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首届中国兽药大会暨中国畜牧兽医学会动物药品学分会2008年学术年会

作者：李国新田志军周艳君于海童光志中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200232 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室，猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室，猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨 150001 中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200232

猪流感(swineinfluenza，SI)是由猪流感病毒(SIvirus，SIV)引起的一种急性高度传染性呼吸道疾病。目前，包括H1N1、H3N2和H1N2亚型在内的SI已成为危害许多国家猪群的疾病。猪流感的控制不仅有经济上的意义，更有其深远的公共卫生学意义... 详细信息

猪流感(swineinfluenza，SI)是由猪流感病毒(SIvirus，SIV)引起的一种急性高度传染性呼吸道疾病。目前，包括H1N1、H3N2和H1N2亚型在内的SI已成为危害许多国家猪群的疾病。猪流感的控制不仅有经济上的意义，更有其深远的公共卫生学意义。DNA疫苗因为能够同时诱导体液免疫应答和细胞免疫应答而受到青睐。但由于DNA疫苗蛋白表达量低，激发的免疫应答较弱，从而限制了它的应用。因此，提高DNA疫苗的免疫效力已成为基因免疫研究的热点。本文探讨了分子佐剂C3d对猪流感病毒HA-DNA疫苗免疫原性的影响，并评价了表达不同形式的HA的DNA疫苗在小鼠模型中对不同亚型的猪流感病毒攻击的保护效力。

关键词：猪流感病毒 DNA疫苗分子佐剂 C3d HA融合表达保护性免疫免疫原性

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质粒DNA与rPRV-HA联合免疫增强了小鼠对猪流感病毒攻击的保护效力

质粒DNA与rPRV-HA联合免疫增强了小鼠对猪流感病毒攻击的保护效力

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首届中国兽药大会暨中国畜牧兽医学会动物药品学分会2008年学术年会

作者：李国新周艳君于海田志军闫丽萍童光志中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200232中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200232 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨 150001

本研究应用表达HA的DNA疫苗和重组病毒免疫小鼠，探讨了不同类型疫苗的联合免疫对猪流感病毒攻击的保护效力。

关键词：猪流感病毒 DNA疫苗 rPRV-HA C3d Prime-boost免疫策略联合免疫效力

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猪捷申病毒Swine/CH/IMH/03全长cDNA克隆的构建

猪捷申病毒Swine/CH/IMH/03全长cDNA克隆的构建

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：吴波平冯力时洪艳陈建飞孙东波高秀春白兴华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室东北农业大学

为构建猪捷申病毒(PTV)感染性克隆,进行病毒基因组结构、功能及新型疫苗研究,根据NCBI发表的PTV Swine/CH/IMH/03株及Talfan株核苷酸序列,设计并合成了4对特异性引物,PCR扩增并克隆覆盖PTV swine/CH/IMH/03全长基因组的4个片段。经过反... 详细信息

为构建猪捷申病毒(PTV)感染性克隆,进行病毒基因组结构、功能及新型疫苗研究,根据NCBI发表的PTV Swine/CH/IMH/03株及Talfan株核苷酸序列,设计并合成了4对特异性引物,PCR扩增并克隆覆盖PTV swine/CH/IMH/03全长基因组的4个片段。经过反复拼接和测序,最终将PTV全长cDNA定向克隆到pBluescriptSK(+)中。PCR、双酶切及测序鉴定证明PTV全长cDNA克隆构建成功。与Swine/CH/IMH/03亲本株及NCBI登录的其他PTV毒株序列比对发现,该克隆只有3个位点存在核苷酸及氨基酸突变,分别位于2A、2C及3D中。

关键词： PTV 全长cDNA克隆感染性克隆

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猪轮状病毒OSU强毒株VP7基因的克隆及其抗原表位原核表达和免疫学活性分析

猪轮状病毒OSU强毒株VP7基因的克隆及其抗原表位原核表达和免疫学...

