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作者：郑楠符芳柴政姜福成王香玲张雪云王卓李曦中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江八一农垦大学黑龙江大庆163319 哈尔滨师范大学黑龙江哈尔滨150080

为筛选具有临床诊断价值的副猪嗜血杆菌(***)单克隆抗体(MAb),本研究采用***5型强毒株(HPS-5)免疫BALB/c小鼠,利用常规细胞融合技术制备了1株稳定分泌MAb的杂交瘤细胞株。Western blot结果表明该MAb能够特异性识别所有***标准菌株;免疫... 详细信息

为筛选具有临床诊断价值的副猪嗜血杆菌(***)单克隆抗体(MAb),本研究采用***5型强毒株(HPS-5)免疫BALB/c小鼠,利用常规细胞融合技术制备了1株稳定分泌MAb的杂交瘤细胞株。Western blot结果表明该MAb能够特异性识别所有***标准菌株;免疫沉淀技术与蛋白质谱分析显示该MAb所识别蛋白为ATP结合盒转运蛋白(ABCT)家族的寡肽透过酶(OppA);利用MAb对噬菌体12肽库进行淘选,8个阳性噬菌体克隆展示有“KTPAE-R”保守序列,对应于*** SH29755株和SH0165株的469位～475位的氨基酸残基。对OppA氨基酸序列比对结果表明***与其它10种猪常见细菌病病原序列一致性为9.1％～74.5％,本研究结果为进一步研究***感染的病原学诊断建立了良好的基础。

关键词：副猪嗜血杆菌单克隆抗体抗原表位鉴别诊断

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猪圆环病毒2型Cap蛋白保守序列突变可降低其表达量并阻碍Cap与Rep蛋白共定位抑制病毒复制

猪圆环病毒2型Cap蛋白保守序列突变可降低其表达量并阻碍Cap与Rep...

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2013国际猪繁殖与呼吸综合征学术研讨会

作者：黄立平 Nicolaas R.C.Van Renne Dipongkor Saha Jan Van Doorsselaere Uladzimir Karniychuk 刘长明 Hans J.Nauwynck Laboratory of Virology Faculty of Veterinary Medicine Ghent University Merelbeke Belgium 中国农业科学院 Laboratory of Virology Faculty of Veterinary Medicine Ghent University Merelbeke Belgium Department of Health Care and Biotechnology KATHO Catholic University College of South-West Flander 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

背景猪圆环病毒2型(PCV2)是断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原,该病给养猪业带来巨大的经济损失.PCV2 Cap蛋白上保守序列97RIRKVKV103可能是该病毒的受体结合位点,然而Cap蛋白的结构显示该序列位于病毒粒子的内部,因此该序列...

背景猪圆环病毒2型(PCV2)是断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原,该病给养猪业带来巨大的经济损失.PCV2 Cap蛋白上保守序列97RIRKVKV103可能是该病毒的受体结合位点,然而Cap蛋白的结构显示该序列位于病毒粒子的内部,因此该序列作为受体结合位点的功能受到质疑.该序列在PCV2毒株之间高度保守,可能具有重要功能.本研究旨在阐明该保守序列在PCV2复制过程中的功能.

关键词：

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一株高致病性猪繁殖与呼吸综合征疫苗株HuN4-F112N蛋白单克隆抗体不识别其强毒株HuN4-F5与其氨基酸序列无关

一株高致病性猪繁殖与呼吸综合征疫苗株HuN4-F112N蛋白单克隆抗体...

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2013国际猪繁殖与呼吸综合征学术研讨会

作者：王倩安同庆彭金美陈家锃冷超粮孙艳田志军杨汉春中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验/室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 中国农业大学动物医学院农业部动物流行病学与人畜共患病重点实验室北京100193 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验/室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 中国农业大学动物医学院农业部动物流行病学与人畜共患病重点实验室北京100193

2006年,以Nsp2编码区30-aa缺失为特征的高致病性PRRSV (HP-PRRSV)的出现和流行给我国养猪业造成巨大的经济损失.本实验室通过将HP-PRRSV HuN4株在Marc-145细胞上传了112代得到一个致弱毒株HuN4-F112.序列分析显示HuN4-F112与其强毒株HuN...

