检索结果-内蒙古大学图书馆

动物医学进展 2007年第3期28卷 26-30页

作者：张艳萍刘长军秦运安张晓巍张颖中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

从感染鸡马立克病病毒血清Ⅰ型(MDVⅠ)814株的鸡胚成纤维细胞(CEF)中提取病毒总DNA,以其为模板,根据GenBank中MDVⅠGA株基因组gE、gI、gp82基因序列,设计并合成3对特异性引物,用PCR方法分别扩增了814株的gE、gI、gp82基因,并将扩增的基... 详细信息

从感染鸡马立克病病毒血清Ⅰ型(MDVⅠ)814株的鸡胚成纤维细胞(CEF)中提取病毒总DNA,以其为模板,根据GenBank中MDVⅠGA株基因组gE、gI、gp82基因序列,设计并合成3对特异性引物,用PCR方法分别扩增了814株的gE、gI、gp82基因,并将扩增的基因片段克隆到pMD18-T载体中,进行序列测定,应用DNA Star软件分析814株gE、gI、gp82基因核苷酸序列,并与已发表的MDVⅠ毒株序列进行了比较。结果表明,不同MDVⅠ毒株的gE、gI、gp82基因同源性很高,814株与已发表的MDVⅠ毒株的gE、gI、gp82基因核苷酸序列同源性分别在99.4%、98.9%和99.6%以上。

关键词：鸡马立克病病毒基因序列分析

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传染性法氏囊病病毒主要宿主保护性抗原蛋白在毕赤酵母中的表达

传染性法氏囊病病毒主要宿主保护性抗原蛋白在毕赤酵母中的表达

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2007年中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会学术研讨会

作者：高宏雷高玉龙祁小乐张宁李俊山王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨 150001

目的：为了建立一个抗鸡传染性法氏囊病流行毒株基因工程亚单位疫苗的快速开发系统。方法：利用基因合成技术合成经优化改造的传染性法氏囊病病毒超强毒Gx株主要宿主保护性抗原蛋白VP2基因，将合成基因插入毕赤酵母基因组，对重组... 详细信息

目的：为了建立一个抗鸡传染性法氏囊病流行毒株基因工程亚单位疫苗的快速开发系统。方法：利用基因合成技术合成经优化改造的传染性法氏囊病病毒超强毒Gx株主要宿主保护性抗原蛋白VP2基因，将合成基因插入毕赤酵母基因组，对重组毕赤酵母菌株进行诱导。对表达产物进行SDS-PAGE、Dot ELISA及western blot分析。结果：病毒主要宿主保护性抗原蛋白在毕赤酵母中获得表达，表达产物具有免疫原性。结论：成功建立了一个快速有效的开发抗鸡传染性法氏囊病新型基因工程亚疫苗的毕赤酵母表达系统，该系统也适用其它疫病疫苗的快速开发。

关键词：鸡传染性法氏囊病病毒毕赤酵母免疫原性疫苗

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IBDV反向遗传操作系统的建立和基因功能研究

IBDV反向遗传操作系统的建立和基因功能研究

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中国畜牧兽医学会2007年学术年会

作者：祁小乐高玉龙高宏雷邓小芸步志高王晓燕秦立延王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨 150001

克隆了IBDV Gt株的全基因组和F9代毒的VP2并进行序列分析。首次用新颖的思路构建了RNA polymerase Ⅱ介导的IBDV反向遗传操作系统，并研究了VP2、VP3、VP4的功能，对进一步了解IBDV的结构与功能意义重大。

关键词： IBDV 反向遗传操作嵌合病毒基因功能

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基因修饰的鸡新城疫病毒F48E9株HN基因DNA疫苗的构建及其免疫效力评价

基因修饰的鸡新城疫病毒F48E9株HN基因DNA疫苗的构建及其免疫效力...

