检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2011年第4期41卷 336-341页

作者：杨文闯刘长军张艳萍李志杰张锋侯广玉丛锋中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为了研究马立克氏病病毒(MDV)编码的miRNA与致瘤性的关系,采用同源重组的方法构建了1株缺失MDV1-miR-M9、MDV1-miR-M5和MDV1-miR-M12的重组MDV,命名为rMS△miR9-12。经PCR和测序分析鉴定,证实该重组病毒编码MDV1-miR-M9、MDV1-miR-M5和MDV1-miR-M12的基因片段已缺失。将纯化后的病毒在鸡胚成纤维细胞上连续传20代,对第10代和第20代进行PCR鉴定,证明该重组病毒的遗传性状稳定。用荧光定量PCR方法比较重组病毒rMS△miR9-12与原始毒株MS的体外生长规律,发现rMS△miR9-12株比MS株有更快的生长速度。重组病毒rMS△miR9-12的获得为下一步研究MDV编码的miRNA与致瘤机制关系提供了一个新的平台,同时为获得免疫原性较好的疫苗候选毒株提供了新的途径。

关键词：马立克氏病病毒 miRNA 致瘤性

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传染性支气管炎重组鸡痘病毒免疫鸡对LHLJ04XI株病毒攻击的免疫保护作用

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中国预防兽医学报 2008年第1期30卷 47-52页

作者：石星明王云峰王玫刘胜旺童光志何来贺笋崔红玉胡文玮韩文雄中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

将表达鸡IFN-γ基因和传染性支气管炎病毒S1基因的重组鸡痘病毒(rFPV-IFNγ S1)接种SPF鸡后,用与S1基因亲本毒株具有相同致病型且遗传关系较近的现地分离株LHLJ04XI病毒进行攻击,评价重组疫苗对现地分离病毒的保护效果。结果显示,重组... 详细信息

将表达鸡IFN-γ基因和传染性支气管炎病毒S1基因的重组鸡痘病毒(rFPV-IFNγ S1)接种SPF鸡后,用与S1基因亲本毒株具有相同致病型且遗传关系较近的现地分离株LHLJ04XI病毒进行攻击,评价重组疫苗对现地分离病毒的保护效果。结果显示,重组病毒在免疫后1周即可检出ELISA抗体,并且免疫组外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞含量均有显著上升。当用LHLJ04X I株病毒及亲本毒LX4攻击后,免疫鸡的肝脏、肾脏、脾脏及肺脏等脏器的病理损伤程度明显轻于非免疫对照组,排毒时间缩短,攻毒后现地分离株攻击的免疫组的发病率为27.3%(3/11),死亡率为9.1%(1/11),亲本毒攻击的免疫组发病率为26.67%(4/15),死亡率为6.67%(1/15),两者没有明显差异,而非免疫对照组的发病率和死亡率分别为100%(11/11)和45.5%(5/11),与免疫组相比差异显著,说明重组疫苗对免疫鸡具有较好的保护效果。体重测定结果表明,攻毒前重组疫苗免疫组和非免疫对照组的体重差异不显著(P>0.05),攻毒以后免疫组体重的增加幅度高于非免疫对照组。以上结果表明,共表达鸡IFN-γ基因和传染性支气管炎病毒S1基因重组鸡痘病毒活载体疫苗能对异源现地分离株的攻击产生较好的免疫保护,同时也减轻了重组疫苗对体重增长的抑制作用。

关键词：传染性支气管炎鸡痘病毒免疫保护

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蛋鸡J亚群禽白血病病毒分离株SD1009株感染性克隆的构建与病毒拯救

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中国兽医科学 2011年第11期41卷 1111-1116页

作者：王琦王永强康忠惠高玉龙潘伟秦立廷李久宽祁小乐高宏雷王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为探究蛋鸡J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的致病机理,从山东省某鸡场送检的蛋鸡病料中分离鉴定出1株ALV-J,命名为SD1009株,采用PCR方法分3段扩增出SD1009株的前病毒cDNA,PCR产物经克隆酶切后顺次连接,获得1个含有完整ALV-J前病毒cDNA的重组... 详细信息