2006年,以Nsp2编码区30-aa缺失为特征的高致病性PRRSV (HP-PRRSV)的出现和流行给我国养猪业造成巨大的经济损失.本实验室通过将HP-PRRSV HuN4株在Marc-145细胞上传了112代得到一个致弱毒株HuN4-F112.序列分析显示HuN4-F112与其强毒株HuN4-F5之间存在数目不多、散在的氨基酸突变,然而它的生物学特性已经发生了很大的改变.如何找出它们之间的抗原性差异对于研究它致弱的分子机制具有重要意义.

关键词：

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蛋鸡J亚群禽白血病病毒3′非编码区序列特征分析

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畜牧兽医学报 2012年第11期43卷 1841-1846页

作者：高玉龙贠炳岭秦立廷潘伟王永强高宏雷祁小乐王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨150001

蛋用型鸡虽在试验条件下可以感染ALV-J,但自然感染时很少引起发病。然而,近年来在中国蛋鸡群中ALV-J发病严重,本研究对2008年以来ALV-J蛋鸡分离株的3′非编码区(3′UTR)进行了系统的分析。结果表明,89.5%(17/19)的ALV-J蛋鸡分离株的3′... 详细信息

蛋用型鸡虽在试验条件下可以感染ALV-J,但自然感染时很少引起发病。然而,近年来在中国蛋鸡群中ALV-J发病严重,本研究对2008年以来ALV-J蛋鸡分离株的3′非编码区(3′UTR)进行了系统的分析。结果表明,89.5%(17/19)的ALV-J蛋鸡分离株的3′UTR出现了205bp的缺失,94.7%(16/17)ALV-J蛋鸡分离株保留了完整的E元件。84.2%(16/19)的ALV-J蛋鸡分离株的U3区序列与肉鸡分离株的相似性低于92.5%,所有转录调控元件高度保守。ALV-J蛋鸡分离株的E元件和U3区均出现了多个碱基的突变。这些结果表明,ALV-J蛋鸡分离株的E元件和U3区正在迅速的演化,明显不同于肉鸡分离株的序列特征。这些发现有助于更好地了解ALV-J引起蛋鸡群发病的致病机理。

关键词： J亚群禽白血病病毒分子特征 3’非编码区 LTR蛋鸡

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高致病性PRRSV与PCV2共感染协同致病性研究

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中国农业科学 2012年第18期45卷 3859-3872页

作者：范培虎危艳武郭龙军吴洪丽黄立平刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

【目的】为阐明高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)的协同致病作用,澄清两种病毒不同时间顺序共感染与其协同致病力之间的关系。【方法】选取35日龄阴性健康猪30头,随机分6组,PCV2/HP-PRRSV顺序共感染组、H... 详细信息

【目的】为阐明高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)的协同致病作用,澄清两种病毒不同时间顺序共感染与其协同致病力之间的关系。【方法】选取35日龄阴性健康猪30头,随机分6组,PCV2/HP-PRRSV顺序共感染组、HP-PRRSV/PCV2顺序共感染组、HP-PRRSV+PCV2同时共感染组、HP-PRRSV感染组、PCV2感染组、未接种对照组。感染后每天测量体温、观察临床症状,每周称量体重、采血。用流式细胞仪检测血液中的CD3+CD4+CD8-、CD3+CD4-CD8+、γδT、NK细胞及粒细胞和单核细胞变化;免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)检测这两种病毒抗体变化;用ELISA法检测血清中IFN-γ、TNF-α、IL-10、IL-2、GM-CSF细胞因子变化;用荧光定量PCR法检测血清和组织中病毒载量。对各组试验猪进行组织病理学观察。【结果】HP-PRRSV/PCV2顺序共感染组临床症状最严重,死亡率达60%;组织和血清中病毒载量显著高于其它组,抗体滴度明显低于其它组;淋巴细胞亚群及细胞因子(尤以TNF-α)变化也最为明显。【结论】HP-PRRSV和PCV2之间存在协同致病作用,且猪群先感染HP-PRRSV后感染PCV2可明显提高猪群发病率和死亡率。本研究对临床HP-PRRSV和PCV2的综合防制提供科学依据。

关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒猪圆环病毒2型共感染协同致病性

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猪圆环病毒2型疫苗的研究进展

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畜牧兽医学报 2012年第9期43卷 1337-1345页

