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兽医导刊 2012年第2期 55-56页

作者：刘长明陆月华郭龙军危艳武中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

猪圆环病毒2型（PCV2）主要引起以患猪全身性淋巴结肿大为特征的多系统功能衰竭性疾病，临床上表现为断奶仔猪多系统衰竭综合征、猪皮炎与肾炎综合征、猪呼吸道疾病综合征、母猪繁殖障碍、坏死性淋巴结炎、肉芽肿性肠炎和渗出性表皮炎... 详细信息

猪圆环病毒2型（PCV2）主要引起以患猪全身性淋巴结肿大为特征的多系统功能衰竭性疾病，临床上表现为断奶仔猪多系统衰竭综合征、猪皮炎与肾炎综合征、猪呼吸道疾病综合征、母猪繁殖障碍、坏死性淋巴结炎、肉芽肿性肠炎和渗出性表皮炎等，统称为猪圆环病毒病。

关键词：猪圆环病毒2型断奶仔猪多系统衰竭综合征病毒疫苗猪呼吸道疾病综合征淋巴结肿大母猪繁殖障碍猪圆环病毒病猪皮炎

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高致病性PRRSV与PCV2共感染协同致病性研究

高致病性PRRSV与PCV2共感染协同致病性研究

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生态环境与畜牧业可持续发展学术研讨会暨中国畜牧兽医学会2012年学术年会和第七届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会会议

作者：范培虎危艳武郭龙军吴洪丽黄立平刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

为阐明高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)的协同致病作用,澄清两种病毒不同时间顺序共感染与其协同致病力之间的关系。选取35日龄阴性健康猪30头,随机分6组,PCV2/HP-PRRSV顺序共感染组、HP-PRRSV/PCV2顺... 详细信息

为阐明高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)的协同致病作用,澄清两种病毒不同时间顺序共感染与其协同致病力之间的关系。选取35日龄阴性健康猪30头,随机分6组,PCV2/HP-PRRSV顺序共感染组、HP-PRRSV/PCV2顺序共感染组、HP-PRRSV+PCV2同时共感染组、HP-PRRSV感染组、PCV2感染组、未接种对照组。感染后每天测量体温、观察临床症状,每周称量体重、采血。用流式细胞仪检测血液中的CD3+CD4+CD8-、CD3+CD4-CD8+、γδT、NK细胞及粒细胞和单核细胞变化;免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)检测这两种病毒抗体变化;用ELISA法检测血清中IFN-γ、TNF-α、IL-10、IL-2、GM-CSF细胞因子变化;用荧光定量PCR法检测血清和组织中病毒载量。对各组试验猪进行组织病理学观察。试验结果表明,HP-PRRSV/PCV2顺序共感染组临床症状最严重,死亡率达60%;组织和血清中病毒载量显著高于其它组,抗体滴度明显低于其它组;淋巴细胞亚群及细胞因子(尤以TNF-α)变化也最为明显。HP-PRRSV和PCV2之间存在协同致病作用,且猪群先感染HP-PRRSV后感染PCV2可明显提高猪群发病率和死亡率。本研究对临床HP-PRRSV和PCV2的综合防制提供科学依据。

关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒猪圆环病毒2型共感染协同致病性

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猪圆环病毒病防控技术的研究进展

猪圆环病毒病防控技术的研究进展

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会

作者：刘长明危艳武陆月华黄立平郭龙军吴洪丽张朝霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

猪圆环病毒2型(PCV2)主要引起以患猪全身性淋巴结肿大为特征的多系统功能衰竭性疾病,临床上表现为断奶仔猪多系统衰竭综合征、猪皮炎与肾炎综合征、猪呼吸道疾病综合征、母猪繁殖障碍、坏死性淋巴结炎、肉芽肿性肠炎和渗出性表皮炎

关键词：猪圆环病毒病猪圆环病毒疫苗《静》断奶仔猪多系统衰竭综合征猪呼吸道疾病综合征猪圆环病毒感染感染性分子克隆疫苗接种 PRRSV 早期胚胎死亡猪皮炎肾病综合征防控技术

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抗猪输血传播病毒1型(PTTV1)Cap蛋白单克隆抗体制备及鉴定

抗猪输血传播病毒1型(PTTV1)Cap蛋白单克隆抗体制备及鉴定

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会

作者：张龙刘建波黄立平郭龙军危艳武唐青海吴洪丽刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

为表达猪输血传播病毒1型(PTTV1)Cap蛋白用于单抗的制备,以含PTTV1全长基因组的质粒(pMD18-TTV1-SY13)为模板,用高保真PCR法扩增PTTV1-ORF1(1501～2475 nt)编码的Cap蛋白C末端截短序列(324 aa),引物两端设计了SalⅠ和NotⅠ酶切位点,将PC... 详细信息