为探究蛋鸡J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的致病机理,从山东省某鸡场送检的蛋鸡病料中分离鉴定出1株ALV-J,命名为SD1009株,采用PCR方法分3段扩增出SD1009株的前病毒cDNA,PCR产物经克隆酶切后顺次连接,获得1个含有完整ALV-J前病毒cDNA的重组质粒,命名为pBW-SD1009。全长测序及序列比对分析发现,近年来分离的ALV-J都存在缺失部分rTM和DR区的序列,缺失长度为205bp。通过外源基因嵌合的方式,将205bp嵌合进入,又获得了1个前病毒cDNA的重组质粒,命名为pBW-SD1009A205,将pBW-SD1009和pBW-SD1009A205分别转染DF1细胞,通过间接免疫荧光试验,禽白血病抗原试剂盒检测,反转录酶试剂盒检验,表明拯救出了2株病毒,分别命名为rSD1009和rSD1009A205。本研究成功构建了蛋鸡ALV-J的感染性克隆,并在序列分析的基础上,又构建了第2株补全缺失序列的感染性克隆,结果表明缺失部分rTM和DR区的序列,对病毒的拯救以及病毒的复制动力学无显著影响。

关键词： J亚群禽白血病病毒感染性分子克隆病毒拯救生长特性

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鸡传染性腔上囊病病毒Gt株全基因组序列分析及真核表达载体的构建

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中国兽医科学 2006年第10期36卷 820-826页

作者：祁小乐高玉龙高宏雷邓小芸张宁王晓燕王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

采用一步法长距离RT-PCR克隆了IBDV Gt株全基因组,对其核苷酸和氨基酸序列进行了系统分析。在IBDV Gt株全基因组中引入分子标签,且在基因组两端分别引入锤头状核酶结构(HamRz)和丁肝病毒核酶结构(HdvRz)。将带有分子标签和核酶结构的IBD... 详细信息

采用一步法长距离RT-PCR克隆了IBDV Gt株全基因组,对其核苷酸和氨基酸序列进行了系统分析。在IBDV Gt株全基因组中引入分子标签,且在基因组两端分别引入锤头状核酶结构(HamRz)和丁肝病毒核酶结构(HdvRz)。将带有分子标签和核酶结构的IBDV基因组插入载体pCAGGS的β肌动蛋白启动子下游,构建了IBDV真核表达载体pCAGGmGtAHRT和pCAG-GmGtBHRT,为IBDV新型高效拯救平台的构建及基于此的病毒基因功能奠定了基础。

关键词：传染性腔上囊病病毒 Gt株分子标签核酶真核表达载体

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鸡马立克氏病病毒流行毒株高代次细胞毒株Meq、RLORF4、RLORF12及132bpr基因变异分析

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病毒学报 2009年第5期25卷 368-375页

作者：刘爱玲刘长军张艳萍李晶梅施维松闫福海张锋程志伟中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院哈尔滨150030

根据鸡马立克氏病病毒（Marek′s disease virus,MDV）GA株的全基因组序列,设计合成了用于扩增MDVMeq、RLORF4、RLORF12及132bpr基因的引物,分别扩增4株MDV流行强毒株的高代次细胞毒株（L-SYp85C、L-MSp75C、L-CZp75C、L-ZYp75C）及相应亲本毒株（L-SY、L-MS、L-CZ、L-ZY）、MDV强毒J-1株、814疫苗株等10个毒株的Meq、RLORF4、RLORF12和132bpr基因。经克隆测序后,分析4个高代次细胞毒株中相应基因的变异,并与MDV强毒J-1株、814疫苗株及GenBank中已发表MDV毒株的相应序列进行比较。序列比对分析发现,L-CZp75C株Meq基因的第625位存在碱基C插入突变;L-ZYp75C株Meq基因第529位存在碱基C插入,且第602位缺失碱基T,从而致使Meq基因推导的相应氨基酸序列在第177~200位发生移码突变。L-SYp85C株RLORF4基因在第215~265位缺失51bp,致使该基因推导的氨基酸序列相应缺失17个氨基酸残基。分析RLORF12基因序列,发现L-MSp75C株在第67位存在碱基T缺失,814疫苗株在第18~86位缺失69 bp,缺失位置均位于复制起点（Origin of replication,,Ori）内;而L-ZYp75C毒株在RLORF12基因第168~174位存在独特的TGTTGGG碱基缺失。4个细胞高代次毒株的132 bpr基因的扩增结果表明,该基因在病毒基因组中的拷贝数明显增加,可达到10个拷贝以上。上述分析结果提示,4株MDV流行强毒株经体外连续传代后,MDV致瘤相关基因Meq、RLORF4、RLORF12和132bpr基因等发生了缺失突变或插入突变。

