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第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会

作者：姜永萍张洪波张平静王全英于康震田国斌陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室农业部畜牧兽医总站

将表达密码子优化的H7亚型HA基因的DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA7的免疫保护效力进行了评估。首先以100μg、50μg和10μg剂量一次免疫3周龄SPF鸡,然后以100μg、50μg和10μg剂量间隔3周加强免疫3周龄SPF鸡,一次免疫后4周、加强免疫后2周用1... 详细信息

将表达密码子优化的H7亚型HA基因的DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA7的免疫保护效力进行了评估。首先以100μg、50μg和10μg剂量一次免疫3周龄SPF鸡,然后以100μg、50μg和10μg剂量间隔3周加强免疫3周龄SPF鸡,一次免疫后4周、加强免疫后2周用100LD50的HPAIV A/FPV/Rostock/34(H7N1)[RK/34(H7N1)]鼻腔途径进行攻击,观察发病与死亡情况,分别于攻毒后第3、5、7采集喉头及泄殖腔拭子进行病毒分离、滴定检测排毒情况,同时检测免疫后、攻毒前及攻毒后血清HI抗体、AGP抗体的动态变化。结果,pCAGGoptiHA7一次免疫后,100μg、50μg和100μg剂量均可对免疫鸡形成90%的死亡保护;pCAGGoptiHA7加强免疫后, 100μg和50μg剂量可对免疫鸡形成100%完全保护(不发病、不致死、不排毒),而10μg剂量则可对免疫鸡形成100%的保护(不发病、不致死),但不能完全阻止排毒。结果表明,H7亚型DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA7具有良好的免疫保护性,有望成为预防H7亚型高致病力禽流感的物质技术储备。

关键词：禽流感 H7亚型 DNA疫苗保护效力

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H5亚型禽流感DNA疫苗的实验室研究

H5亚型禽流感DNA疫苗的实验室研究

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届全国会员代表大会暨第11次学术研讨会

作者：姜永萍张洪波张平静于康震田国斌陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室农业部畜牧兽医总站

将H5亚型禽流感DNA疫苗pCAGGoptiHA5对SPF鸡、商品蛋鸡、鹅和鸭的免疫效力进行了实验室研究。pCAGGoptiHA5以10μg剂量加强免疫3周龄SPF鸡和5周龄商品蛋鸡,加强免疫后2周分别用100LD50的HPAIVA/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[Gs/GD/1/96(H5N1)]鼻腔途径进行攻击,pCAGGoptiHA5以100μg剂量加强免疫4周龄本地鹅和金定鸭,加强免疫后2周分别用100LD50的HPAIVA/Duck/ShanghaiNanhui/16/2004(H5N1)[DK/SHNH/1604(H5N1)]鼻腔途径进行攻击,其免疫保护效力通过免疫和攻毒后的HI抗体反应水平、攻毒后的AGP抗体测定、病毒分离与滴定以及对发病率和死亡率的统计等几个方面来综合评价。结果,10μgpCAGGoptiHA5加强免疫可对SPF鸡形成100%完全保护(不发病、不致死、不排毒),10μg剂量pCAGGoptiHA5加强免疫可对商品蛋鸡形成100%的保护(不发病、不致死),100μgpCAGGoptiHA5加强免疫可对鹅和鸭均形成100%的保护(不发病、不致死)。结果表明,pCAGGoptiHA5作为免疫效果良好、成本低廉的DNA疫苗,有望成为预防H5亚型高致病力禽流感的高效、安全新型基因工程疫苗。