为表达猪输血传播病毒1型(PTTV1)Cap蛋白用于单抗的制备,以含PTTV1全长基因组的质粒(pMD18-TTV1-SY13)为模板,用高保真PCR法扩增PTTV1-ORF1(1501～2475 nt)编码的Cap蛋白C末端截短序列(324 aa),引物两端设计了SalⅠ和NotⅠ酶切位点,将PCR产物克隆到pGEX-6P-1载体,构建的重组质粒命名为pGEX-TTV1-ORF--C1。将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株后进行诱导表达,获得了含GST标签的PTTV1-rCap重组融合蛋白,经SDS-PAGE电泳分析和Western blot鉴定,目的蛋白获得了高效表达,分子量约为64.0 kDa,以包涵体形式存在。用纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术获得了8株稳定分泌抗PTTV1-rCap蛋白的杂交瘤细胞株,依次命名为1H4、1E9、1E11、4G12、5C5、7B8、8C2、8G2,单抗亚类鉴定均为IgG1,轻链为κ型;单抗培养上清效价为400～3200倍,腹水为4.0×105～6.4×106倍;有7株单抗与PTTV1-rCap蛋白产生特异性反应,另1株单抗(1E11)呈阴性,可能针对构象表位。为验证8株单抗与真核表达的Cap蛋白的免疫反应性,将全长与截短的PTTV1-ORFI基因片段克隆到pcDNA3.1/V5-His TOPO表达载体,转染293T细胞进行蛋白表达,采用免疫过氧化物酶单层细胞染色法(IPMA)检测表明,这8株单抗均能够与表达的Cap蛋白产生特异性反应。本研究表达的PTTVl-Cap蛋白及制备的单抗,为该病毒诊断方法的建立及抗原表位的鉴定奠定了基础。

关键词：猪输血传播病毒1型(PTTV1) 重组Cap蛋白单克隆抗体鉴定

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猪圆环病毒2a和2b亚型灭活疫苗及亚单位疫苗的交互免疫研究

猪圆环病毒2a和2b亚型灭活疫苗及亚单位疫苗的交互免疫研究

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生态环境与畜牧业可持续发展学术研讨会暨中国畜牧兽医学会2012年学术年会和第七届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会会议

作者：付玉洁郭龙军黄立平危艳武唐青海吴洪丽刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

为评价猪圆环病毒(PCV)2a/2b两种基因型毒株及其重组Cap蛋白(rCap)之间的交互免疫效果,本研究采用PCV2a-LG和PCV2b-YJ株制备了2种病毒灭活疫苗,及其重组杆状病毒表达的2种Cap蛋白(PCV2a-rCap和PCV2b-rCap)亚单位疫苗。选用8周龄BALB/c鼠... 详细信息

为评价猪圆环病毒(PCV)2a/2b两种基因型毒株及其重组Cap蛋白(rCap)之间的交互免疫效果,本研究采用PCV2a-LG和PCV2b-YJ株制备了2种病毒灭活疫苗,及其重组杆状病毒表达的2种Cap蛋白(PCV2a-rCap和PCV2b-rCap)亚单位疫苗。选用8周龄BALB/c鼠165只,随机分成11组,每组15只,用上述4种疫苗各免疫2组,以PCV2a或PCV2b毒株攻毒。攻毒后,所有鼠均未见肉眼可见的临床症状和病理变化。采用IPMA法检测抗体,4种疫苗于免疫第3周抗体转阳,第5周抗体效价达到1:200～1:800倍,其中PCV2a-rCap免疫组抗体效价最高。2种灭活苗和PCV2a-rCap免疫组攻击同型或异型毒株均可获得完全保护。以PCV2a和PCV2b各为指示毒对病毒抗血清和rCap蛋白抗血清进行交叉中和试验,同型毒株与同型血清的中和抗体效价均高于异型毒株。病理观察显示,免疫鼠均未见明显病理变化,攻毒对照鼠肺脏出现一定程度的病理损伤。本研究表明,病毒灭活疫苗及其rCap亚单位疫苗对PCV2a和PCV2b可提供交叉保护。

关键词：猪圆环病毒2型(PCV2) PCV2a/2b基因型毒株交互免疫

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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒HBR株不同代次水平的毒力比较试验