关键词：马立克氏病病毒 Meq RLORF4 RLORF12 132bpr

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一株鹅源H5N2亚型高致病性禽流感病毒的分离鉴定及生物学特性分析

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生物化学与生物物理进展 2009年第1期36卷 65-71页

作者：刘春国刘明张云刘大飞潘蔚绮孙恩成杜金玲李洪涛中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感中心及国家禽流感参考实验室哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病实验室哈尔滨150001 中国科学院广州生物医药与健康研究院广州510663 黑龙江八一农垦大学动物科技学院大庆163319 东北农业大学动物医学院哈尔滨150030

分离到一株鹅源H5N2亚型高致病性禽流感病毒,SPF鸡静脉接种致病指数为2.99,但鸭子对该病毒不敏感.病毒感染小鼠后不致病,但能够在肺内有效复制,表明其具有感染哺乳动物的潜在风险.血凝素(hemagglutinin,HA)蛋白裂解位点上插入有多个连... 详细信息

分离到一株鹅源H5N2亚型高致病性禽流感病毒,SPF鸡静脉接种致病指数为2.99,但鸭子对该病毒不敏感.病毒感染小鼠后不致病,但能够在肺内有效复制,表明其具有感染哺乳动物的潜在风险.血凝素(hemagglutinin,HA)蛋白裂解位点上插入有多个连续的碱性氨基酸(-RRRKKR-),从分子上证实这是一株高致病性禽流感病毒.核酸序列比较分析表明,分离的流感病毒HA基因与A/chicken/Hubei/489/2004(H5N1)同源率达到99.4%,神经氨酸酶(neuraminidase,NA)基因与A/chicken/Jilin/53/01(H9N2)同源率达到99.8%;氨基酸水平上,HA与2004年分离到的A/chicken/Hubei/489/2004(H5N1)、A/swan/Guangxi/307/2004(H5N1)、A/wildduck/Guangdong/314/2004(H5N1)和A/chicken/Henan/210/2004(H5N1)同源率均为99.3%,NA与A/chicken/Jilin/53/01(H9N2)同源率为99.6%.进化树分析结果表明,该流感病毒分离株可能是由H5N1和H9N2两个亚型病毒重排而来.

关键词：鹅禽流感病毒 H5N2亚型致病性序列分析

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抗鸡传染性法氏囊病病毒VP3单克隆抗体制备及抗原表位的初步分析

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畜牧兽医学报 2006年第12期37卷 1323-1327页

作者：程宇邓小芸高玉龙高宏雷林欢王晓艳王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病实验室哈尔滨150001

用纯化的原核表达的IBDVVP3蛋白免疫6～8周龄的雌性BALB／c小鼠，经过3次免疫后，取其脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞进行融合，经过3次有限稀释，获得分泌抗IBDVVP3抗体的4株（HRB-7B、HAR-7C、HRB-3F、HRB-10E）杂交瘤细胞系。结果表明，4... 详细信息

用纯化的原核表达的IBDVVP3蛋白免疫6～8周龄的雌性BALB／c小鼠，经过3次免疫后，取其脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞进行融合，经过3次有限稀释，获得分泌抗IBDVVP3抗体的4株（HRB-7B、HAR-7C、HRB-3F、HRB-10E）杂交瘤细胞系。结果表明，4株杂交瘤细胞分泌的抗体均能够特异地与IBDVVP3蛋白反应，细胞上清EuSA效价均在5．0×10^2以上，腹水EuSA效价为6．4×10^6以上；相加ELISA及肽扫描结果表明，4株中仅HRB-7C和HRB-10E2株单抗针对的抗原表位相近，并利用肽扫描的方法初步定位4株单克隆抗体的抗原表位。本研究对进一步分析IBDV的结构与功能以及建立以表位为基础的抗原抗体诊断方法具有重要的意义。

关键词：传染性法氏囊病病毒单克隆抗体抗原表位

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基因修饰对鸡新城疫病毒F48E9株HN基因DNA疫苗表达效力的影响

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生物工程学报 2008年第2期24卷 226-231页

作者：贺笋石星明王云峰王玫冉多良童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨150001 新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830052

