检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2011年第1期33卷 70-72页

作者：刘芹防刘杉杉张超范崔尚金中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为建立检测猪捷申病毒(PTV)抗体的方法,本研究利用PTV-8 Jilin/2003株为抗原,建立了检测PTV抗体的的间接免疫荧光技术(IFA)方法。该方法工作浓度分别是:一抗最适稀释度为1∶10;FITC标记二抗最适稀释度为1∶100;二抗中伊文氏兰最适稀释度... 详细信息

为建立检测猪捷申病毒(PTV)抗体的方法,本研究利用PTV-8 Jilin/2003株为抗原,建立了检测PTV抗体的的间接免疫荧光技术(IFA)方法。该方法工作浓度分别是:一抗最适稀释度为1∶10;FITC标记二抗最适稀释度为1∶100;二抗中伊文氏兰最适稀释度为1∶30 000。敏感性试验、特异性试验表明该抗原板可以检出包含PTV-8型和1型在内的的所有PTV阳性血清,方法敏感、特异。与SN符合率94.0%。用该方法对黑龙江、山东、天津和河南等地的1 500份临床血清样品进行检测,阳性检出率为55.8%,表明我国猪群中PTV的感染已经非常普遍。该方法做为PTV的血清学诊断新技术,为开展PTV分子流行病学调查奠定了基础。

关键词：猪捷申病毒间接免疫荧光抗体检测

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实时定量PCR对猪圆环病毒2型感染猪体内病毒分布规律的研究

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中国预防兽医学报 2008年第12期30卷 924-928页

作者：危艳武刘长明袁婧黄立平张朝霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

根据发表的猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因序列设计了一对特异引物,并以克隆重组质粒作为阳性标准品,采用SYBR-Green I嵌合荧光染料建立了一种用于检测PCV2的实时定量PCR方法。该方法在107～101范围内具有良好的线性关系,相关系数为R2=0.9... 详细信息

根据发表的猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因序列设计了一对特异引物,并以克隆重组质粒作为阳性标准品,采用SYBR-Green I嵌合荧光染料建立了一种用于检测PCV2的实时定量PCR方法。该方法在107～101范围内具有良好的线性关系,相关系数为R2=0.997,扩增效率为E=0.920;对质粒标准品检测下限值为8.2拷贝/μL,检测变异系数低于2.0%。该方法与常规PCR及过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)比较,其敏感性提高103倍以上。采用该法对PCV2人工感染猪的心、肝、脾、肺、肾、腹股沟淋巴结等组织中病毒核酸载量检测结果表明,在多种脏器中均可检测到病毒,其中腹股沟淋巴结、扁桃体和脾脏中病毒含量较高(为3.4×109拷贝/g～1.7×1010拷贝/g),这表明病毒主要在免疫器官增殖,导致淋巴细胞耗损。对来自国内不同地区的28份临床发病猪病料进行病毒DNA定量检测,有半数以上病料的病毒载量达到109-10拷贝/g。实验表明,实时定量PCR可用于PCV2核酸定量检测,为该病毒体内外定量检测提供了一种技术手段。

关键词：猪圆环病毒2型实时定量PCR 病毒体内分布规律

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一株3型牛腺病毒的分离与鉴定

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中国预防兽医学报 2011年第3期33卷 169-172页

作者：于作朱远茂蔡红高欲燃董秀梅吕闯薛飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

本研究于2009年由患急性呼吸道疾病牛的鼻拭子中分离获得一株病毒,经形态特征、血清学试验及PCR鉴定表明,该病毒与牛腺病毒3型(BAV-3)相似。对其E2A基因进行序列测定,并与GenBank中登录的BAV1型、3型、4型及人、绵羊、鼠等其它种属来源... 详细信息

本研究于2009年由患急性呼吸道疾病牛的鼻拭子中分离获得一株病毒,经形态特征、血清学试验及PCR鉴定表明,该病毒与牛腺病毒3型(BAV-3)相似。对其E2A基因进行序列测定,并与GenBank中登录的BAV1型、3型、4型及人、绵羊、鼠等其它种属来源的腺病毒E2A基因序列进行比对及系统进化分析,结果显示该分离株与BAV-3的同源性为95.5%。经MEGA4软件分析,分离株与BAV-3验证值为100,表明其为BAV-3,并命名为BAV-3HLJ0955株。对该分离株热敏感试验表明,BAV-3 HLJ0955在56℃ 30min可被完全灭活,属于BAV第一群。这是国内首次分离获得BAV-3的报道。

关键词：牛腺病毒3型分离鉴定

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冠状病毒核衣壳蛋白细胞核定位特征的研究进展

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中国预防兽医学报 2009年第7期31卷 577-580页

