检索结果-内蒙古大学图书馆

畜牧兽医学报 2024年第8期55卷 3640-3648页

作者：王奇林曹润来王威阳张博刘志杰王晓旭中国农业科学院特产研究所农业农村部经济动物疫病重点实验室长春130112

旨在了解狐狸流产的病因。本研究对河北省某狐狸养殖场流产胎儿进行解剖、病原分离培养、16S rRNA测序、毒力基因检测、血清型检测、药敏试验及致病性试验。结果显示,从狐狸流产胎儿体内分离获得6株肺炎克雷伯菌,检测出12种毒力基因(wab... 详细信息

旨在了解狐狸流产的病因。本研究对河北省某狐狸养殖场流产胎儿进行解剖、病原分离培养、16S rRNA测序、毒力基因检测、血清型检测、药敏试验及致病性试验。结果显示,从狐狸流产胎儿体内分离获得6株肺炎克雷伯菌,检测出12种毒力基因(wabG、fimH、ent、icuA、icuB、mrkA、ycf、ecp、uge、ureA、iroB和ybtA)和3种血清型(K20、K54和K57),其中,K57为本次检测过程的优势血清型;经K-B药敏纸片法分析,发现本次分离获得的肺炎克雷伯菌对氨基糖苷类、头孢菌素类、喹诺酮、多肽类等抗菌药物存在中度或高度敏感,对大环内酯类、四环素类、青霉素类等抗菌药物存在多重耐药;经致病性试验分析,本次分离获得的肺炎克雷伯菌对小鼠具有一定的致病性,半数致死量(LD_(50))为1.2×10^(7)CFU·mL^(-1)。基于此,本研究分离得到的肺炎克雷伯菌具有一定的致病性和耐药性,且携带多种毒力基因,可能是诱发狐狸胎儿流产、死亡的因素之一,为狐狸胎儿流产的防控及诊断提供思路。

关键词：狐狸肺炎克雷伯菌毒力基因分离鉴定

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RAW264.7细胞Rhoa和Ptgs2基因真核表达载体构建及生物信息学分析

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中国畜牧兽医 2021年第7期48卷 2313-2323页

作者：乔连江陈晨张如崔立恒徐丽杨艳玲中国农业科学院特产研究所农业部经济动物疫病重点实验室长春130000

为深入研究Ras同源基因家族成员A(Ras homolog gene family,member A,Rhoa)和环氧合酶2(cyclooxygenase 2,Ptgs2)分子在布鲁菌逃逸机体免疫中发挥的作用,试验对RAW264.7细胞Rhoa和Ptgs2基因进行扩增与克隆,构建真核表达载体并预测生物... 详细信息

为深入研究Ras同源基因家族成员A(Ras homolog gene family,member A,Rhoa)和环氧合酶2(cyclooxygenase 2,Ptgs2)分子在布鲁菌逃逸机体免疫中发挥的作用,试验对RAW264.7细胞Rhoa和Ptgs2基因进行扩增与克隆,构建真核表达载体并预测生物信息学功能。根据GenBank数据库中公布的RAW264.7细胞Rhoa和Ptgs2基因CDS区序列(登录号:JN971019.1和NM_011198)设计引物,提取RAW264.7细胞总RNA并反转录为cDNA,经RT-PCR扩增Rhoa和Ptgs2片段并测序,将纯化的Rhoa和Ptgs2片段分别与线性化pcDNA3.1质粒相连接,对重组质粒进行测序分析和双酶切鉴定后,利用LipofectamineTM2000转染293T细胞,经实时荧光定量PCR和Western blotting验证Rhoa和Ptgs2基因的表达情况,并应用生物信息学软件对Rhoa和Ptgs2基因进行预测分析。结果显示,试验成功构建了RAW264.7细胞Rhoa和Ptgs2基因的真核表达质粒;实时荧光定量PCR检测均在转录水平上表达;Western blotting可见Ptgs2蛋白在70 ku处有一明显条带,而Rhoa蛋白未出现条带。生物信息学预测显示,Rhoa和Ptgs2基因核苷酸序列相似性较高,在不同物种之间较为保守;Rhoa不具有信号肽,为不稳定蛋白,而Ptgs2在第17-18位氨基酸处存在信号肽,为稳定蛋白;Rhoa和Ptgs2蛋白分别有12和53个潜在的磷酸化位点;二级结构、三级结构均以无规则卷曲为主。本研究成功构建了RAW264.7细胞Rhoa和Ptgs2基因的真核表达载体,均在转录水平上表达,并分析了其生物学功能,为后续开展RAW264.7细胞Rhoa和Ptgs2基因在布鲁菌免疫机制方面的研究提供了工具。

