检索结果-内蒙古大学图书馆

黑龙江畜牧兽医 2014年第3期 4-8,207页

作者：王雪枝朱远茂史鸿飞严昊蔡红王姝马磊薛飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室哈尔滨150001

为了制备BVDV的E0蛋白兔源多克隆抗体,试验采用大肠杆菌对E0蛋白进行了表达,根据已发表的BVDV的VEDEVAC株的全基因组序列设计1对扩增E0的引物,经RT-PCR扩增出长约680 bp的E0基因片段,然后将目的基因克隆到pET-30a载体上,经酶切鉴定获得... 详细信息

为了制备BVDV的E0蛋白兔源多克隆抗体,试验采用大肠杆菌对E0蛋白进行了表达,根据已发表的BVDV的VEDEVAC株的全基因组序列设计1对扩增E0的引物,经RT-PCR扩增出长约680 bp的E0基因片段,然后将目的基因克隆到pET-30a载体上,经酶切鉴定获得阳性重组质粒后进行测序,再将测序正确的阳性重组质粒转化BL21表达菌,经扩大培养及IPTG诱导后获得以包涵体形式存在的重组E0蛋白,经亲和层析法纯化后进行Western-blot检测,同时以纯化的E0蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并对E0多克隆抗体进行了中和试验和免疫荧光检测。结果表明:E0蛋白具有良好的反应性;E0多克隆抗体的病毒中和试验测定其中和抗体效价达到1∶128,具有良好的反应性和特异性。说明制备的重组E0蛋白多克隆抗体可以用于BVDV的检测。

关键词：牛病毒性腹泻病毒 E0蛋白家兔多克隆抗体 RT—PCR Western—blot IFA

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TLR-4介导的鹅β-防御素1抗肠炎沙门菌感染的信号传导机制初探

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畜牧兽医学报 2012年第12期43卷 1938-1948页

作者：张名岳张可心辛胜男韩宗玺邵昱昊刘晓丽刘胜旺马得莹东北农业大学动物营养研究所哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨150001

为研究鹅β-防御素1(AvBD1)的生物学特性以及初步尝试探寻其抗肠炎沙门菌的作用机理,利用RT-PCR方法从鹅骨髓组织中扩增到鹅AvBD1基因片段,并将该基因亚克隆到原核表达载体pGEX-6p-1的EcoRⅠ和SalⅠ双酶切位点上,构建重组表达质粒pGEX-g... 详细信息

为研究鹅β-防御素1(AvBD1)的生物学特性以及初步尝试探寻其抗肠炎沙门菌的作用机理,利用RT-PCR方法从鹅骨髓组织中扩增到鹅AvBD1基因片段,并将该基因亚克隆到原核表达载体pGEX-6p-1的EcoRⅠ和SalⅠ双酶切位点上,构建重组表达质粒pGEX-goose AvBD1。将重组质粒转化大肠杆菌BL21,于37℃用IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳表明,重组鹅AvBD1蛋白在原核高效表达(相对分子质量约31ku)。该重组蛋白经纯化后测定其体外抗菌活性与理化特性。结果显示,鹅AvBD1基因cDNA片段大小为198bp,编码65个氨基酸残基。经相似性分析发现鹅AvBD1氨基酸序列与鸵鸟AvBD1氨基酸序列相似性最高,为77.1%,而且重组鹅AvBD1蛋白具有广谱的抗菌活性,对12种细菌(包括革兰阳性菌和革兰阴性菌)均具有抑菌作用。高盐离子浓度显著降低重组鹅AvBD1蛋白的抗菌活性,且该重组蛋白的溶血活性极低。试验表明,肠炎沙门菌确实会诱导鹅AvBD1基因在鹅骨髓组织中的表达,说明鹅AvBD1起到了抗肠炎沙门菌感染的作用,而这种作用有可能与TLR4介导的信号转导有关。

关键词：鹅β-防御素1 重组蛋白抗菌活性 Toll样受体4 诱导表达

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高致病性PRRS活疫苗(HuN4-F112株)抗体对Ⅱ型不同亚群PRRSV的中和效果

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中国预防兽医学报 2012年第5期34卷 401-404页

作者：孟甄祥安同庆陈家锃宫大庆冷超粮刘飞李登云彭金美孙艳吴玉全吴江郭娟娟杨永倩童光志田志军中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241