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：时洪艳冯力陈建飞孙东波吴波平中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室东北农业大学

参照GenBank中所收录的猪轮状病毒OSU株序列设计了一对特异性引物,RT-PCR扩增出1062bp的VP7全长基因,与参考OSU序列的核苷酸同源性达99.8%,克隆到pMD18-T载体中,获得pMD18-T-VP7阳性质粒。以阳性质粒为模板,利用引入BamHⅠ和XhoⅠ酶切... 详细信息

参照GenBank中所收录的猪轮状病毒OSU株序列设计了一对特异性引物,RT-PCR扩增出1062bp的VP7全长基因,与参考OSU序列的核苷酸同源性达99.8%,克隆到pMD18-T载体中,获得pMD18-T-VP7阳性质粒。以阳性质粒为模板,利用引入BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点的表达引物进行PCR扩增得到含有VP7中和抗原表位区域639bp的基因片段,定向克隆到表达载体pGEX-6P-1中,经酶切PCR鉴定的阳性质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG(终浓度为1.0mmol/mL)37℃诱导4h后,SDS-PAGE电泳显示表达了大小约50ku带GST标签的融合蛋白,薄层扫描显示表达蛋白量占菌体总蛋白的33.2%。Western blot分析表明该VP7重组蛋白可与PRV阳性血清特异性反应。

关键词：猪轮状病毒 VP7基因克隆原核表达

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猪传染性胃肠炎病毒TaqMan荧光定量RT2PCR检测方法的建立

猪传染性胃肠炎病毒TaqMan荧光定量RT2PCR检测方法的建立

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：白兴华冯力陈建飞时洪艳孙东波吴波平高秀春中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室东北农业大学

根据猪传染性胃肠炎病毒和猪肌动蛋白的基因序列设计合成了引物和探针,通过对荧光定量RT-PCR反应条件的优化,建立了TaqMan荧光定量RT2PCR检测TGEV的方法。同时对37份现地病料进行检测并与常规RT-PCR方法、TGEV抗原快速检测试剂盒比较。... 详细信息

根据猪传染性胃肠炎病毒和猪肌动蛋白的基因序列设计合成了引物和探针,通过对荧光定量RT-PCR反应条件的优化,建立了TaqMan荧光定量RT2PCR检测TGEV的方法。同时对37份现地病料进行检测并与常规RT-PCR方法、TGEV抗原快速检测试剂盒比较。结果,该方法的检测敏感性达到15.3拷贝/μL,且具有很好的特异性和重复性,而常规RT2PCR方法只能检测到1.53×103拷/μL。对37份现地病料的检测结果也表明该法(检出17份)比常规RT2PCR方法(检出12份)和TGEV抗原快速检测试剂盒(免疫层析法,检出10份)的敏感性高。

关键词：猪传染性胃肠炎病毒 TaqMan探针荧光定量RT2PCR

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猪瘟病毒JL-1(06)株的分离鉴定及其全基因组序列分析

猪瘟病毒JL-1(06)株的分离鉴定及其全基因组序列分析

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：金美伶成丹孙元李娜彭伍平夏照和仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室延边大学农学院

用PK15细胞从吉林某猪场疑似急性猪瘟仔猪的脾脏中分离出1株猪瘟病毒,命名为JL-1(06)。参照已发表的猪瘟病毒基因组序列设计了9对引物,用RT-PCR从细胞培养物中扩增得到了JL-1(06)基因组全长的9个cDNA片段,将所得cDNA片段分别克隆至pMD1... 详细信息

用PK15细胞从吉林某猪场疑似急性猪瘟仔猪的脾脏中分离出1株猪瘟病毒,命名为JL-1(06)。参照已发表的猪瘟病毒基因组序列设计了9对引物,用RT-PCR从细胞培养物中扩增得到了JL-1(06)基因组全长的9个cDNA片段,将所得cDNA片段分别克隆至pMD18-T载体中,经测序和拼接后,获得了JL-1(06)株基因组全序列。序列分析表明,JL-1(06)基因组全长12298bp,含有1个大的开放阅读框架(ORF),编码1个由3898个氨基酸组成的多聚蛋白,其5-UTR和3-UTR分别由373和231bp组成。该分离株与与石门株的核苷酸和氨基酸同源性在99.4%以上,表明JL-1(06)属于1基因型中的1.1基因亚型。

关键词：猪瘟病毒病毒分离基因组序列同源性分析

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猪流行性腹泻病毒CH/S株N蛋白基因的遗传变异及其原核表达

猪流行性腹泻病毒CH/S株N蛋白基因的遗传变异及其原核表达

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：陈建飞冯力时洪艳孙东波白兴华佟有恩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室哈尔滨维科生物技术开发公司

应用RT-PCR和nested-PCR方法扩增得到含猪流行性腹泻病毒CH/S株N蛋白基因的目的片段,并将其进行了克隆、序列测定及分析。CH/S株N蛋白基因含有一个长1326bp的ORF,编码由441个氨基酸残基组成的多肽,未发现碱基的插入和缺失。CH/S与CV777... 详细信息

