检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2012年第12期34卷 933-936页

作者：刘海芳杜承林跃智王雪峰周建华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

为研究马传染性贫血病毒(EIAV)感染其主要靶细胞马巨噬细胞(eMDM)后与细胞蛋白的相互作用,本研究采用EIAV强毒株EIAVDLV34感染48 h后的马外周血单核细胞分化的eMDM,并以未感染eMDM为对照,提取细胞的蛋白质样品,进行双向凝胶电泳(2-DE)分... 详细信息

为研究马传染性贫血病毒(EIAV)感染其主要靶细胞马巨噬细胞(eMDM)后与细胞蛋白的相互作用,本研究采用EIAV强毒株EIAVDLV34感染48 h后的马外周血单核细胞分化的eMDM,并以未感染eMDM为对照,提取细胞的蛋白质样品,进行双向凝胶电泳(2-DE)分离,并分析凝胶中差异蛋白点。结果共检测出19个表达差异的蛋白点(ratio>1.4,p<0.05),其中感染组相对于对照组有7个蛋白质上调表达,12个蛋白质呈现下调表达。将差异蛋白进行串联质谱分析进行鉴定,并通过生物信息学方法对这19个差异表达蛋白进行了蛋白互作用分析。此外,对其中5个比较重要蛋白的mRNA水平进行了荧光定量PCR分析,其表达变化与2-DE结果一致。本研究为进一步分析EIAV与其宿主细胞eMDM的相互作用提供了参考。

关键词：马传染性贫血病毒 eMDM 差异蛋白双向电泳生物信息学

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Vero E6细胞中B23.1基因的扩增及其原核表达

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中国畜牧兽医 2012年第3期39卷 33-36页

作者：吕茂杰陈建飞时洪艳冯力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 瑞普(保定)生物药业有限公司河北保定071000

应用RT-PCR技术,利用含有酶切位点的上、下游引物扩增得到Vero E6细胞中编码B23.1蛋白的基因片段,并进行序列测定及分析,结果表明,B23.1基因含有一个长901bp的开放阅读框(ORF),未发现碱基的插入和缺失。将其进行BamHⅠ和XhoⅠ双酶切,而... 详细信息

应用RT-PCR技术,利用含有酶切位点的上、下游引物扩增得到Vero E6细胞中编码B23.1蛋白的基因片段,并进行序列测定及分析,结果表明,B23.1基因含有一个长901bp的开放阅读框(ORF),未发现碱基的插入和缺失。将其进行BamHⅠ和XhoⅠ双酶切,而后定向克隆到经相同双酶切的pGEX-6p-1载体中,构建的重组质粒命名为pGEX-6p-B23.1;将该质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,在IPTG诱导下进行表达;SDS-PAGE结果表明,表达出与预期大小相符的约68ku的重组蛋白,重组蛋白主要以包涵体形式存在;Western blotting分析结果表明,表达的重组蛋白与B23蛋白单克隆抗体有很好的反应活性。

关键词： VeroE6细胞 B23.1基因重组蛋白反应活性

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2011年猪流行性腹泻病毒的遗传变异分析

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中国预防兽医学报 2012年第3期34卷 180-183页

作者：刘孝珍陈建飞时洪艳张鑫石达刘胜旺冯力东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为分析猪流行性腹泻病毒(PEDV)的遗传变异情况,本研究设计合成2对扩增S1基因的引物,利用套式RT-PCR方法,对2011年分离的17个PEDV S1基因进行扩增、克隆和序列测定;并将其进行比对和遗传演化分析。结果表明:17个PEDV S1基因序列与参考病... 详细信息

为分析猪流行性腹泻病毒(PEDV)的遗传变异情况,本研究设计合成2对扩增S1基因的引物,利用套式RT-PCR方法,对2011年分离的17个PEDV S1基因进行扩增、克隆和序列测定;并将其进行比对和遗传演化分析。结果表明:17个PEDV S1基因序列与参考病毒株S1基因核苷酸序列同源性为90.54%～99.96%,与经典病毒株CV777相比,其中有6个S1基因在453 bp～454 bp处存在3个核苷酸的缺失;一个在453 bp～454 bp处缺失6个核苷酸;其它10个S1基因在173 bp～186 bp之间存在12个核苷酸的插入,413 bp～417 bp之间有3个核苷酸的插入,467 bp～468 bp处缺失6个核苷酸,插入和缺失位点与韩国病毒株KNU-0901、KNU-0905、KNU-0801相似。S1基因系统进化树分析表明,PEDV S1基因分为3群,其中7个S1基因属于PEDVⅠ群,另外10个属于PEDVⅢ群。

关键词：猪流行性腹泻病毒遗传变异 S1基因

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Vero细胞nucleolin和fibrillarin基因的克隆及序列分析

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中国预防兽医学报 2012年第10期34卷 830-832页