为研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)活疫苗(HuN4-F112株)诱导的抗体对II型不同亚群PRRSV的中和作用,本研究将10头PRRSV抗原、抗体阴性的6周龄仔猪,每头仔猪肌肉注射1头份疫苗(106.0TCID50/mL),每周采血并分离血清,检测该... 详细信息

为研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)活疫苗(HuN4-F112株)诱导的抗体对II型不同亚群PRRSV的中和作用,本研究将10头PRRSV抗原、抗体阴性的6周龄仔猪,每头仔猪肌肉注射1头份疫苗(106.0TCID50/mL),每周采血并分离血清,检测该血清对II型PRRSV第1、2、4亚群的代表病毒株勃林格PRRSV活疫苗(VR-2332株)、PRRSV活疫苗(CH-1R株)和HP-PRRSV活疫苗(HuN4-F112株)的中和效价。实验结果显示,仔猪免疫3周后开始产生针对HuN4-F112的中和抗体,11周至22周抗体水平达到高峰,抗体持续至少25周,但只有少数免疫猪在几个时间点的血清对VR-2332和CH-1R疫苗株具有血清交叉中和作用,而且中和效价较低。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒中和抗体 HuN4.F1 12

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鸭β-防御素9(AvBD9)单克隆抗体的制备及鉴定

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农业生物技术学报 2010年第6期18卷 1203-1207页

作者：李子瑞邵昱昊韩宗玺刘晓丽刘胜旺马得莹东北农业大学动物营养研究所中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室

本研究旨在制备抗鸭β-防御素9(AvBD9)蛋白的单克隆抗体。首先用pGEX-6p-1载体表达的鸭AvBD9蛋白做抗原免疫6～8周龄雌性BALB/c小鼠(Mus musculus),免疫3次,每次间隔15d,融合前3d加强免疫1次。然后将鸭AvBD9基因亚克隆到原核表达载体pET... 详细信息

本研究旨在制备抗鸭β-防御素9(AvBD9)蛋白的单克隆抗体。首先用pGEX-6p-1载体表达的鸭AvBD9蛋白做抗原免疫6～8周龄雌性BALB/c小鼠(Mus musculus),免疫3次,每次间隔15d,融合前3d加强免疫1次。然后将鸭AvBD9基因亚克隆到原核表达载体pET-32a的EcoRⅠ和SalⅠ双酶切位点上,构建重组表达质粒pET-32a-duckAvBD9,将重组质粒转化至大肠杆菌(Escheriohia coli)BL21(JM83-)株,经IPTG诱导表达、镍柱纯化后做检测原。用间接酶联免疫吸附实验(ELISA)和Western blot相结合的方法进行筛选及鉴定,经3次亚克隆后得到1株单抗,命名为1F11。结果表明:重组pET-32a-duck AvBD9蛋白大小为26kD,与预期大小一致,并能被抗pGEX-duck AvBD9阳性血清识别。单抗1F11在pGEX-6p-1空载体蛋白、pGEX-duck AvBD9蛋白、pGEX-duck AvBD10蛋白、pGEX-chicken AvBD10蛋白中能够特异性识别pGEX-duckAvBD9蛋白。其亚类鉴定重链为IgG1,轻链为κ链。本研究获得了1株鸭AvBD9蛋白的单克隆抗体,单抗1F11的特异性良好,可用于对鸭AvBD9蛋白的生物学功能及活性作进一步研究。

关键词：鸭 pGEX-duck AvBD9 pET-32a-duck AvBD9 单克隆抗体

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六种检测猪瘟病毒方法的比较

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微生物学报 2010年第8期50卷 1087-1093页

作者：王向鹏张兴娟孙元李娜贺番常天明李宏宇杨增岐仇华吉西北农林科技大学动物医学院杨凌712100 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室哈尔滨150001

【目的】本研究旨在比较6种检测猪瘟病毒方法的优缺点。【方法】应用病毒分离、胶体金免疫层析试纸条、抗原捕捉ELISA、反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、TaqMan荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)和反转录-环介导等温扩增方法(RT-LAMP)等6种方法,... 详细信息