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒HBR株不同代次水平的毒力比较试验

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会

作者：危艳武范培虎郭龙军吴洪丽刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

为了阐明高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)HBR毒株在体外传代过程中发生的毒力及遗传变异情况,本试验采用第5代、10代和125代PRRSVVIBR株病毒进行了人工感染试验。结果表明,低代次(第5和10代)病毒接种组可复制出以"高热综合... 详细信息

为了阐明高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)HBR毒株在体外传代过程中发生的毒力及遗传变异情况,本试验采用第5代、10代和125代PRRSVVIBR株病毒进行了人工感染试验。结果表明,低代次(第5和10代)病毒接种组可复制出以"高热综合征"为特点的症候群,第5代毒株感染组死亡率达40%(2/5),第10代感染组症状明显减轻且无死亡,第125代毒株感染组基本无临床症状。这3个代次的毒株感染组于第3 d检测病毒血症呈阳性,第7～14 d到达高峰,第125代于21 d消失,较第5和10代毒株提前1 w。病毒感染后抗原检测主要分布于脾脏、扁桃体、淋巴结等组织,第5和10代毒株感染组脏器出现严重的病理损伤,第125代毒株感染组仅见轻微病理损伤。对3个代次毒株的ORF5、ORF6和ORF7测序显示,仅在ORF5出现了3个氨基酸位点突变,第29位:第5、10代为缬氨酸→第125代为丙氨酸;第32位:第5、125代为丝氨酸,第10代为甘氨酸;第196位:第5、10代为谷氨酰胺→第125代为精氨酸。研究表明,低代次毒株能够完全复制出典型的"猪高热综合征",而高代次毒株无明显临床症状,证明该毒株经细胞传代后毒力下降。鉴于高代次毒株感染动物仍能够引起毒血症和持续感染,表明其仍具一定毒力,作为疫苗种毒需要进一步毒力弱化。

关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒传代毒株毒力比较

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猪圆环病毒(PCV)2a/2b亚型毒株灭活疫苗及其重组Cap蛋白亚单位疫苗的交叉保护性试验

猪圆环病毒(PCV)2a/2b亚型毒株灭活疫苗及其重组Cap蛋白亚单位疫...

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会

作者：付玉洁郭龙军黄立平危艳武唐青海吴洪丽刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

为评价猪圆环病毒(PCV)2a/2b两种基因型毒株及其重组Cap蛋白(rCan)之间的交互免疫效果,本研究采用PCV2a-LG和PCV2b-YJ株制备了2种病毒灭活疫苗,及其重组杆状病毒表达的2种Cap蛋白(PCV2a-rCap和PCV2b-rCap)亚单位疫苗。选用8周龄BALB/c鼠... 详细信息

为评价猪圆环病毒(PCV)2a/2b两种基因型毒株及其重组Cap蛋白(rCan)之间的交互免疫效果,本研究采用PCV2a-LG和PCV2b-YJ株制备了2种病毒灭活疫苗,及其重组杆状病毒表达的2种Cap蛋白(PCV2a-rCap和PCV2b-rCap)亚单位疫苗。选用8周龄BALB/c鼠165只,随机分成11组,每组15只,用上述4种疫苗各免疫2组,以PCV2a或PCV2b毒株攻毒。攻毒后,所有鼠均未见肉眼可见的临床症状和病理变化。采用IPMA法检测抗体,4种疫苗于免疫第3周抗体转阳,第5周抗体效价达到1:200～1:800倍,其中PCV2a-rCap免疫组抗体效价最高。2种灭活苗和PCV2a-rCap免疫组攻击同型或异型毒株均可获得完全保护。以PCV2a和PCV2b各为指示毒对病毒抗血清和rCap蛋白抗血清进行交叉中和试验,同型毒株与同型血清的中和抗体效价均高于异型毒株。病理观察显示,免疫鼠均未见明显病理变化,攻毒对照鼠肺脏出现一定程度的病理损伤。本研究表明,病毒灭活疫苗及其rCap亚单位疫苗对PCV2a和PCV2b可提供交叉保护。

关键词：猪圆环病毒2型(PCV2) PCV2a/2b基因型毒株交互免疫

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猪细小病毒体外培养适应毒株(HJ)的培育及动物感染试验

猪细小病毒体外培养适应毒株(HJ)的培育及动物感染试验

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会

作者：李胜斌危艳武唐青海吴洪丽刘建波郭龙军王一平刘丹刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

从初产母猪流产胎儿的肠系膜淋巴结中分离到一株猪细小病毒(PPV),采用无污染的猪睾丸传代细胞系(ST)对该毒株传代,培育成一株细胞适应毒株,命名为PPV-HJ毒株。该毒株经ST细胞连续传50代,于第25代起毒价显著提升,第40代毒价维持稳定(107.... 详细信息

