检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2011年第4期33卷 253-256页

作者：王芳周国辉曹丽艳李一经于力东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为构建表达小反刍兽疫病毒(PPRV)F蛋白的重组腺病毒,本实验合成密码子优化的PPRVF基因,将其克隆至腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,并以PmeⅠ线性化后转化含有人5型腺病毒骨架的BJ5183感受态细胞,通过细菌内同源重组构建表达PPRVF蛋白的... 详细信息

为构建表达小反刍兽疫病毒(PPRV)F蛋白的重组腺病毒,本实验合成密码子优化的PPRVF基因,将其克隆至腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,并以PmeⅠ线性化后转化含有人5型腺病毒骨架的BJ5183感受态细胞,通过细菌内同源重组构建表达PPRVF蛋白的重组腺病毒质粒pAdV-F,经PacⅠ线性化后转染AD-293细胞,获得重组腺病毒rHAdV-F。经PCR和Dot-ELISA鉴定,F蛋白在AD-293细胞中获得表达。该重组腺病毒与野生型腺病毒复制能力相近,但病毒滴度略低。间接ELISA方法检测显示rHAdV-F可以诱导小鼠产生抗PPRV特异性体液免疫应答。

关键词：小反刍兽疫 F基因重组腺病毒表达免疫原性

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猪流行性腹泻病毒M蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

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中国预防兽医学报 2011年第7期33卷 568-570页

作者：张志榜陈建飞时洪艳杨斌石达陈小金冯力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010018

为制备猪流行性腹泻病毒(PEDV)抗M蛋白单克隆抗体(MAb),本研究以截短表达的His-M重组蛋白免疫BALB/c小鼠;以截短表达的GST-M重组蛋白作为包被抗原,采用常规的淋巴细胞杂交瘤技术制备杂交瘤细胞,通过间接ELISA进行筛选,得到一株稳定分泌... 详细信息

为制备猪流行性腹泻病毒(PEDV)抗M蛋白单克隆抗体(MAb),本研究以截短表达的His-M重组蛋白免疫BALB/c小鼠;以截短表达的GST-M重组蛋白作为包被抗原,采用常规的淋巴细胞杂交瘤技术制备杂交瘤细胞,通过间接ELISA进行筛选,得到一株稳定分泌抗M蛋白MAb。MAb亚类鉴定为IgG2b型,轻链为κ链,杂交瘤细胞培养上清和诱导的小鼠腹水抗体效价分别为1∶3000和1∶2×105。Westernblot试验表明该MAb能够识别重组及天然的PEDVM蛋白。间接免疫荧光试验表明该MAb能够与PEDV感染的VeroE6细胞产生特异性免疫荧光。

关键词：猪流行性腹泻病毒 M蛋白单克隆抗体

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副猪嗜血杆菌黑龙江株的分离与鉴定

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中国预防兽医学报 2011年第3期33卷 236-238页

作者：李雪松陈欣符芳王伟田华彬郎越坤徐春红李曦李春艳东北农业大学黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 哈尔滨师范大学黑龙江哈尔滨150001

为确定黑龙江某猪场发病猪群的病原,本研究从疑似浆膜炎的病料中分离到一株革兰氏阴性细小杆菌,通过对其进行细菌形态学、培养特征、生化特性和16S rRNA基因PCR鉴定,结果表明该分离菌株为副猪嗜血杆菌(HLJ-1分离株)。16S rRNA基因序列... 详细信息

为确定黑龙江某猪场发病猪群的病原,本研究从疑似浆膜炎的病料中分离到一株革兰氏阴性细小杆菌,通过对其进行细菌形态学、培养特征、生化特性和16S rRNA基因PCR鉴定,结果表明该分离菌株为副猪嗜血杆菌(HLJ-1分离株)。16S rRNA基因序列分析结果显示:该分离菌株与参考株的基因同源性达99%;药敏试验结果表明HLJ-1分离株对头孢曲松、头孢噻肟等β-内酰胺类抗生素高度敏感;小白鼠致病性试验结果显示,该分离株具有较强致病性。

关键词：副猪嗜血杆菌分离鉴定 16S rRNA基因

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高致病性PRRSV HuN4株Nsp4的原核表达及其抗体水平检测

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中国预防兽医学报 2011年第3期33卷 219-222页

作者：董建国刘永刚石文达武嘉男王刚刘鹤徐明明荣福龙李丽琴田志军蔡雪辉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 山东农业大学山东泰安271018 东北农业大学黑龙江哈尔滨150001

为进一步研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)Nsp4的免疫学特性,本研究根据PRRSV HuN4株序列,设计并合成用于扩增PRRSV HuN4株Nsp4基因的引物。将扩增产物与原核表达载体pGEX-6P-1连接,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中。Western b... 详细信息

