年版中列为B类疾病。

关键词：鸡传染性喉气管炎病毒《国际动物卫生法典》呼吸道传染病疱疹病毒呼吸困难 B类疾病分泌物发病率

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传染性法氏囊病病毒血清2型23/82株VP5蛋白的原核表达及多克隆血清的制备

传染性法氏囊病病毒血清2型23/82株VP5蛋白的原核表达及多克隆血...

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：秦立廷祁小乐高宏雷高玉龙王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室

本实验构建传染性法氏囊病病毒(IBDV)血清2型23/82株非结构蛋白vp5基因的原核表达质粒,在大杆菌中进行了有效表达,并制备多克隆血清。利用EcoRⅠ和XhoⅠ双切PUC57-23/82VP5质粒,获得23/82株vp5基因片段,连接到同样处理的原核表达质粒pET... 详细信息

本实验构建传染性法氏囊病病毒(IBDV)血清2型23/82株非结构蛋白vp5基因的原核表达质粒,在大杆菌中进行了有效表达,并制备多克隆血清。利用EcoRⅠ和XhoⅠ双切PUC57-23/82VP5质粒,获得23/82株vp5基因片段,连接到同样处理的原核表达质粒pET-28a,经酶切鉴定获得重组质粒pET28a-23/82-vP5,转化到宿主BL21(DE3),在IPTG诱导下成功表达融合蛋白,SDS-PAGE和Western blot表明目的蛋白获得表达,分子量大小为23 kDa。利用Ni-NTA柱纯化,复性后免疫8周龄BALB/c小鼠,3次免疫后采血,间接ELISA检测血清抗体效价为1:1×105;Western blot分析能够与纯化蛋白发生特异性反应,具有良好的免疫原性。23/82株VP5蛋白的表达和多克隆血清的制备为研究不同血清型VP5蛋白在致病性中的差异提供有力工具,同时为深入研究VP5蛋白的结构和功能奠定基础。

关键词：传染性法氏囊病病毒 VP5 原核表达多克隆血清

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DNA疫苗免疫增强技术的比较研究

DNA疫苗免疫增强技术的比较研究

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第六届全国免疫学学术大会

作者：曾伟伟石星明王云峰王玫黄婷婷高宏博中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室

自1990首次发现肌肉注射DNA盐溶液后可自发转染肌细胞以来,DNA免疫已经有了巨大的发展。然而,简单的肌肉注射被认为是一种低效的免疫途径,现已有各种改进方法,其中最常用和最有效的就是电穿孔法和基因枪投递法。然而,这两者都受到条件... 详细信息

自1990首次发现肌肉注射DNA盐溶液后可自发转染肌细胞以来,DNA免疫已经有了巨大的发展。然而,简单的肌肉注射被认为是一种低效的免疫途径,现已有各种改进方法,其中最常用和最有效的就是电穿孔法和基因枪投递法。然而,这两者都受到条件的限制。纹身法是DNA多种免疫方法中一种较为经济实用的方法,改良的纹身机已在医学研究上广泛应

关键词： DNA 抗体水平疫苗免疫比较研究

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9株鸡马立克氏病毒野毒株在鸭胚成纤维细胞上的培育及鉴定

9株鸡马立克氏病毒野毒株在鸭胚成纤维细胞上的培育及鉴定

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：张艳萍刘长军李晶梅刘爱玲施维松闫福海秦运安中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室

2006年～2007年我们从现地暴发鸡马立克氏病(MD)鸡场采集发病鸡羽髓,无菌处理后分别接种鸭胚成纤维细胞(DEF),蚀斑克隆纯化后,随机选1个单克隆,再接种DEF增殖,获得9株适应DEF生长的鸡马立克氏病毒(MDVs)野毒株,分别命名为ZY、FY、SY、YC... 详细信息

2006年～2007年我们从现地暴发鸡马立克氏病(MD)鸡场采集发病鸡羽髓,无菌处理后分别接种鸭胚成纤维细胞(DEF),蚀斑克隆纯化后,随机选1个单克隆,再接种DEF增殖,获得9株适应DEF生长的鸡马立克氏病毒(MDVs)野毒株,分别命名为ZY、FY、SY、YC、CZ、MS、CGZ、QQHE和DH株。应用聚合酶链式反应(PCR)技术分别扩增这9株的132bp重复序列,发现这9株MDVs基因组的132bp重复序列的拷贝数均为2个拷贝,符合MDVS强毒株的特点。从分离的9株MDVS中选择5株人工感染5日龄白来航SPF鸡,感染鸡60d后剖杀,发病鸡大多可见内脏肿瘤;其中3株MD阳性率达100%。我们培育并鉴定了9株适应DEF生长的MDVs流行野毒株,为监测我国现地MD毒株的变异和评价现有疫苗对MD保护效果提供有价值的研究材料。

关键词：马立克氏病毒培育及鉴定 meq基因 132bp重复序列

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新城疫流行病学变化及综合防制进展概况

新城疫流行病学变化及综合防制进展概况

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：刘怀然孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室

新城疫(Newcastle disease,ND)是由新城疫病毒(NDV)引起的一种禽类急性、高度接触性、致死性传染病,被国际动物卫生组织(OIE)列为危害禽类的两种A类传染病之一。尽管世界各国对ND采取了严格的防控措施,如对强

关键词：基因型综合防制新城疫弱毒苗母源抗体疫苗毒紧急免疫接种反向遗传技术流行病

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传染性支气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗的安全性试验与最适免疫剂量测定

传染性支气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗的安全性试验与最适免疫...