关键词： RAW264.7细胞 Rhoa基因 Ptgs2基因真核表达载体生物信息学

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猪源牛病毒性腹泻病毒JLS-01株的分离鉴定及致病性研究

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中国畜牧兽医 2019年第2期46卷 557-564页

作者：张淑琴谭斌刘泽余王超郭利孙娜程世鹏中国农业科学院特产研究所农业部经济动物疫病重点实验室长春130112

为了解猪源牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)的分子特征及致病性,本研究利用RT-PCR从吉林省某猪场出现严重腹泻症状的仔猪病料中检测到BVDV核酸阳性,将处理后的BVDV阳性样品接种于MDBK细胞,分离到1株病毒,命名为BVDV... 详细信息

为了解猪源牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)的分子特征及致病性,本研究利用RT-PCR从吉林省某猪场出现严重腹泻症状的仔猪病料中检测到BVDV核酸阳性,将处理后的BVDV阳性样品接种于MDBK细胞,分离到1株病毒,命名为BVDV JLS-01。通过免疫荧光检测、5′UTR与Npro RT-PCR扩增对其分子进化特征进行分析。结果显示,该分离毒株在MDBK细胞上盲传至8代未出现细胞病变,在免疫荧光试验中呈阳性荧光信号。RT-PCR扩增获得大小分别为280和735bp的5′UTR和Npro片段。BVDV JLS-01株5′UTR与Npro序列遗传进化分析表明,其与LN-1和ZM-95亲缘性最近,与牛源毒株LN-1基因同源性达99.3%,提示该毒株可能来源于牛源毒株。将BVDV JLS-01株F8代细胞培养液人工感染BVDV和猪瘟病毒(CSFV)抗体阴性猪,感染猪未表现出明显的体温升高,但白细胞数量下降,并在感染猪的白细胞提取物中分离到该毒株,表明该毒株具有一定的致病性。该毒株的成功分离对进一步开展BVDV流行病学调查及致病机理等方面的研究具有重要意义。

关键词：猪源牛病毒性腹泻病毒 (BVDV) 进化分析分离鉴定致病性

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半巢式多重PCR法对A组轮状病毒VP7基因的分型

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中国生物制品学杂志 2021年第2期34卷 213-215页

作者：谷长维胡博中国农业科学院特产研究所农业农村部经济动物疫病重点实验室吉林长春130112

目的采用半巢式多重PCR法对A组轮状病毒(group A rotavirus,RVA)VP7基因进行分型。方法根据GenBank中RVA VP7基因5′端保守区设计合成多组基因分型引物,提取11个RVA代表流行毒株病毒的RNA,采用半巢式多重PCR方法进行RVA的VP7基因分型,使... 详细信息

目的采用半巢式多重PCR法对A组轮状病毒(group A rotavirus,RVA)VP7基因进行分型。方法根据GenBank中RVA VP7基因5′端保守区设计合成多组基因分型引物,提取11个RVA代表流行毒株病毒的RNA,采用半巢式多重PCR方法进行RVA的VP7基因分型,使用BLAST在线软件与GenBank上相应VP7核苷酸序列比对。结果经琼脂糖凝胶电泳鉴定,11株RVA的多重PCR产物大小均与预期一致,能正确鉴别具有代表性的流行毒株VP7基因型[G1、G2、KN105(Wa-like G3)、To16-01(equine-like,DS-1-likeG3)、G4、G8、G9及G12];经BLAST在线软件比对,RVA病毒株VP7基因序列与设计的上游引物匹配,并与下游引物互补,引物特异性良好。结论利用设计的引物成功建立的半巢式多重PCR方法能正确识别RVA的VP7基因型。

关键词：轮状病毒 VP7基因型半巢式多重PCR 引物设计

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布鲁氏菌16M BtpA和BtpB真核表达载体的构建及在293T细胞中的表达