关键词：禽流感 H5亚型 DNA疫苗免疫效力

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H7亚型禽流感DNA疫苗免疫保护效力研究

H7亚型禽流感DNA疫苗免疫保护效力研究

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届全国会员代表大会暨第11次学术研讨会

将表达密码子优化的H7亚型HA基因的DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA7的免疫保护效力进行了评估。首先以100μg、50μg和10μg剂量一次免疫3周龄SPF鸡,然后以100μg、50μg和10μg剂量间隔3周加强免疫3周龄SPF鸡,一次免疫后4周、加强免疫后2周用100LD50的HPAIVA/FPV/Rostock/34(H7N1)[RK/34(H7N1)]鼻腔途径进行攻击,观察发病与死亡情况,分别于攻毒后第3、5、7采集喉头及泄殖腔拭子进行病毒分离、滴定检测排毒情况,同时检测免疫后、攻毒前及攻毒后血清HI抗体、AGP抗体的动态变化。结果,pCAGGoptiHA7一次免疫后,100μg、50μg和10μg剂量均可对免疫鸡形成90%的死亡保护;pCAGGoptiHA7加强免疫后,100μg和50μg剂量可对免疫鸡形成100%完全保护(不发病、不致死、不排毒),而10μg剂量则可对免疫鸡形成100%的保护(不发病、不致死),但不能完全阻止排毒。结果表明,H7亚型DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA7具有良好的免疫保护性,有望成为预防H7亚型高致病力禽流感的物质技术储备。

关键词：禽流感 H7亚型 DNA疫苗保护效力

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H5亚型禽流感DNA疫苗的实验室研究

H5亚型禽流感DNA疫苗的实验室研究

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第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会

将H5亚型禽流感DNA疫苗pCAGGoptiHA5对SPF鸡、商品蛋鸡、鹅和鸭的免疫效力进行了实验室研究。pCAGGoptiHA5以10μg剂量加强免疫3周龄SPF鸡和5周龄商品蛋鸡,加强免疫后2周分别用100LD50的HPAIV A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[Gs/GD/1/96(H5N1)]鼻腔途径进行攻击,pCAGGoptiHA5以100μg剂量加强免疫4周龄本地鹅和金定鸭,加强免疫后2周分别用100LD50的HPAIVA/Duck/ShanghaiNanhui/16/2004(H5N1)[DK/SHNH/1604(H5N1)]鼻腔途径进行攻击,其免疫保护效力通过免疫和攻毒后的HI抗体反应水平、攻毒后的AGP抗体测定、病毒分离与滴定以及对发病率和死亡率的统计等几个方面来综合评价。结果,10μg pCAGGoptiHA5加强免疫可对SPF鸡形成100%完全保护(不发病、不致死、不排毒),10μg剂量pCAGGoptiHA5加强免疫可对商品蛋鸡形成100%的保护(不发病、不致死),100μg pCAGGoptiHA5加强免疫可对鹅和鸭均形成100%的保护(不发病、不致死)。结果表明,pCAGGoptiHA5作为免疫效果良好、成本低廉的DNA疫苗,有望成为预防H5亚型高致病力禽流感的高效、安全新型基因工程疫苗。

关键词：禽流感 H5亚型 DNA疫苗免疫效力

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检测H1～15禽流感病毒亚型的DNA芯片初步研究

检测H1～15禽流感病毒亚型的DNA芯片初步研究

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次学术研讨会

作者：王秀荣于康震刘丽玲乔传玲石锐孙凯孔宪刚陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

对流感病毒14个血凝素亚型的基因芯片检测技术进行了初步研究.通过RT-PCR克隆禽流感病毒血凝素基因片段,获得重组质粒.从重组质粒扩增大约500bp的DNA片段,浓缩后点到氨基化玻璃载体上,制成芯片.待检病毒样品用TrozolLS提取RNA,反转录过... 详细信息

对流感病毒14个血凝素亚型的基因芯片检测技术进行了初步研究.通过RT-PCR克隆禽流感病毒血凝素基因片段,获得重组质粒.从重组质粒扩增大约500bp的DNA片段,浓缩后点到氨基化玻璃载体上,制成芯片.待检病毒样品用TrozolLS提取RNA,反转录过程中用Cy5标记样品cDNAs.将标记样品与芯片杂交,扫描芯片上待检样品与芯片上捕捉探针的结合位点,杂交信号与预期设想一致.结果显示,DNA芯片技术可以提供一种有效的AIV血凝素亚型鉴别诊断方法。