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：石星明王云峰王玫李继松孙妍胡文玮童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室中国农业科学院上海兽医研究所

鸡传染性支气管炎(Infectiousbronchitis,IB)是由传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitisvirus,IBV)引起的鸡的一种急性高度接触性传染病。IB以呼吸道症状、产蛋下降和肾脏病变为特征,是继禽

关键词：重组鸡痘病毒免疫剂量安全性试验传染性支气管炎

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猪圆环病毒1型血清抗体IPMA检测方法的建立及其应用

猪圆环病毒1型血清抗体IPMA检测方法的建立及其应用

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会

作者：黄立平刘长明危艳武张朝霞陆月华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

本研究建立了一种免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)用于猪圆环病毒1型(PCV1)血清抗体的检测。对IPMA抗原反应板的制备、被检血清稀释倍数、酶标抗体及底物显色液等进行了系统试验。用IPMA法对已知PCV1和PCV2参考阳性血清进行试验表明,... 详细信息

本研究建立了一种免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)用于猪圆环病毒1型(PCV1)血清抗体的检测。对IPMA抗原反应板的制备、被检血清稀释倍数、酶标抗体及底物显色液等进行了系统试验。用IPMA法对已知PCV1和PCV2参考阳性血清进行试验表明,血清稀释倍数(?)1:100可消除两种病毒间存在的低水平交叉反应。该方法与用昆虫杆状病毒表达的PCV1-Cap重组蛋白抗原建立的间接ELISA检测符合率为88.9%,与其它几种猪病毒参考阳性血清无交又反应.时来自黑龙江、吉林、河北、上海、辽宁等地猪场送检的257份血清样品进行检测,PCV1和PCV2血清抗体阳性检出率分别为19.1%、80.5%.PCV1抗体阳性猪中有95.9%为PCV2阳性,表明我国猪群已存在PCV1感染,在临床上PCV1与PCV2多以混合感染形式存在。本研究建立的PCV1-IPMA方法具有操作简便、特异和敏感等特点,可为PCV1流行病学调查及血清抗体检测提供了一种技术手段。

关键词：猪圆环病毒1型免疫过氧化物酶单层细胞试验抗体检测

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用免疫抑制法制备猪瘟病毒野毒株E2蛋白的特异性单克隆抗体

用免疫抑制法制备猪瘟病毒野毒株E2蛋白的特异性单克隆抗体

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：夏照和彭伍平成丹侯强王万利孙元仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

采用环磷酰胺免疫抑制法,用纯化的杆状病毒表达的重组HCLV-E2蛋白作为耐受原,Shimen-E2蛋白作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经筛选获得一株稳定分泌抗E2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经检测,该单克... 详细信息

采用环磷酰胺免疫抑制法,用纯化的杆状病毒表达的重组HCLV-E2蛋白作为耐受原,Shimen-E2蛋白作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经筛选获得一株稳定分泌抗E2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经检测,该单克隆抗体能够与石门株发生反应,同时能与1.1、2.1、2.2和2.3基因亚群猪瘟野毒发生特异性反应,并具有中和活性,而与猪瘟兔化弱毒疫苗株不发生反应。该单克隆抗体可以用于鉴别猪瘟野毒株和猪瘟兔化弱毒疫苗株。

关键词：猪瘟病毒 E2蛋白重组杆状病毒环磷酰胺免疫抑制单克隆抗体

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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒分离鉴定及其体外传代遗传变异分析

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒分离鉴定及其体外传代遗传变异分...

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：刘长明危艳武张朝霞袁婧黄立平中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

从临床"高热综合征"病例分离到高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株,经细胞传代和蚀斑克隆,培育成功增殖性能稳定的新毒株,命名为PRRSV-HBR。该毒株接种细胞后能够产生细胞病变(CPE),随传代次数增加毒价显著提升,第4... 详细信息

从临床"高热综合征"病例分离到高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株,经细胞传代和蚀斑克隆,培育成功增殖性能稳定的新毒株,命名为PRRSV-HBR。该毒株接种细胞后能够产生细胞病变(CPE),随传代次数增加毒价显著提升,第45～60代毒价测定达107.5TCID50/mL。采用免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)检测病毒抗原分布在细胞浆中;电镜观察到的病毒粒子呈圆形,直径约50nm～55nm。分离株Nsp2基因序列中第483和535～563位氨基酸存在缺失,属PRRSV变异株。该毒株Nsp2基因序列比较发现,经细胞传40代后第3115位核苷酸处插入12个碱基序列(GAGATCGCCTTT)。用该毒株第5代培养物滴鼻接种试验猪(1×104.5TCID50),临床表现为持续高热(≥40.5℃,9d～12d)、食欲下降、精神萎靡、消瘦、眼睑水肿、体表淋巴结肿大等,发病率为100%(10/10),死亡率为30%(3/10)。研究表明,PRRSV-HBR分离株对靶动物具有高致病力,培育的细胞适应毒株体外繁殖能力稳定,并产生了标志性基因突变,为该病毒致病机理、遗传变异规律、疫苗免疫等研究奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒高致病性遗传变异分析

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