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动物医学进展 2021年第7期42卷 12-17页

作者：乔连江杨森张萍杨艳玲中国农业科学院特产研究所农业部经济动物疫病重点实验室吉林长春130122

为了构建布鲁氏菌16M BtpA和BtpB真核表达载体,便于深入研究其在布鲁氏菌逃逸宿主免疫机制中发挥的作用。根据GenBank公布的布鲁氏菌16M BtpA和BtpB序列设计了特异性引物,并提取布鲁氏菌16M总RNA,将其逆转录成cDNA为模板,进行了PCR扩增... 详细信息

为了构建布鲁氏菌16M BtpA和BtpB真核表达载体,便于深入研究其在布鲁氏菌逃逸宿主免疫机制中发挥的作用。根据GenBank公布的布鲁氏菌16M BtpA和BtpB序列设计了特异性引物,并提取布鲁氏菌16M总RNA,将其逆转录成cDNA为模板,进行了PCR扩增,获得BtpA和BtpB目的片段,连接至pMD18-T进行克隆纯化,再与pcDNA3.1载体进行连接,经PCR、酶切和测序分析等方法鉴定后,利用Lipofectamine TM 2000脂质体转染至293T细胞,Western blot检测BtpA和BtpB蛋白的表达。结果显示,PCR扩增出了873 bp的BtpA基因片段和924 bp的BtpB基因片段,依次连至克隆载体pMD18-T和真核表达载体pcDNA3.1,经限制酶Eco RⅠ和XbaⅠ酶切验证正确,测序分析显示与GenBank公布的序列信息完全一致;Western blot检测结果显示,pcDNA3.1-BtpA-HA和pcDNA3.1-BtpB-HA分别在32 ku和35 ku处出现了条带,与预期结果完全相符,说明能在293T细胞中表达。成功构建了pcDNA3.1-BtpA-HA和pcDNA3.1-BtpB-HA真核表达载体,并证实了其能在293T细胞中表达,为后续研究其作用与机制提供了材料。

关键词：布鲁氏菌 BtpA和BtpB基因真核表达 293T细胞

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副流感病毒5型RT-PCR检测方法的建立及初步应用

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中国兽医科学 2022年第9期52卷 1108-1114页

作者：王岩谭斌刘可欣王倩颖杨森张淑琴中国农业科学院特产研究所农业部经济动物疫病重点实验室吉林长春130122

为了精准和快速检测副流感病毒5型(PIV5),本研究下载NCBI中发布的不同物种来源的25株PIV5全基因序列,对比后选择高度保守的NP基因序列区段设计特异性引物,建立了检测PIV5的RT-PCR方法。结果显示,建立的方法具有较强的敏感性和特异性,可... 详细信息

为了精准和快速检测副流感病毒5型(PIV5),本研究下载NCBI中发布的不同物种来源的25株PIV5全基因序列,对比后选择高度保守的NP基因序列区段设计特异性引物,建立了检测PIV5的RT-PCR方法。结果显示,建立的方法具有较强的敏感性和特异性,可扩增出115 bp大小的片段。敏感性结果显示,核酸最低检测量为7.93×10^(5)copies/μL,与牛副流感3型病毒等8种临床常见病毒均无交叉反应。分别采集猪、牛及犬的临床样品共40份进行检测,阳性率为20%,表明建立的RT-PCR方法可用于临床上副流感病毒的检测。

关键词：副流感病毒5型 RT-PCR 临床诊断

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水貂出血性肺炎大肠杆菌毒力基因测定和H基因分型

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中国动物传染病学报 2022年第1期30卷 141-149页

作者：张海威程悦宁王晓旭周玉成乔连江周曼莉程世鹏杨艳玲中国农业科学院特产研究所农业农村部经济动物疫病重点实验室长春130112

为了分离鉴定引起水貂出血性肺炎的大肠杆菌,并对其致病性、血清型和毒力基因进行鉴定。本研究主要通过细菌分离鉴定试验对具有典型肺炎症状的死亡水貂的病原体进行分离,利用16S rRNA对进行细菌鉴定,并通过PCR方法对分离细菌的血清型和... 详细信息