应用RT-PCR和nested-PCR方法扩增得到含猪流行性腹泻病毒CH/S株N蛋白基因的目的片段,并将其进行了克隆、序列测定及分析。CH/S株N蛋白基因含有一个长1326bp的ORF,编码由441个氨基酸残基组成的多肽,未发现碱基的插入和缺失。CH/S与CV777、Chinju99、JS-2004-2和LJB/03N蛋白基因ORF的序列同源性分别为97.1%、96.8%、96.7%和96.5%;推导的氨基酸序列的同源性分别为97.7%、97.1%、97.1%和96.8%。以阳性质粒为模板,用分别含有BamHⅠ和ZhoⅠ酶切位点的上、下游引物扩增得到ORF,其PCR产物经BamHHⅠ和XhoⅠ双酶切后定向克隆到pET-30a载体,构建的重组质粒命名为pET-30a-PN;将pET-30a-PN转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,在IPTG诱导下进行表达;SDS-PAGE结果表明表达出与预期大小相符的约54.4ku的重组蛋白,重组蛋白以包涵体形式存在;薄层扫描结果表明表达产物占菌体总蛋白的30.5%;Western blot分析表明表达的重组蛋白能与抗PEDV高免血清反应,说明该重组蛋白具有免疫学活性。

关键词：猪流行性腹泻病毒 N蛋白基因序列同源性重组蛋白免疫学活性

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PEDV S蛋白B细胞抗原表位的筛选和鉴定

PEDV S蛋白B细胞抗原表位的筛选和鉴定

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：孙东波朗洪武时洪艳陈建飞崔晓辰王承宝佟有恩冯力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室中国兽医药品监察所

以猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S基因的免疫优势区S1(1bp～2367bp)为靶基因,利用基于gIII表达外源多肽的fd丝状噬菌体展示系统,构建S1基因噬菌体展示肽库,以纯化的兔抗PEDV多克隆血清为靶蛋白对S1基因噬菌... 详细信息

以猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S基因的免疫优势区S1(1bp～2367bp)为靶基因,利用基于gIII表达外源多肽的fd丝状噬菌体展示系统,构建S1基因噬菌体展示肽库,以纯化的兔抗PEDV多克隆血清为靶蛋白对S1基因噬菌体展示肽库进行3轮生物淘选,结果获得3个高亲和力的序列,分别命名为S1P1(248aa～280aa)、S1P2(442aa～499aa)和S1P3(697aa～742aa)。ELISA和Western blot结果显示,S1P1、S1P2和S1P3短肽都能被兔抗PEDV多克隆血清识别,其中S1P3反应性最强。为了进一步揭示S1P1、S1P2和S1P3短肽的抗原性,3个短肽GST融合蛋白和它们串连后GST融合蛋白的单因子血清被制备,间接免疫荧光试验(IFA)结果证实,抗S1P2-GST、S1P3-GST和S1P123-GST融合蛋白的单因子血清能够识别Vero细胞培养物中天然的PEDV。

关键词：猪流行性腹泻病毒 S蛋白抗原表位噬菌体展示

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免疫层析快速诊断试纸条的制备及在养猪业上的应用

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畜禽业 2008年第1期19卷 72-75页

作者：周盛华崔尚金戚亭岳丰雄张超范东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室

胶体金免疫层析技术是一种微量、特异、简便和结果容易判定的新的检测方法,非常适用于基层兽医和猪场。本文综述了免疫层析快速诊断试纸条的基本原理、制备方法、标记技术以及目前在养猪业上的应用情况。

关键词：胶体金试纸条猪病

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鸡传染性支气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗免疫产生期的研究

鸡传染性支气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗免疫产生期的研究

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十四次学术研讨会

作者：石星明王云峰王玫兰德松孙妍曾伟伟童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室辽宁省动物疫病预防控制中心中国农业科学院上海兽医研究所

1前言在疫苗使用的过程中,必须要确定疫苗的免疫产生时间,因为疫苗免疫之后,在激发免疫之前通常有一段免疫空白期,此时容易受到病原体的攻击。因此,只有免疫及时,才可以在现地复杂的生态环境中,使疫苗发挥最佳的效果。

关键词：重组鸡痘病毒鸡传染性支气管炎母源抗体

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