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中国畜牧兽医学会2007年学术年会

作者：贺笋王云峰木古丽石星明王玫童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨 150001 新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐 830052 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨 150001

DNA疫苗的免疫效果与抗原基因的表达量和免疫原性有直接关系，为了提高目的基因的表达量，增强其免疫效果，本研究对NDV F48E9株的HN基因进行了修饰，将NDV F48E9株的HN基因的密码子全部替换为鸡体内偏嗜性密码子，同时在HN基因的5’端... 详细信息

DNA疫苗的免疫效果与抗原基因的表达量和免疫原性有直接关系，为了提高目的基因的表达量，增强其免疫效果，本研究对NDV F48E9株的HN基因进行了修饰，将NDV F48E9株的HN基因的密码子全部替换为鸡体内偏嗜性密码子，同时在HN基因的5’端加上同样已替换密码子的禽流感病毒HA蛋白信号肽序列。修饰后HN基因命名为SoptiHN，剔除信号肽的HN基因命名为optiHN。将SoptiHN、optiHN和F48E9株的HN基因分别克隆到真核表达载体pVAX1和含有多个鸡体内最适免疫刺激序列CpG-ODN的载体pVAX1-CpG中，将他们分别命名为pV-SopliHN、pVC-SoptiHN、pV-optiHN、pVC-optiHN和pV-HN、pVC-HN，用这些质粒转染293T细胞，48h后间接免疫荧光和West-blotting检测细胞中瞬时表达的HN蛋白。结果显示，与未经修饰的HN基因相比，修饰后的HN基因体外瞬时表达水平明显提高，并且密码子优化与添加信号肽序列这两种途径都可以提高HN基因的体外表达量。将质粒pVAx1、pvAx1-CpG、pV-HN、pVC-HN、pV-Sop-tiHN和pVC-SoptiHN采用四头肌多点注射三周龄SPF鸡，每只鸡200μg，PBS设为空对照组;一免后三周以相同的剂量加强免疫，二免后以103 EID50 NDV的F48E9强毒株进行攻毒，计算发病率、死亡率、以及排毒情况。免疫前后，及攻毒前后每周采集血清和外周血淋巴计算Ⅷ抗体和细胞因子IFN-γ和IL-18动态变化情况。分析结果表明，相比NDV F48E9马株的HN基因而言，修饰后的HN基因可以诱导更加强烈的免疫反应，产生更好的保护效率。

关键词：鸡新城疫病毒 DNA疫苗密码子优化信号肽免疫印迹

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一种猪疱疹病毒的分离与鉴定

一种猪疱疹病毒的分离与鉴定

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会

作者：田志军仇华吉童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室

2006年在哈尔滨郊区进行猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)流行病学调查时,在一个疑似PRRSV的猪场分离到一株病毒,该病毒可以适应猪肾细胞(PK15和IBRS2)、猪睾丸细胞(ST),但不适应Vero、Marc-145、BHK21和鸡胚成纤维细胞(CEF)。在猪源细胞上可... 详细信息