作者：石达陈建飞时红艳王洪峰张鑫刘孝珍张莎刘随心王璐冯力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 哈尔滨维科生物技术开发公司黑龙江哈尔滨150069 东北农业大学黑龙江哈尔滨150030

为克隆及分析Vero细胞的nucleolin和fibrillarin基因,本研究根据人类的相关基因设计两对引物,从Vero E6细胞中扩增nucleolin和fibrillarin基因。测序结果显示nucleolin基因序列长度为2 139 bp,编码712个氨基酸;fibrillarin基因序列长度... 详细信息

为克隆及分析Vero细胞的nucleolin和fibrillarin基因,本研究根据人类的相关基因设计两对引物,从Vero E6细胞中扩增nucleolin和fibrillarin基因。测序结果显示nucleolin基因序列长度为2 139 bp,编码712个氨基酸;fibrillarin基因序列长度为969 bp,编码322个氨基酸。与GenBank中登录的人类相应序列相似性高达97%,处于同一进化分支,表明该基因具有种属特异性并且保守性很高;同时利用软件对nucleolin和fibrillarin预测蛋白进行了生物信息学分析,从而为研究冠状病毒核蛋白与核仁蛋白相互作用奠定了基础。

关键词：核仁素纤维蛋白克隆序列分析

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规模化猪场流行性腹泻的分析

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饲料与畜牧(规模养猪) 2012年第9期 9-11页

作者：陈建飞冯力时洪艳张鑫中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室

猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒引起的猪的一种急性、高度接触传播的肠道疾病.自2010年10月以来,我国暴发了"新生仔猪腹泻病",该病主要侵害7日龄以内的乳猪,发病率和死亡率高达100%,给我国的养猪业造成了严重的经济损失.... 详细信息

猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒引起的猪的一种急性、高度接触传播的肠道疾病.自2010年10月以来,我国暴发了"新生仔猪腹泻病",该病主要侵害7日龄以内的乳猪,发病率和死亡率高达100%,给我国的养猪业造成了严重的经济损失.通过对现地病料的追踪检测,我们发现猪流行性腹泻病毒(PEDV)是该次疫情的主要病原.2011年PEDV的检出率是62.10%(136/219),2012年1-7月PEDV的检测率是82.82%(270/326).29个省、直辖市的猪场中存在猪流行性腹泻病毒.

关键词：新生仔猪腹泻病猪流行性腹泻病毒乳猪

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猪捷申病毒TaqMan实时定量RT-PCR方法的建立

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中国预防兽医学报 2012年第3期34卷 206-210页

作者：胡峰赵亚荣吕超超王贵华崔玉东王春仁崔尚金黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 大北农动物医学研究中心北京100097

为建立猪捷申病毒(PTV)的早期检测及定量分析方法,本研究基于PTV 11个血清型基因组5'端非编码区保守序列,设计引物和TaqMan探针,建立了检测PTV的TaqMan实时定量RT-PCR方法。应用该方法对PTV、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合症病毒、... 详细信息

为建立猪捷申病毒(PTV)的早期检测及定量分析方法,本研究基于PTV 11个血清型基因组5'端非编码区保守序列,设计引物和TaqMan探针,建立了检测PTV的TaqMan实时定量RT-PCR方法。应用该方法对PTV、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合症病毒、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病毒以及猪瘟病毒进行特异性试验,结果除PTV为阳性外其它均为阴性;针对PTV最低可检测到10个拷贝;批内、批间重复试验的变异系数均小于3%。应用建立的方法与病毒分离方法分别对91份临床样品进行检测,检出率分别为79.12%和57.14%,两者的符合率是78.02%。经临床应用表明,该实时定量RT-PCR方法可为PTV的早期诊断及定量分析提供技术手段。

关键词：猪捷申病毒实时定量RT-PCR TaqMan

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兔抗猪CD163蛋白多克隆抗体制备及鉴定

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中国兽医学报 2012年第11期32卷 1624-1628页

作者：郭娟娟彭金美安同庆冷超良吴江宫大庆陈家锃杨永倩田志军张德礼西北农林科技大学、动物医学院病毒免疫与生物信息研究室、生物信息研究中心、分子病毒免疫与肿瘤系统生物学研究组陕西杨凌712100 中国农业科学院、哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室、猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为制备兔抗猪CD163多克隆抗体,采用RT-PCR方法从猪PAM RNA中扩增CD163胞质外区部分基因SRCR4-5,克隆至pGEX-6p-1原核表达载体,在IPTG诱导下获得约50 000以包涵体形式表达的重组蛋白。WesternBlotting分析表明,表达产物能够被GST单抗所... 详细信息