关键词：禽流感病毒基因芯片检测血凝素亚型鉴定 RT-PCR 鉴别诊断

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不同致病力禽流感病毒的细胞生长特性

不同致病力禽流感病毒的细胞生长特性

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次学术研讨会

作者：刘丽玲王秀荣陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

究用2个不同亚型的AIV感染Madin-Darbycaninekidney(MDCK)细胞,通过观察细胞病变、红细胞凝集实验、间接免疫荧光等探讨不同致病力禽流感病毒(AIV)在MDCK细胞上的生长特性;同时取这2株不同浓度(10-2～10-7)AIV在MDCK上培养72h的细胞培... 详细信息

究用2个不同亚型的AIV感染Madin-Darbycaninekidney(MDCK)细胞,通过观察细胞病变、红细胞凝集实验、间接免疫荧光等探讨不同致病力禽流感病毒(AIV)在MDCK细胞上的生长特性;同时取这2株不同浓度(10-2～10-7)AIV在MDCK上培养72h的细胞培养上清0.1mL接种于9～11日龄鸡胚尿囊腔,37℃孵育48h～72h,无菌收获尿囊液,再做红细胞凝集实验.结果显示:这2个亚型AIV感染MDCK细胞后,血凝价(HA)最高为27,表现为较低的红细胞凝集活性,高致病力禽流感病毒(HPAIV)红细胞凝集活性较低致病力禽流感病毒(LPAIV)出现的要早一些;上述2个亚型AIV的MDCK培养上清接种鸡胚48～72h后,HA较高,在25.5～210之间,而且HPAIV-A/Goose/Guangdong/1/96高于LPAIV-A/Turkey/England/N28/73.这2株AIV均可致MDCK细胞发生病变,但病变程度和病变出现的时间不同,A/Goose/Guangdong/1/96[H5N1]感染MDCK细胞后3d可见明显病变,A/Turkey/England/N28/73[H5N2]感染MDCK细胞后4～5d可见明显病变;2个亚型不同浓度(10-2～10-7)AIV的间接免疫荧光结果均为阳性.以上结果表明HPAIV和LPAIV可致MDCK细胞病变,但红细胞凝集活性较低,接种鸡胚后红细胞凝集活性显著提高.

关键词：禽流感病毒 MDCK细胞红细胞凝集活性间接免疫荧光

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镉致鸡脾淋巴细胞凋亡及对p53mRNA表达的影响

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中国环境科学 2004年第4期24卷 456-459页

作者：李金龙徐世文熊永忠李术王秀荣东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室及兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

应用吖啶橙/溴化乙锭荧光染色(AO/EB)法、DNA琼脂糖凝胶电泳及半定量RT-PCR法检测了氯化镉在浓度0～30μmol/L范围内对体外培养的鸡脾脏淋巴细胞凋亡及对p53mRNA表达的影响.结果表明,浓度为0～30μmol/L的镉能引起鸡脾脏淋巴细胞凋亡及... 详细信息

应用吖啶橙/溴化乙锭荧光染色(AO/EB)法、DNA琼脂糖凝胶电泳及半定量RT-PCR法检测了氯化镉在浓度0～30μmol/L范围内对体外培养的鸡脾脏淋巴细胞凋亡及对p53mRNA表达的影响.结果表明,浓度为0～30μmol/L的镉能引起鸡脾脏淋巴细胞凋亡及干扰p53mRNA的表达,低浓度镉引起的细胞凋亡与p53mRNA的表达密切相关,而高浓度的镉能够导致鸡脾脏淋巴细胞坏死.

关键词：镉鸡脾脏淋巴细胞凋亡坏死 p53mRNA

来源：评论

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共表达禽流感病毒HA和NA基因的重组禽痘病毒在SPF鸡的免疫效力试验

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中国农业科学 2004年第4期37卷 605-608页

作者：乔传玲姜永萍于康震田国斌陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/农业部动物流感重点开放实验室及兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/农业部动物流感重点开放实验室及兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

将禽流感病毒A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)毒株的HA和NA2个基因同源重组到禽痘病毒基因组中,获得了能同时高效表达这2种蛋白的重组禽痘病毒(rFPV-HA-NA)。将rFPV-HA-NA经翅膀刺种途径接种8周龄SPF鸡,免疫后4周分别用10LD50的高致病力... 详细信息