2006年在哈尔滨郊区进行猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)流行病学调查时,在一个疑似PRRSV的猪场分离到一株病毒,该病毒可以适应猪肾细胞(PK15和IBRS2)、猪睾丸细胞(ST),但不适应Vero、Marc-145、BHK21和鸡胚成纤维细胞(CEF)。在猪源细胞上可以形成明显的细胞病变(CPE),表现为病变细胞聚集成丛,变形和脱落,病毒滴度为105.5-6.5TCID50/ml。将病变细胞进行超薄切片和冻融后高速离心负染电镜观察,均可看到典型的带有囊膜,直径在200nm左右的疱疹病毒粒子,命名为LH-TP1。该病毒比较脆弱,传至第8代时虽然细胞病变比较明显,但电镜观察时发现几乎很难发现带有囊膜的病毒粒子。用伪狂犬病毒(PRV)阳性血清不能中和该病毒,也不与该病毒细胞培养物发生荧光反应。用猪瘟病毒(CSFV)E2基因、PRRSV GP5和N基因、圆环病毒II型(PCV-2)ORF2基因、口蹄疫病毒(FMDV)VP2基因、PRV gB、gE、gG基因和猪巨细胞病毒(PCMV)gB基因引物对该病毒培养物进行PCR扩增,结果均为阴性。我们用蛋白酶K和SDS裂解方法提取该病毒感染细胞的总DNA和经过超离纯化后的病毒DNA,电泳时发现条带非常弱,而作为对照的PRV感染细胞后提取DNA的电泳条带非常亮,说明我们分离的病毒具有强烈降解细胞和病毒DNA的作用。动物试验:将LH-TP1第3代细胞毒以2×105.5TCID50/头滴鼻和肌肉接种5头40日龄健康仔猪,观察21天,仔猪表现出一过性的升温,皮肤发红,厌食和精神沉郁,剖杀后未见各脏器有肉眼可见的病理变化。接种仔猪产生了针对LH-TP1的特异性荧光抗体(IFA)和中和抗体(VN)。以上结果表明,我们分离的病毒LH-TP1不是PRV和PCMV,可能是一种新的猪疱疹病毒,该疱疹病毒只能适应猪源细胞并产生明显的CPE,病毒比较脆弱,具有降解DNA的能力,对仔猪呈低致病性。

关键词：猪疱疹病毒细胞病变 PRV 分离与鉴定

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SARS冠状病毒S蛋白抗原表位富集区的表达与初步应用

SARS冠状病毒S蛋白抗原表位富集区的表达与初步应用

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2007年中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会学术研讨会

作者：华荣虹童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室哈尔滨 150001

扩增并克隆了编码SARS-CoV S蛋白中包含多个抗原表位的第539～630氨基酸残基区域的基因片段。基因片段经酶切处理后插入表达载体pGEX-6p-1的Bam HI和XhoI位点之间，构建成融合表达质粒，转化宿主菌BL21经IPTG诱导后融合基因得到了表达... 详细信息

扩增并克隆了编码SARS-CoV S蛋白中包含多个抗原表位的第539～630氨基酸残基区域的基因片段。基因片段经酶切处理后插入表达载体pGEX-6p-1的Bam HI和XhoI位点之间，构建成融合表达质粒，转化宿主菌BL21经IPTG诱导后融合基因得到了表达，表达产物可用谷胱甘肽sepharose 4B RediPack亲和层析柱纯化。用5份SARS患者康复期血清对表达融合蛋白进行ELISA和免疫印迹试验分析融合蛋白的免疫反应性，结果表明重组融合抗原在ELISA和免疫印迹试验中与全部5份SARS患者康复期血清均具有良好的免疫反应性。试验结果提示该SARs-CoV S蛋白第539～630氨基酸残基区域可作为SARS诊断抗原。

关键词：冠状病毒抗原表位免疫反应免疫印迹融合蛋白 SARS病毒

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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-PCR鉴别诊断方法的建立

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-PCR鉴别诊断方法的建立

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第三次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会

作者：郝晓芳周艳君田志军韦天超安同庆彭金美华荣虹童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨 150001

2006年5月以来,我国部分猪场爆发一种以高热、高发病率和高死亡率为特征的传染性疾病,经病原分离及分子流行病学分析证明是由一种带有nsp2部分缺失的对猪呈高致病性的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的。本实验参考GenBank发表的以... 详细信息

2006年5月以来,我国部分猪场爆发一种以高热、高发病率和高死亡率为特征的传染性疾病,经病原分离及分子流行病学分析证明是由一种带有nsp2部分缺失的对猪呈高致病性的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的。本实验参考GenBank发表的以及本实验室分离鉴定PRRSV的nsp2基因序列,在紧靠上述nsp2缺失区的两端的保守区设计并合成了一对引物,建立了一种PRRSV的RP-PCR检测方法。该方法扩增高致病性PRRSV基因组获得230bp的片段,扩增经典型PRRSV时则获得320bp的片段,通过RT-PCR产物大小可将二者区分开来。通过大量临床病料的检测,配合PCR产物测序验证,结果表明该方法简便、快速、特异,可以鉴别高致病性PRRSV,为进一步的PRRS流行病学研究提供了重要的技术手段。