为制备兔抗猪CD163多克隆抗体,采用RT-PCR方法从猪PAM RNA中扩增CD163胞质外区部分基因SRCR4-5,克隆至pGEX-6p-1原核表达载体,在IPTG诱导下获得约50 000以包涵体形式表达的重组蛋白。WesternBlotting分析表明,表达产物能够被GST单抗所识别。用该重组蛋白免疫兔制备多抗血清,经间接ELISA检测,多抗血清效价可达105,流式检测发现可与Marc-145和PAM上的天然CD163分子相互作用。抗体阻断试验证明制备的多抗血清可以部分阻断PRRSV感染。本试验为进一步研究PRRSV与受体-CD163相互作用机制打下了基础。

关键词： CD163 抗体鉴定

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禽白血病病毒双抗体夹心ELISA方法的建立

禽白血病病毒双抗体夹心ELISA方法的建立

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第三届（2012）中国白羽肉鸡产业发展大会暨第二届全球肉鸡产业论坛

作者：负炳岭刘文李德龙秦立廷刘在斯吴关祁小乐王永强高宏雷高玉龙王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室

为建立一种快速有效的检测禽白血病病毒的方法,以原核表达的HLJ09MDJ-1(ALV-J)p27蛋白制备的单克隆抗体作为包被抗体,p27蛋白制备的多克隆抗体作为检测抗体建立了检测ALV的双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)方法。该方法对p27的最小检出量为1.... 详细信息

为建立一种快速有效的检测禽白血病病毒的方法,以原核表达的HLJ09MDJ-1(ALV-J)p27蛋白制备的单克隆抗体作为包被抗体,p27蛋白制备的多克隆抗体作为检测抗体建立了检测ALV的双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)方法。该方法对p27的最小检出量为1.25ng/ML,且与禽类常见的病毒(IBV,MDV ILTV等)无交叉反应。动物感染实验结果表明该方法可在感染动物12天后有效检测泄殖腔分泌物中的ALV。利用该方法检测了491份蛋清样品和180份肛拭子样品,与PCR方法符合率分别为96.5%和93.8%。结果表明,该方法具有方便、快速、敏感等优点,该方法的建立为ALV的早期诊断及种鸡场的净化提供了有效工具。

关键词：禽白血病病毒单克隆抗体多克隆抗体双抗体夹心ELISA

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蛋鸡J亚群禽白血病病毒3'非编码区序列特征分析

蛋鸡J亚群禽白血病病毒3'非编码区序列特征分析

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十六次学术研讨会

作者：高玉龙贠炳岭秦立廷潘伟王永强高宏雷祁小乐王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室

前言从2004年开始,我国地方品种鸡出现ALV-J感染病例的报道,随后J亚型禽白血病在我国蛋鸡群中出现。尤其是自2007年开始,我国各地陆续报道一种严重危害蛋种鸡和商品蛋鸡的血管瘤型白血病。为了研究蛋鸡群感染ALV-J的来源及其变异趋势,... 详细信息

前言从2004年开始,我国地方品种鸡出现ALV-J感染病例的报道,随后J亚型禽白血病在我国蛋鸡群中出现。尤其是自2007年开始,我国各地陆续报道一种严重危害蛋种鸡和商品蛋鸡的血管瘤型白血病。为了研究蛋鸡群感染ALV-J的来源及其变异趋势,我们对国内多个鸡场进行调研采样,进行病毒分离鉴定,对2008-2010年分离的ALV-J流行株的3'非编码区(3'UTR)进行了系统分析。材料和方法2008-2009年,东北地区部分养禽场陆续出现J亚群禽白血病疑似病例,实验室对临床上同时见有增生性结节和血管瘤症状的病料接种DF-1细胞进

关键词：禽白血病病毒非编码区分离株编码区序列特征分析

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禽呼肠孤病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立

禽呼肠孤病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十六次学术研讨会

作者：孙美玉秦立廷高玉龙祁小乐高宏雷王永强王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所禽传染病研究室兽医生物技术国家重点实验室

前言禽呼肠孤病毒(Avian Reovirus,ARV)感染鸡主要引起病毒性关节炎、腱鞘炎、矮小综合症、呼吸道病、肠道疾病、吸收障碍综合征等,可造成养禽业的重大损失。该病毒既可以水平传播也可以垂直传播,其临床表现与病毒毒株、毒力或感染宿主... 详细信息

前言禽呼肠孤病毒(Avian Reovirus,ARV)感染鸡主要引起病毒性关节炎、腱鞘炎、矮小综合症、呼吸道病、肠道疾病、吸收障碍综合征等,可造成养禽业的重大损失。该病毒既可以水平传播也可以垂直传播,其临床表现与病毒毒株、毒力或感染宿主有关。目前常用于ARV的实验室诊断方法主要有病毒分离、ELISA、RT-PCR、病毒中和实验等,但这些方法操作麻烦、实验周期长且不能实现对病毒的定量检测。随着分子生物学技术的快速发展,出现许多新的检测方法,其中荧光定量PCR技术具有快速、灵敏、特异性强、可定量等优点。本研究根据GenBank中发表的S1基因组序列设计了1对针对ARV sigmaC基

关键词：禽呼肠孤病毒 RT-PCR TaqMan 检测方法标准品

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