从初产母猪流产胎儿的肠系膜淋巴结中分离到一株猪细小病毒(PPV),采用无污染的猪睾丸传代细胞系(ST)对该毒株传代,培育成一株细胞适应毒株,命名为PPV-HJ毒株。该毒株经ST细胞连续传50代,于第25代起毒价显著提升,第40代毒价维持稳定(107.2 TCID50/mL)。采用免疫过氧化物酶单层细胞染色试验(IPMA)检测表明,该病毒感染细胞后病毒抗原主要分布在细胞核中,病毒感染的阳性细胞染成棕红色。免疫电镜观察到PPV粒子与抗体结合形成的免疫复合物,呈实心小颗粒样粒子,直径约21 nm。经病毒基因克隆测序证实,该毒株的NS1基因序列与GenBank中PPV-ZJ毒株同源性最高,达98.41%。用该毒株第50代培养物(1×107.2 TCID50/mL)接种35日龄仔猪,临床未表现明显症状,迫杀后未观察到明显病理学变化,PCR法在猪的肺脏、扁桃体、腹股沟淋巴结、颌下淋巴结、小肠中检测到病毒核酸,表明该毒株对靶动物具有一定的感染性,但毒力随传代而明显减弱趋势。本研究成功地培育出一株体外细胞培养适应毒株,其繁殖性能稳定,为今后开展PPV与猪圆环病毒2型(PCV2)混合感染的协同致病性研究,以及联合疫苗的创制奠定了基础。

关键词：猪细小病毒病毒分离鉴定毒株培育

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猪输血传播病毒流行病学与遗传变异的研究进展

猪输血传播病毒流行病学与遗传变异的研究进展

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会

作者：刘建波刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

摘要猪输血传播病毒(PTTV)是最近发现的一种新病毒,属于指环病毒科,ι指环病毒属成员。该病毒在世界范围内广泛存在,在患有断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的猪群中PTTV的流行率明显高于健康猪群,怀疑该病毒与猪圆环病毒2型(PCV2)起协... 详细信息

摘要猪输血传播病毒(PTTV)是最近发现的一种新病毒,属于指环病毒科,ι指环病毒属成员。该病毒在世界范围内广泛存在,在患有断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的猪群中PTTV的流行率明显高于健康猪群,怀疑该病毒与猪圆环病毒2型(PCV2)起协同致病作用。由于目前该病毒体外分离尚未获得成功,对其致病性和血清学诊断方法的研究延后。本文就PTTV的发现、病原学及培养特性、流行状况、传播方式,以及诊断方法和遗传变异情况等研究进展进行简要综述,以期为今后对PTTV的研究提供依据。

关键词：猪输血传播病毒流行病学遗传变异

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猪圆环病毒2型疫苗的研究进展

猪圆环病毒2型疫苗的研究进展

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会

作者：王一平郭龙军唐青海刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

猪圆环病毒2型(PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原,给全球养猪业造成了巨大经济损失。PCV2感染可以破坏动物机体的免疫系统,造成严重的免疫抑制,容易诱发多种细菌及病毒的混合感染与继发感染,给疾病的诊断和治疗带... 详细信息

猪圆环病毒2型(PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原,给全球养猪业造成了巨大经济损失。PCV2感染可以破坏动物机体的免疫系统,造成严重的免疫抑制,容易诱发多种细菌及病毒的混合感染与继发感染,给疾病的诊断和治疗带来巨大的困难。疫苗免疫接种是防控PCV2感染的有效手段,有关PCV2疫苗的研究已成为国内外学者的关注热点。迄今为止,欧美几家跨国公司已先后推出商品化的PCV2灭活疫苗、亚单位疫苗及嵌合病毒疫苗,国内也已研制出PCV2灭活疫苗,这些疫苗的推广应用为有效防控猪圆环病毒病发挥了重要作用。鉴于这些疫苗尚不能完全阻断PCV2传播,无法彻底清除体内感染的病毒,因此,开发高效、低廉的新型活载体疫苗、核酸疫苗及标记疫苗是今后研究的趋势。本文概括地介绍了目前商品化的PCV2疫苗的特性和免疫效力,并对近年来有关PCV2活载体疫苗、核酸疫苗及标记疫苗等新型疫苗的研究进展进行综述,以期为猪圆环病毒病的防制提供参考。

关键词：猪圆环病毒2型疫苗研究进展

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