关键词：高致病性传染病猪繁殖与呼吸综合征病毒病原分离基因缺失 RT-PCR检测鉴别诊断

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鸡马立克氏病病毒814株细菌人工染色体的构建

鸡马立克氏病病毒814株细菌人工染色体的构建

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中国畜牧兽医学会2007年学术年会

作者：崔红玉王云峰石星明童光志兰德松何来仇华吉刘长军王玫中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨 150001 河北北方学院动物科技学院动物医学系张家口 075131 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨 150001

本研究通过构建表达Eco-gpt(Xanthine-guaninephosphoribosyl transferase，XGPRT，gpt)的哺乳动物细胞基因转移遗传选择标记(1.3kb)和带有细菌人工染色体(BacterialArtificial Chromosome，BAC)基本功能基因序列的鸡马立克氏病病毒重组病毒转移载体pUAB-gpt-BAC11，将重组病毒转移栽体与鸡马立克氏病病毒细胞总DNA共转染鸡胚成纤维细胞，在选择培养基中经过加压筛选，获得并纯化重组病毒;将重组病毒细胞总DNA电转化大肠杆菌，筛选共获得38个BAC分子克隆化病毒，提取BAC-DNA转染鸡胚成纤维细胞以拯救重组病毒。结果，再次启动病毒感染，拯救了重组鸡马立克氏病病毒。本研究成功构建了鸡马立克氏病病毒814株基因组全长感染性细菌人工染色体，为病毒的反向遗传操作提供技术平台。

关键词：鸡马立克氏病病毒细茵人工染色体分子克隆化病毒病毒感染分子克隆

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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-PCR鉴别诊断方法的建立

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-PCR鉴别诊断方法的建立

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2007年中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会学术研讨会

作者：郝晓芳周艳君田志军韦天超安同庆彭金美华荣虹童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨 150001

2006年5月以来，我国部分猪场爆发一种以高热、高发病率和高死亡率为特征的传染性疾病，经病原分离及分子流行病学分析证明是由一种带有nsp2部分缺失的对猪呈高致病性的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的。本实验参考GenBank发表的... 详细信息

2006年5月以来，我国部分猪场爆发一种以高热、高发病率和高死亡率为特征的传染性疾病，经病原分离及分子流行病学分析证明是由一种带有nsp2部分缺失的对猪呈高致病性的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的。本实验参考GenBank发表的以及本实验室分离鉴定的PRRSV的nsp2基因序列，在紧靠上述nsp2缺失区的两端的保守区设计并合成了一对引物，建立了一种PRRSV的RT-PCR检测方法。该方法扩增高致病性PRRSV基因组获得230bp的片段，扩增经典型PRRSV时则获得320bp的片段，通过RT-PCR产物大小可将二者区分开来。通过大量临床病料的检测，配合PCR产物测序验证，结果表明该方法简便、快速、特异，可以鉴别高致病性PRRSV，为进一步的PRRS流行病学研究提供了重要的技术手段。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒基因缺失鉴别诊断

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火鸡疱疹病毒细菌人工染色体的构建

火鸡疱疹病毒细菌人工染色体的构建

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第七届全国病毒学学术研讨会暨第二届武汉现代病毒学国际研讨会

作者：兰德松崔红玉石星明王云峰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室河北北方学院动物科技学院

HVT 为一种α疱疹病毒,因其与 MDV 抗原相关性而被广泛用作预防 MD 的活疫苗。本研究利用 Eco-gpt(黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶)基因和细菌人工染色体(BAC)载体 pBeloBAC11的基本功能序列,构建了重组病毒转移载体

关键词：火鸡疱疹病毒病毒拯救细菌人工染色体 BAC 分子克隆化病毒

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