作者：吕茂杰冯力陈建飞时洪艳中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

冠状病毒属于尼多病毒目（Nidovirales），冠状病毒科（Coronaviridae），冠状病毒属（Coronavirus）成员，为单股正链RNA病毒，根据其基凶组和抗原性的特征又分为3个群：第1群主要包括猪传染性胃肠炎病毒（Transmissible gastroenterit... 详细信息

冠状病毒属于尼多病毒目（Nidovirales），冠状病毒科（Coronaviridae），冠状病毒属（Coronavirus）成员，为单股正链RNA病毒，根据其基凶组和抗原性的特征又分为3个群：第1群主要包括猪传染性胃肠炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus，TGEV）、

关键词：冠状病毒属细胞核定位核衣壳蛋白特征猪传染性胃肠炎病毒正链RNA病毒冠状病毒科 virus

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猪轮状病毒Rotavirus A pig/China/NMTL/2009/G9P株的分离与鉴定

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中国预防兽医学报 2011年第9期33卷 681-684页

作者：时洪艳陈建飞王承宝张志榜石达冯力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

A群轮状病毒(GAR)是引起人类和多种动物腹泻的主要病原体,病原的分离与鉴定是轮状病毒(RV)流行病学、病原学等研究的基础。本研究采用接种MA104细胞的方法,从内蒙古某猪场患病猪腹泻粪便中分离一株病毒,经3次蚀斑克隆纯化后,采用电镜观... 详细信息

A群轮状病毒(GAR)是引起人类和多种动物腹泻的主要病原体,病原的分离与鉴定是轮状病毒(RV)流行病学、病原学等研究的基础。本研究采用接种MA104细胞的方法,从内蒙古某猪场患病猪腹泻粪便中分离一株病毒,经3次蚀斑克隆纯化后,采用电镜观察、PCR鉴定和序列测定进行分析,结果表明该分离株为猪轮状病毒(PoRV)。致病性试验表明该分离株能够引起仔猪急性腹泻,RT-PCR扩增其VP4、VP6和VP7的基因节段并进行序列测定,按照A群RV的最新分类方法,确定该分离株的VP6、VP7和VP4基因型分别为I5型、G9型和P[23]型。因此,将该分离株命名为Rotavirus A pig/China/NMTL/2009/Q9P[23]。

关键词：猪轮状病毒分离鉴定

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我国A群牛轮状病毒感染的血清流行病学调查

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中国预防兽医学报 2010年第9期32卷 664-667页

作者：李鑫常继涛刘海军于力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为调查A群牛轮状病毒(BRV)在我国不同地区牛群中的感染和流行情况,本研究采用间接ELISA检测2005年～2006年期间在我国12个不同地区收集的1760份牛血清中抗A群BRV抗体。结果显示,其强阳性血清225份(12.8%);中等阳性血清1240份(70.4%);弱... 详细信息

为调查A群牛轮状病毒(BRV)在我国不同地区牛群中的感染和流行情况,本研究采用间接ELISA检测2005年～2006年期间在我国12个不同地区收集的1760份牛血清中抗A群BRV抗体。结果显示,其强阳性血清225份(12.8%);中等阳性血清1240份(70.4%);弱阳性血清279份(15.9%);阴性血清16份(1%)。总抗体阳性率高达99%。不同地区强阳性、中等阳性及弱阳性血清所占比例有所不同。结果表明,A群BRV在我国牛群中的感染和流行不但非常广泛,而且极为严重。本研究对我国BRV感染进行了较大规模的血清流行病学调查,其结果可为我国犊BRV腹泻疾病的防制提供重要的依据。

关键词： A群牛轮状病毒感染 IgG抗体 ELISA 血清流行病学调查

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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定及其分子流行病学分析

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中国预防兽医学报 2007年第5期29卷 323-327页

作者：童光志周艳君郝晓芳田志军仇华吉彭金美安同庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为了弄清2006年在我国南方一些猪场暴发的一种以高热、高发病率和高死亡率为特征的传染病的病因,我们从12个省市48个发病猪场采集临床样品进行了猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的... 详细信息

为了弄清2006年在我国南方一些猪场暴发的一种以高热、高发病率和高死亡率为特征的传染病的病因,我们从12个省市48个发病猪场采集临床样品进行了猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的分离鉴定和分子流行病学分析。结果显示从48个猪场样品中均检测出了PRRSV,通过完整的ORF5和部分Nsp2基因序列比较分析发现来自12个省市不同猪场的PRRSV高度同源,而且在Nsp2基因上都有两个相同位点的缺失;从分离的15株PRRSV中选择湖南分离株HuN4人工感染5头60日龄的健康猪,结果5头猪分别在7 d～21 d内全部死亡,感染猪的临床症状和现地所见十分相似。本次试验结果表明新出现的以Nsp2基因部分缺失为特征的PRRSV对猪是高致病性的,可能是2006年大部分猪场暴发"高热综合症"的主要病因。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒高热综合症分子流行病学