【目的】本研究旨在比较6种检测猪瘟病毒方法的优缺点。【方法】应用病毒分离、胶体金免疫层析试纸条、抗原捕捉ELISA、反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、TaqMan荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)和反转录-环介导等温扩增方法(RT-LAMP)等6种方法,分别对50份疑似猪瘟病料中的猪瘟病毒(Classical swine fevervirus,CSFV)进行检测。【结果】结果表明:RT-qPCR和RT-LAMP方法检出阳性样品数为13份,RT-PCR为11份,病毒分离为10份,抗原捕捉ELISA为9份,胶体金试纸条为8份;6种方法均检测为阳性8份,均为阴性37份。【结论】结果提示,在对猪瘟病毒进行检测时,RT-qPCR、RT-LAMP和RT-PCR由于其灵敏性高,可作为首选检测方法,但操作时需要避免假阳性的出现;病毒分离方法虽然操作繁琐,但结果准确,是确诊猪瘟必不可少的检测方法;抗原捕捉ELISA和胶体金试纸条检测时间较短,由于其敏感性较低所限,主要用于对畜群进行检测,不适合个体检测。

关键词：猪瘟病毒检测方法优缺点

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虫媒病毒与牛羊繁殖障碍性疾病

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中国预防兽医学报 2016年第6期38卷 507-512页

作者：王芳齐瑛琳于力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/牛羊传染病研究创新团队黑龙江哈尔滨150001

牛羊传染性疾病,在我国习惯上划分为烈性传染病口蹄疫、羊的小反刍兽疫及羊痘、人畜共患病布鲁氏杆菌病和牛结核以及多系统性传染病,后者包括以呼吸道疾病综合症为特征的呼吸系统疾病、以腹泻为特征的消化系统疾病和以流产为特征的繁殖... 详细信息

牛羊传染性疾病,在我国习惯上划分为烈性传染病口蹄疫、羊的小反刍兽疫及羊痘、人畜共患病布鲁氏杆菌病和牛结核以及多系统性传染病,后者包括以呼吸道疾病综合症为特征的呼吸系统疾病、以腹泻为特征的消化系统疾病和以流产为特征的繁殖障碍性疾病。繁殖障碍性疾病（Reproductive disorders diseases）即感染生殖系统的疾病,

关键词：繁殖障碍性疾病虫媒病毒烈性传染病疾病综合症人畜共患病小反刍兽疫牛结核阿卡斑病布鲁氏杆菌病中山病

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果子狸源呼肠孤病毒的分离鉴定

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病毒学报 2008年第5期24卷 376-382页

作者：邵昱昊韩宗玺陈露菲孔宪刚刘胜旺中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江省疾病预防控制中心哈尔滨150030

在广东省采集的果子狸样品共192份,处理后接种Vero-E6细胞,从中分离到1株病毒。该病毒在Vero-E6细胞上盲传至第4代开始出现细胞病变,表现为细胞内颗粒增多,细胞收缩、变圆,最后细胞从瓶壁脱落。经电镜观察发现,病毒粒子无囊膜,有双层衣... 详细信息

在广东省采集的果子狸样品共192份,处理后接种Vero-E6细胞,从中分离到1株病毒。该病毒在Vero-E6细胞上盲传至第4代开始出现细胞病变,表现为细胞内颗粒增多,细胞收缩、变圆,最后细胞从瓶壁脱落。经电镜观察发现,病毒粒子无囊膜,有双层衣壳,呈正二十面体对称,具有呼肠孤病毒的形态特征,将病毒命名为MaskedPal m Civet/China/2004(MPC/04)。红细胞凝集试验表明该病毒能凝集健康人O型血红细胞,不能凝集SPF鸡、实验用普通级牛、大鼠和豚鼠的红细胞,这与哺乳动物呼肠孤病毒血清1型的红细胞凝集谱相符。理化特性试验表明该病毒对氯仿有抵抗力;能耐受pH3.0的酸性环境;50℃水浴1h病毒未丧失感染能力;1mol/L MgCl2能提高病毒对热的抵抗力。为了进一步从分子水平上证实该病毒是呼肠孤病毒,用哺乳动物呼肠孤病毒特异性引物进行反转录-聚合酶链式反应(Reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR),扩增得到了预期大小的片段。测序结果经NCBI BLAST比较,选取同源性较高者进行序列同源性分析,发现该片段与哺乳动物呼肠孤病毒血清1型参考毒株核苷酸同源性最高。以上结果证明该病毒为呼肠孤病毒科的成员。