作者：王一平郭龙军唐青海刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室哈尔滨150001

猪圆环病毒2型(PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原,给全球养猪业造成了巨大经济损失。PCV2感染可以破坏动物机体的免疫系统,造成严重的免疫抑制,容易诱发多种细菌及病毒的混合感染与继发感染,给疾病的诊断和治疗带... 详细信息

猪圆环病毒2型(PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原,给全球养猪业造成了巨大经济损失。PCV2感染可以破坏动物机体的免疫系统,造成严重的免疫抑制,容易诱发多种细菌及病毒的混合感染与继发感染,给疾病的诊断和治疗带来巨大的困难。疫苗免疫接种是防控PCV2感染的有效手段,有关PCV2疫苗的研究已成为国内外学者的关注热点。迄今为止,欧美几家跨国公司已先后推出商品化的PCV2灭活疫苗、亚单位疫苗及嵌合病毒疫苗,国内也已研制出PCV2灭活疫苗,这些疫苗的推广应用为有效防控猪圆环病毒病发挥了重要作用。鉴于这些疫苗尚不能完全阻断PCV2传播,无法彻底清除体内感染的病毒,因此,开发高效、价廉的新型活载体疫苗、核酸疫苗及标记疫苗是今后研究的趋势。笔者在本文中概括地介绍了目前商品化的PCV2疫苗的特性和免疫效力,并对近年来有关PCV2活载体疫苗、核酸疫苗及标记疫苗等新型疫苗的研究进展进行综述,以期为猪圆环病毒病的防制提供参考。

关键词：猪圆环病毒2型疫苗研究

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鸭肠炎病毒gL蛋白在鸡胚成纤维细胞中动态表达的检测

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中国预防兽医学报 2012年第1期34卷 19-23页

作者：李冰李慧昕王钰韩宗玺邵昱昊刘小丽孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所禽传染病研究室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为研究鸭肠炎病毒(DEV)gL蛋白在感染鸡胚成纤维细胞(CEF)过程中的表达情况,本研究以DEVClone-03基因组为模板,应用PCR方法分别扩增得到截短的(gLt,181 bp～711 bp)和全长的gL(1 bp～711 bp)两个基因片段。将gLt基因片段克隆至pET-30a原... 详细信息

为研究鸭肠炎病毒(DEV)gL蛋白在感染鸡胚成纤维细胞(CEF)过程中的表达情况,本研究以DEVClone-03基因组为模板,应用PCR方法分别扩增得到截短的(gLt,181 bp～711 bp)和全长的gL(1 bp～711 bp)两个基因片段。将gLt基因片段克隆至pET-30a原核表达载体,转化*** BL21(DE3),经IPTG诱导表达并对表达产物进行纯化复性,免疫BALB/c小鼠,制备鼠抗gL蛋白多克隆抗体。同时将全长gL基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),构建真核表达重组质粒pcDNA-gL,转染293T细胞。采用获得的抗gL蛋白抗体检测DEV感染CEF后及真核表达质粒pcDNA-gL转染293T细胞后gL蛋白在不同时间点的表达情况。结果表明,在pcDNA-gL转染293T细胞后12 h应用western blot方法能够检测到gL蛋白的表达,其表达量随着转染时间增加而增加;在病毒感染CEF后24 h应用间接免疫荧光方法能够检测到gL蛋白少量的表达,western blot方法在病毒感染CEF48 h后检测到gL蛋白的表达,其表达量随着病毒感染时间增加而增加。上述结果提示,编码gL蛋白基因可能是病毒复制的晚期表达基因。

关键词：鸭肠炎病毒 gL糖蛋白原核表达真核表达

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新城疫病毒感染鸡肾脏组织蛋白质组学方法条件的优化

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中国预防兽医学报 2012年第5期34卷 360-364页

作者：于德民韩宗玺邵昱浩刘晓丽孔宪刚刘胜旺中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为研究新城疫病毒(NDV)与宿主组织细胞之间的相互作用关系,本研究以NDV疫苗(La Sota)接种的鸡肾脏组织为材料,对其差异蛋白的表达进行分析,通过条件的优化,建立了NDV感染鸡肾脏组织的双向凝胶电泳检测方法。采用ImageMaster2D Platinum ... 详细信息