将禽流感病毒A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)毒株的HA和NA2个基因同源重组到禽痘病毒基因组中,获得了能同时高效表达这2种蛋白的重组禽痘病毒(rFPV-HA-NA)。将rFPV-HA-NA经翅膀刺种途径接种8周龄SPF鸡,免疫后4周分别用10LD50的高致病力禽流感病毒(HPAIV)A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)和A/FPV/Rostock/34(H7N1)毒株进行攻击。结果重组禽痘病毒免疫鸡群诱导产生了高水平的抗体,能够完全抵抗H5N1和H7N1亚型病毒的致死性攻击;并可有效阻止病毒在泄殖腔的排出。而禽痘病毒免疫组和非免疫对照组在攻毒后全部发病并死亡。

关键词：禽流感病毒 HA NA 重组禽痘病毒免疫效力

来源：评论

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表达H5亚型禽流感病毒HA基因的DNA疫苗免疫保护效力研究

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中国农业科学 2004年第7期37卷 1071-1075页

作者：姜永萍于康震邓国华田国斌乔传玲陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

表达高致病力禽流感病毒分离株A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1) [GD/1/96(H5N1)]HA基因的DNA疫苗质粒pCIHA5具有良好的免疫保护性,为了将其开发并应用于实际,对其免疫保护效力进行了进一步的研究。结果表明,用10、40、70、100和150g pCIHA... 详细信息

表达高致病力禽流感病毒分离株A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1) [GD/1/96(H5N1)]HA基因的DNA疫苗质粒pCIHA5具有良好的免疫保护性,为了将其开发并应用于实际,对其免疫保护效力进行了进一步的研究。结果表明,用10、40、70、100和150g pCIHA5和油苗1次免疫后,其免疫保护率分别为12.5%(1/8)、58.3%(7/12)、72.7%(8/11)、50.0%(6/12)、66.7%(8/12)和100%(12/12),其中70和100g剂量组的病毒分离结果为1/8和2/6;用剂量为5、20、35和50g pCIHA5分别免疫2次,免疫保护率分别为45.5%(5/11)、58.3%(7/12)、58.3%(7/12)和91.7%(11/12),5g的病毒分离结果为1/5,其余组未分离出病毒;pCIHA5免疫后AGP抗体均未检出,油苗免疫后其HI抗体虽高,但AGP抗体也呈阳性。结果显示,加强免疫应为DNA疫苗质粒pCIHA5的安全免疫方式,DNA疫苗质粒pCIHA5虽具有较为稳定的免疫原性和免疫保护性,但有必要进一步提高其在肌肉组织中的有效表达水平和抗体反应水平。

关键词：禽流感病毒血凝素基因 DNA疫苗免疫保护效力

来源：评论

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禽流感病毒N3亚型神经氨酸酶基因的克隆

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中国预防兽医学报 2004年第3期26卷 161-164页

作者：邓国华王秀荣张立春刘振勇乔传玲田国彬于康震陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

本研究应用11日龄SPF鸡胚增殖禽流感病毒标准株A/Duck/Germany/1215(H2N3),用LSTRIAZOL试剂盒提取病毒RNA,应用自行设计的NA基因半特异性引物进行RT＿PCR扩增,得到NA基因的全长DNA片段,克隆到PMD18＿T载体上,并进行鉴定和序列测定。测... 详细信息

本研究应用11日龄SPF鸡胚增殖禽流感病毒标准株A/Duck/Germany/1215(H2N3),用LSTRIAZOL试剂盒提取病毒RNA,应用自行设计的NA基因半特异性引物进行RT＿PCR扩增,得到NA基因的全长DNA片段,克隆到PMD18＿T载体上,并进行鉴定和序列测定。测定结果表明所获得的NA基因DNA片段长1451bp,编码469个氨基酸残基,与其他亚型的NA基因编码的氨基酸长度相一致。根据推导的氨基酸序列进行预测,该蛋白具有6个潜在的糖基化位点和19个半胱氨酸残基。与其他亚型的NA基因相比较发现克隆的NA基因符合神经氨酸的分子结构特征,本研究首次获得N3亚型NA基因全序列。

关键词：禽流感病毒神经氨酸酶 N3 NA基因克隆

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