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牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白表位鉴定

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中国预防兽医学报 2015年第11期37卷 871-874,898页

作者：周跃辉朱远茂任建乐严昊王雪枝马磊史鸿飞薛飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为鉴定牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)g D蛋白抗原表位,本研究利用p ET-30a原核表达系统表达、纯化了重组g D蛋白,采用超速离心纯化的IBRV免疫BALB/c小鼠,取脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,以重组g D蛋白作为包被抗原,通过间接ELISA筛选出... 详细信息

为鉴定牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)g D蛋白抗原表位,本研究利用p ET-30a原核表达系统表达、纯化了重组g D蛋白,采用超速离心纯化的IBRV免疫BALB/c小鼠,取脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,以重组g D蛋白作为包被抗原,通过间接ELISA筛选出一株稳定分泌抗g D蛋白的MAb杂交瘤细胞株(1G3)。间接免疫荧光结果表明:MAb与IBRV呈阳性反应,中和试验测定其腹水中和效价为1∶32。利用肽扫描技术原核表达GST融合短肽对MAb 1G3识别的抗原表位进行筛选鉴定,结果表明:该MAb识别的抗原表位为259EESKGYE265。蛋白序列分析表明该抗原表位在IBRV各分离株及牛疱疹病毒5型(Bo HV-5)中均保守。本研究为IBRV的糖蛋白g D的结构和免疫学特性及IBRV致病性的深入研究奠定了基础。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒 gD蛋白单克隆抗体表位鉴定

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猪圆环病毒2型几种ELISA抗体检测试剂盒的比较与应用

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中国预防兽医学报 2014年第2期36卷 129-133页

作者：张志慧危艳武吴洪丽黄立平李胜斌刘建波张辉王一平刘丹刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为了比较猪圆环病毒2型（PCV2）5种ELISA抗体检测试剂盒的使用效果，本研究采用IPMA法标定不同PCV2抗体效价的阳性血清50份和阴性血清30份，对这些试剂盒的敏感性、特异性及符合率进行比较。结果显示，这5种试剂盒的敏感性为74．0％～96... 详细信息

为了比较猪圆环病毒2型（PCV2）5种ELISA抗体检测试剂盒的使用效果，本研究采用IPMA法标定不同PCV2抗体效价的阳性血清50份和阴性血清30份，对这些试剂盒的敏感性、特异性及符合率进行比较。结果显示，这5种试剂盒的敏感性为74．0％～96．0％，特异性为83．3％～96．7％，符合率为77．5％～96.3％，其中以国产阻断ELISA试剂盒和Ingenasa公司的试剂盒效果最好。此外，本研究采用国产阻断ELISA试剂盒对PCV2疫苗免疫猪血清抗体检测表明，疫苗免疫21d后抗体阳性率达50％，免疫28d抗体阳性率达100％；对PCV2人工感染猪血清抗体检测显示，病毒接种后第28d抗体阳性率为30．0％，第42d阳性率为100％；对临床送检猪血清抗体检测表明，PCV2抗体阳性率介于45.0％～76．5％。本研究通过对PCV25种抗体检测试剂盒的比较及应用显示，国产阻断ELISA试剂盒可以作为检测PCV2疫苗免疫及临床感染猪血清抗体的有效方法。

关键词：猪圆环病毒2型抗体检测试剂盒比较和应用

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猪流行性腹泻病毒S蛋白中和表位区单克隆抗体的制备与鉴定

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中国预防兽医学报 2007年第11期29卷 887-890页

作者：孙东波冯力时洪艳陈建飞崔晓辰佟有恩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

以纯化的猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S蛋白中和表位(SID)重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术获得了6株稳定分泌抗SID区特异性的单克隆抗体细胞株,分别命名为2C4、3G3、5F8、3G5、6E6和3C... 详细信息

以纯化的猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S蛋白中和表位(SID)重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术获得了6株稳定分泌抗SID区特异性的单克隆抗体细胞株,分别命名为2C4、3G3、5F8、3G5、6E6和3C3。6株杂交瘤细胞诱生小鼠产生的腹水抗体效价分别为1∶51200、1∶6400、1∶12800、1∶6400、1∶51200和1∶25600。免疫球蛋白类型均为IgG1型,轻链均为Κ链。Western blot试验结果显示,6株单克隆抗体均能特异性地识别天然PEDV中的S蛋白。

关键词：猪流行性腹泻病毒 S蛋白中和表位区单克隆抗体

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