为研究新城疫病毒(NDV)与宿主组织细胞之间的相互作用关系,本研究以NDV疫苗(La Sota)接种的鸡肾脏组织为材料,对其差异蛋白的表达进行分析,通过条件的优化,建立了NDV感染鸡肾脏组织的双向凝胶电泳检测方法。采用ImageMaster2D Platinum version 6.0软件对电泳图谱分析后显示:24 cm IPG胶条(pH4～pH7)对应的凝胶中可检测到约1 400个蛋白点,蛋白点匹配率达90%,表明NDV感染鸡肾脏组织蛋白质组双向凝胶电泳模型稳定、分辨率高、重复性好,在对4个时间点对照和人工感染凝胶分析过程中发现差异蛋白点主要集中于接种后7 d,该样品的2-DE电泳图谱中共有29个差异表达明显的蛋白点,其中上调表达蛋白点有15个,下调表达蛋白点有14个,利用荧光定量PCR对其中4个差异蛋白在mRNA水平进行检测,结果与双向电泳结果一致,NDV接种鸡肾脏组织蛋白质组学方法的建立为NDV致病机理的研究提供有效的方法。

关键词：新城疫病毒双向凝胶电泳差异蛋白质组学鸡肾脏组织

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表达鸡新城疫病毒F蛋白的重组马立克氏病毒的构建及其鉴定

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中国预防兽医学报 2012年第6期34卷 423-427页

作者：闫帅崔红玉李巧玲赵妍石星明赵晓岩胡顺磊王玫高明李越王云峰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为构建表达鸡新城疫病毒(NDV)融合蛋白(F)的重组马立克氏病毒(MDV),本研究采用RT-PCR方法从NDV强毒株F48E9基因组中扩增出病毒的融合蛋白F基因,构建由CMV启动子和BGH polyA组成的2.7 kb F基因表达盒。将其插入带有黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核... 详细信息

为构建表达鸡新城疫病毒(NDV)融合蛋白(F)的重组马立克氏病毒(MDV),本研究采用RT-PCR方法从NDV强毒株F48E9基因组中扩增出病毒的融合蛋白F基因,构建由CMV启动子和BGH polyA组成的2.7 kb F基因表达盒。将其插入带有黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶基因(gpt)和MDV US2同源臂的中间转移载体pUAB-gpt中获得重组MDV转移载体pUAB-gpt-wF。将该转移载体与MDV-814疫苗株感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)总DNA共转染CEF,经同源重组及gpt选择系统筛选,获得带有F基因表达盒的重组MDV(rMDV814-wF)。其体外增殖与亲本病毒没有差异。经间接免疫荧光试验、PCR、Southern-blot及western blot等试验证明,重组病毒在CEF中传至13代以上仍稳定表达NDV的F蛋白。该重组病毒的构建为MDV活载体疫苗的筛选及应用奠定了基础。

关键词：马立克氏病毒转移载体重组病毒 F基因

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鸡马立克氏病病毒LMS分离株基因组重复区的测定及分析

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中国预防兽医学报 2012年第6期34卷 492-494页

作者：成云张艳萍李志杰郑永胜谭成章刘长军中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为分析鸡马立克氏病病毒(MDV)LMS分离株的分子遗传特性,本研究对该分离株基因组重复区(包括连接长重复区和短重复区的α样序列)进行了测定。LMS分离株基因组的长重复区为11 746 bp,α样序列为997 bp,短重复区为12 431 bp。在重复区内,... 详细信息

为分析鸡马立克氏病病毒(MDV)LMS分离株的分子遗传特性,本研究对该分离株基因组重复区(包括连接长重复区和短重复区的α样序列)进行了测定。LMS分离株基因组的长重复区为11 746 bp,α样序列为997 bp,短重复区为12 431 bp。在重复区内,预测存在43个ORF,与参考病毒株序列相比存在5个变异较大的ORF。重复区的遗传进化分析表明,LMS分离株与国内814株和欧洲pC12-130株亲缘关系较近。LMS分离株在短重复区潜伏相关转录本(LATs)编码序列的预测转录起始位点位置存在缺失;LMS分离株在α样序列内存在一个新的短重复序列。

关键词：鸡马立克氏病病毒序列测定与分析重复区 α样序列

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