关键词：果子狸呼肠孤病毒分离鉴定

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逆转录病毒基因组RNA的二聚作用

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病毒学报 2008年第6期24卷 487-491页

作者：高旭沈荣显相文华周建华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室大动物传染病研究室哈尔滨150001 延边大学农学院动物医学系延吉133400

逆转录病毒科(Retroviridae)是一成员众多、易变异的RNA病毒科。在逆转录病毒复制周期内,所有逆转录病毒均将两拷贝的单股正链RNA带人病毒粒子。在此过程中,遗传物质——基因组RNA能顺利包装入病毒粒子是病毒复制与繁衍的关键,而基因组... 详细信息

逆转录病毒科(Retroviridae)是一成员众多、易变异的RNA病毒科。在逆转录病毒复制周期内,所有逆转录病毒均将两拷贝的单股正链RNA带人病毒粒子。在此过程中,遗传物质——基因组RNA能顺利包装入病毒粒子是病毒复制与繁衍的关键,而基因组RNA通过二聚作用(Dimerization)形成二聚体(Dimer)是包装逆转录病毒的前提。[第一段]

关键词：逆转录病毒科 RNA病毒病毒基因组二聚作用病毒复制病毒粒子遗传物质二聚体

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J亚群禽白血病病毒gp85基因在毕赤酵母中的分泌表达

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中国畜牧兽医 2012年第4期39卷 42-46页

作者：徐延伟高宏雷高玉龙李凯高立秦立廷祁小乐王永强王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所禽传染病研究室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为获得J亚群禽白血病病毒gp85蛋白,将gp85基因克隆至毕赤酵母表达载体pPIC9K,构建了pPIC9K-gp85表达载体。将鉴定正确的表达载体经SalⅠ酶切线性化后电转化毕赤酵母宿主菌GS115,经MD及G418抗性平板筛选后挑取阳性克隆进行PCR鉴定,获得... 详细信息

为获得J亚群禽白血病病毒gp85蛋白,将gp85基因克隆至毕赤酵母表达载体pPIC9K,构建了pPIC9K-gp85表达载体。将鉴定正确的表达载体经SalⅠ酶切线性化后电转化毕赤酵母宿主菌GS115,经MD及G418抗性平板筛选后挑取阳性克隆进行PCR鉴定,获得重组酵母菌株GS115/pPIC9K-gp85。对阳性重组菌进行诱导表达,表达产物经SDS-PAGE、Western blotting和Dot-ELISA分析,结果表明,gp85基因在毕赤酵母中获得分泌表达,表达产物与J亚群禽白血病病毒多克隆抗体有良好的反应活性,分泌表达量达40mg/L。本研究为J亚群禽白血病病毒诊断方法的建立及gp85蛋白的深入研究奠定了基础。

关键词： J亚群禽白血病 gp85基因毕赤酵母分泌表达

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我国部分地区种鸡禽肺病毒感染的血清学调查

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中国家禽 2012年第12期34卷 64-65页

作者：贠炳岭刘在斯吴关李久宽秦立廷祁小乐王永强高宏雷高玉龙王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

禽肺病毒（Avian pneumovirus,APV）又称火鸡鼻气管炎病毒（Turky rhinotracheitis virus,TRTV）[1]。禽肺病毒属于副黏病毒科肺病毒亚科偏肺病毒亚属[2]。已经确定禽肺病毒可引起火鸡呼吸道疾病和产蛋量下降。虽然广泛认为禽肺病毒是... 详细信息

禽肺病毒（Avian pneumovirus,APV）又称火鸡鼻气管炎病毒（Turky rhinotracheitis virus,TRTV）[1]。禽肺病毒属于副黏病毒科肺病毒亚科偏肺病毒亚属[2]。已经确定禽肺病毒可引起火鸡呼吸道疾病和产蛋量下降。虽然广泛认为禽肺病毒是鸡肿头综合征的因素之一。

关键词：禽肺病毒感染血清学调查种鸡鼻气管炎病毒鸡呼吸道疾病鸡肿头综合征 virus 产蛋量下降

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