为进一步研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)Nsp4的免疫学特性,本研究根据PRRSV HuN4株序列,设计并合成用于扩增PRRSV HuN4株Nsp4基因的引物。将扩增产物与原核表达载体pGEX-6P-1连接,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中。Western blot试验显示,Nsp4在大肠杆菌中获得较高水平的表达,并且具有良好的反应活性。利用该蛋白建立ELISA方法,检测PRRSV HuN4株感染仔猪的不同时间内的血清,并比较抗Nsp4,囊膜蛋白和M蛋白,N蛋白的抗体水平,结果表明Nsp4抗体升高的时间晚于囊膜蛋白和M蛋白、N蛋白出现的时间,同时抗体水平也低于其他蛋白。

关键词： PRRSV Nsp4 原核表达抗原性

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新城疫病毒F48E9株重组NP蛋白单克隆抗体制备及鉴定

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东北农业大学学报 2011年第9期42卷 131-135,147页

作者：刘文丽刘怀然刘培欣张馨心孔宪刚陈维多东北农业大学生命科学学院哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨150001 黑龙江中医药大学哈尔滨150040

制备新城疫病毒(NDV)NP蛋白单抗,以期为NDV抗原表位研究及检测方法建立方面奠定基础。利用NDV F48E9株pET32a-NP重组蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤细胞技术,间接ELISA筛选,获得了2株稳定分泌抗NP重组蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分... 详细信息

制备新城疫病毒(NDV)NP蛋白单抗,以期为NDV抗原表位研究及检测方法建立方面奠定基础。利用NDV F48E9株pET32a-NP重组蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤细胞技术,间接ELISA筛选,获得了2株稳定分泌抗NP重组蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1G3、4B12。经间接ELISA测定,腹水抗体效价分别为1 2.56×105、1 5.12×105。亚类鉴定结果表明这两株单抗均为IgG1。Western blot分析结果显示,1G3、4B12均能特异性识别重组NP蛋白。与NDV感染细胞经间接免疫荧光试验检测均呈黄绿色荧光。经相加ELISA测定表明两株单抗识别的抗原表位不同。

关键词：新城疫病毒 F48E9 NP蛋白单克隆抗体

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表达小反刍兽疫病毒H基因重组腺病毒的构建及对小鼠免疫原性的试验

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中国兽医杂志 2011年第7期47卷 20-22页

作者：王芳周国辉曹丽艳李一经于力东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

人工合成密码子优化的小反刍兽疫病毒(PPRV)H基因,将其克隆到腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,电转化BJ5183感受态细胞,获得重组腺病毒质粒pAdV-H,转染AD-293细胞,获得重组腺病毒rHAdV-H。用PCR和Dot-ELISA鉴定H基因在AD-293细胞中的表达... 详细信息

人工合成密码子优化的小反刍兽疫病毒(PPRV)H基因,将其克隆到腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,电转化BJ5183感受态细胞,获得重组腺病毒质粒pAdV-H,转染AD-293细胞,获得重组腺病毒rHAdV-H。用PCR和Dot-ELISA鉴定H基因在AD-293细胞中的表达,同时用一步生长曲线,测定该重组腺病毒的复制能力。接种小鼠评价免疫效力,用间接ELISA试验检测抗体水平,结果表明,PPRV H基因在AD-293细胞中获得了表达,子代重组腺病毒在感染细胞后60 h滴度最高,为3×108PFU/mL。rHAdV-H免疫小鼠产生针对PPRV特异性抗体,表明该重组腺病毒可以诱导抗PPRV的特异性免疫应答。

关键词：小反刍兽疫 H基因重组腺病毒表达免疫原性

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Sf9细胞PHB2蛋白的原核表达及其抗血清的制备

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中国预防兽医学报 2011年第7期33卷 562-564页

作者：马国达王茜于力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江八一农垦大学生命科学与技术学院黑龙江大庆163319

为了研究Sf9细胞PHB2蛋白(Sf-PHB2)的功能及其对虾白斑综合症病毒(WSSV)极早期基因ie1的转录调控作用,本研究从昆虫细胞Sf9中扩增sf-phb2基因编码区,克隆至表达载体pET30a中,转化到大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达6His-Sf-PHB2重组蛋白。SDS-... 详细信息