DNA疫苗的免疫效果与抗原基因的表达量和免疫原性有直接关系,为了提高目的基因的表达量,本研究对NDV F_(48)E_9株的HN基因进行了修饰,对修饰前后HN基因表达水平进行了比较。利用分子生物学软件将NDV F_(48)E_9株的HN基因的密码子全部替... 详细信息

DNA疫苗的免疫效果与抗原基因的表达量和免疫原性有直接关系,为了提高目的基因的表达量,本研究对NDV F_(48)E_9株的HN基因进行了修饰,对修饰前后HN基因表达水平进行了比较。利用分子生物学软件将NDV F_(48)E_9株的HN基因的密码子全部替换为鸡体内偏嗜性密码子,同时在HN基因的5′端加上同样已替换密码子的禽流感病毒HA蛋白信号肽序列以期望提高目的蛋白在细胞中的表达。修饰后HN基因命名为SoptiHN,剔除信号肽的HN基因命名为optiHN。将SoptiHN、optiHN和F_(48)E_9株的HN基因分别克隆到真核表达载体pVAX1和含有多个鸡体内最适免疫刺激序列CpG-ODN的载体pVAX1-CpG中,将他们分别命名为pV-SoptiHN、pVC-SoptiHN、pV-optiHN、pVC-optiHN和pV-HN、pVC-HN,用这些质粒转染293T细胞,48小时后间接免疫荧光和Western blotting检测细胞中瞬时表达的HN蛋白。结果显示,与未经修饰的HN基因相比,修饰后的HN基因体外瞬时表达水平明显提高,并且密码子优化与添加信号肽序列这两种途径都可以提高HN基因的体外表达量.

关键词： NDV,DNA疫苗密码子优化信号肽间接免疫荧光免疫印迹

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猪圆环病毒2型去核定位信号ORF2基因的原核表达与初步应用

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中国预防兽医学报 2008年第5期30卷 384-388页

作者：苗丽娟符芳王小武陈微晶鲁晶红李曦中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

根据PCV2-871病毒株的已知序列设计一对引物,PCR扩增其去核定位信号的Cap基因(ORF2),通过BamHⅠ/HindⅢ双酶切位点将其克隆到表达载体pQE-32中,转化大肠杆菌M15。经IPTG诱导表达、SDS-PAGE鉴定,表明去核定位信号的Cap蛋白可以大量表达。... 详细信息

根据PCV2-871病毒株的已知序列设计一对引物,PCR扩增其去核定位信号的Cap基因(ORF2),通过BamHⅠ/HindⅢ双酶切位点将其克隆到表达载体pQE-32中,转化大肠杆菌M15。经IPTG诱导表达、SDS-PAGE鉴定,表明去核定位信号的Cap蛋白可以大量表达。Western blot、ELISA鉴定蛋白活性,继而,以重组蛋白为抗原包被ELISA板,对28份临床样品进行检测。结果表明,该蛋白具有良好的抗原活性,可以作为抗原应用于临床样品的检测。

关键词：猪圆环病毒2型 Cap蛋白原核表达

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A群猪轮状病毒JS株vp7基因序列分析

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中国预防兽医学报 2007年第5期29卷 359-362页

作者：高秀春时洪艳佟有恩吴波平孙东波白兴华陈建飞冯力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

根据已发表的猪轮状病毒OSU毒株vp7基因核苷酸序列ORF两端保守区序列,设计一对特异引物,以猪轮状病毒JS毒株反转录cDNA为模板,通过PCR方法扩增出长约1000 bp目的片段。将其进行T-A克隆、序列测定和分析。结果表明,vp7基因全长1062 bp,... 详细信息

根据已发表的猪轮状病毒OSU毒株vp7基因核苷酸序列ORF两端保守区序列,设计一对特异引物,以猪轮状病毒JS毒株反转录cDNA为模板,通过PCR方法扩增出长约1000 bp目的片段。将其进行T-A克隆、序列测定和分析。结果表明,vp7基因全长1062 bp,含有一个981 bp的开放阅读框,编码326个氨基酸。与已知的15个毒株vp7全长基因的核苷酸及推导的氨基酸序列比较,同源性分别为74.5%～78.5%和75.2%～83.1%,核苷酸系统发育进化树结果表明,JS毒株与轮状病毒G9型参考毒株ICB2185、O-1亲缘关系较近,分为一个群,表明JS毒株血清型为G9型。目前,我国尚未见猪及其它动物轮状病毒G9型流行株的报道。

关键词：猪轮状病毒 vp7基因序列分析

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