为了研究Sf9细胞PHB2蛋白(Sf-PHB2)的功能及其对虾白斑综合症病毒(WSSV)极早期基因ie1的转录调控作用,本研究从昆虫细胞Sf9中扩增sf-phb2基因编码区,克隆至表达载体pET30a中,转化到大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达6His-Sf-PHB2重组蛋白。SDS-PAGE分析表明,表达的重组蛋白以包涵体形式存在。在变性条件下,用镍离子螯合柱(Ni-NTA)纯化Sf-PHB2重组蛋白,免疫BALB/c小鼠制备抗体,并用western blot方法检测抗体的反应性。本研究制备了Sf-PHB2抗体,为进一步研究该蛋白的功能奠定基础。

关键词： Sf9细胞PHB2蛋白原核表达抗体制备

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鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因突变对病毒体外复制的影响

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畜牧兽医学报 2011年第11期42卷 1577-1583页

作者：祁小乐高立吴关邓小芸余飞张礼洲秦立廷高玉龙王永强高宏雷刘娣华育平王笑梅东北林业大学博士后流动站黑龙江省农业科学院博士后工作站哈尔滨150086 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨150001 黑龙江科技职业学院双城150111

为了进一步了解影响鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)复制效率和致病力的分子基础,作者在序列分析的基础上,利用反向遗传操作技术,针对VP2上2个重要的氨基酸位点(222和279),修饰和拯救了相应的2株突变病毒,并研究了突变病毒在体内外的生物学... 详细信息

为了进一步了解影响鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)复制效率和致病力的分子基础,作者在序列分析的基础上,利用反向遗传操作技术,针对VP2上2个重要的氨基酸位点(222和279),修饰和拯救了相应的2株突变病毒,并研究了突变病毒在体内外的生物学特性。复制动力学数据显示,VP2的222位由酪氨酸突变为脯氨酸可将IBDV在鸡胚成纤维细胞(CEF)上的复制滴度提高6倍以上,而279位氨基酸对病毒复制效率无显著影响。SPF鸡的感染试验显示,222位和279位氨基酸与IBDV的致病力没有关系。本研究首次报道了VP2 222位和279位氨基酸与IBDV复制效率和致病力的关系,有助于更加全面地了解IBDV的基因功能,也将为新型IBDV疫苗的设计提供依据和思路。

关键词：鸡传染性法氏囊病病毒 VP2基因复制致病力反向遗传

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猪圆环病毒病的流行趋势与防控

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兽药市场指南 2011年第11期 36-36,49页

作者：刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／猪传染病研究室

我国猪群中猪圆环病毒2型感染十分普遍，流行病学调查表明，猪圆环病毒2型抗体阳性率高达80％以上，被调查的猪场阳性率达100％，尚未发现有抗体阴性猪场存在。猪圆环病毒2型感染途径主要以口为主，病毒先定殖于扁桃体，随血流进入周身... 详细信息

我国猪群中猪圆环病毒2型感染十分普遍，流行病学调查表明，猪圆环病毒2型抗体阳性率高达80％以上，被调查的猪场阳性率达100％，尚未发现有抗体阴性猪场存在。猪圆环病毒2型感染途径主要以口为主，病毒先定殖于扁桃体，随血流进入周身淋巴结，在淋巴细胞中大量繁殖扩增，形成了不同程度的病毒血症。当病毒滴度高时，血清抗体滴度较低，临床上就会呈现明显的发病症状。大部分猪只在病毒感染后几周内会刺激机体产生高水平的抗体，抗体能够将病毒抗原中和，临床上表现为耐过康复。

关键词：猪圆环病毒病流行趋势猪圆环病毒2型抗体滴度防控感染途径流行病学淋巴细胞

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猪圆环病毒病流行趋势与防控对策

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畜牧兽医科技信息 2011年第10期27卷 16-17页

作者：陆月华郭龙军危艳武刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室哈尔滨150001

猪圆环病毒2型（PCV2）主要引起以患猪全身性淋巴结肿大为特征的多系统功能衰竭性疾病，临床上表现为断奶仔猪多系统衰竭综合征、猪皮炎与肾炎综合征、猪呼吸道疾病综合征、母猪繁殖障碍、坏死性淋巴结炎、肉芽肿性肠炎和渗出性表皮炎... 详细信息

猪圆环病毒2型（PCV2）主要引起以患猪全身性淋巴结肿大为特征的多系统功能衰竭性疾病，临床上表现为断奶仔猪多系统衰竭综合征、猪皮炎与肾炎综合征、猪呼吸道疾病综合征、母猪繁殖障碍、坏死性淋巴结炎、肉芽肿性肠炎和渗出性表皮炎等，统称为猪圆环病毒病。

关键词：猪圆环病毒病断奶仔猪多系统衰竭综合征防控对策流行趋势猪呼吸道疾病综合征猪圆环病毒2型淋巴结肿大母猪繁殖障碍

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