为了分离鉴定引起水貂出血性肺炎的大肠杆菌,并对其致病性、血清型和毒力基因进行鉴定。本研究主要通过细菌分离鉴定试验对具有典型肺炎症状的死亡水貂的病原体进行分离,利用16S rRNA对进行细菌鉴定,并通过PCR方法对分离细菌的血清型和毒力基因进行检测,分析分离菌对动物的致病性。结果显示:28例水貂肺炎病例中分离出8株大肠杆菌,分离率为26.6%;H血清型分析显示:8株大肠杆菌的H基因型分别为H5、H11、H16、H25,其中H11为主要基因型,比率为50%(4/8);共有4种大肠杆菌的主要毒力基因,分别是iutA、papC、irp2、fyuA,其中H11血清型菌株含有iutA、irp2和fyuA 3种主要毒力基因。通过本研究我们明确了引起水貂肺炎的大肠杆菌主要血清型为H11,主要的毒力基因为iutA、papC、irp2和fyuA。

关键词：水貂出血性肺炎大肠杆菌 H基因分型毒力基因检测

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牛分枝杆菌Mtb8.4在枯草芽孢杆菌中的表达与免疫活性分析

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黑龙江畜牧兽医 2018年第9期 136-138,250页

作者：李海涛刘艳环朱言柱谷晨晨闫喜军苗利光中国农业科学院特产研究所长春130112 农业部经济动物疫病重点实验室长春130112

Mtb8.4是从分枝杆菌H37Rv株培养滤液中分离纯化出的一种低分子质量蛋白抗原,具有细胞免疫活性,能诱导Th1型细胞免疫反应,同时能够产生对感染细胞有强烈溶解能力的特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）,分泌高水平的γ干扰素（IFN-γ）。

关键词：牛分枝杆菌免疫活性枯草芽孢杆菌活性分析细胞毒性T淋巴细胞细胞免疫反应 IFN-γ 蛋白抗原

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非洲猪瘟病毒NanoPCR检测方法的建立

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中国兽医科学 2020年第11期50卷 1348-1352页

作者：李智杰孙飞雁刘占悝郭利中国农业科学院特产研究所农业部经济动物疫病重点实验室吉林长春130122

为建立一种快速、灵敏、适用于大批量样品检测非洲猪瘟病毒(ASFV)的方法,本研究使用金纳米颗粒与传统PCR技术相结合,针对ASFV中P72保守序列,建立了一种新的ASFV的NanoPCR分子检测方法,并对其特异性和敏感性进行了研究。结果表明,对于相... 详细信息

为建立一种快速、灵敏、适用于大批量样品检测非洲猪瘟病毒(ASFV)的方法,本研究使用金纳米颗粒与传统PCR技术相结合,针对ASFV中P72保守序列,建立了一种新的ASFV的NanoPCR分子检测方法,并对其特异性和敏感性进行了研究。结果表明,对于相关病毒,包括猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪瘟病毒(CSFV),NanoPCR分析均未发现交叉反应。与常规PCR相比,NanoPCR灵敏度更高,每个反应的检出限为2.86×10~3copies/μL,而常规PCR检出限为2.86×10~4copies/μL。用建立的方法对23份临床样品进行检测,结果 ASFV的阳性检出率为60.86%。综上所述,本研究开发的灵敏、特异性的NanoPCR方法可广泛应用于ASFV感染的临床诊断和现场监测。

关键词：非洲猪瘟病毒金纳米颗粒纳米粒子辅助PCR

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对775份毛皮动物样品检测未发现新型冠状病毒(SARS⁃CoV⁃2)核酸阳性

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病毒学报 2020年第4期36卷 692-693页

作者：白雪胡博张海玲鲁荣光刘昊中国农业科学院特产研究所农业部经济动物疫病重点实验室长春130112 佛山科学技术学院佛山528000

目前,2019新型冠状病毒(SARS-CoV-2)在我国各地暴发和流行,但其主要来源尚不清楚。曾有报道称该病毒来源于野生动物,如蝙蝠。而有关SARS-CoV-2在我国北方地区人工养殖的水貂、狐狸和貉等毛皮动物中的溯源性研究尚未见报道。本研究收集20... 详细信息

目前,2019新型冠状病毒(SARS-CoV-2)在我国各地暴发和流行,但其主要来源尚不清楚。曾有报道称该病毒来源于野生动物,如蝙蝠。而有关SARS-CoV-2在我国北方地区人工养殖的水貂、狐狸和貉等毛皮动物中的溯源性研究尚未见报道。本研究收集2016~2019年吉林、黑龙江、辽宁、河北和山东5个省份14个地区的不明原因死亡的水貂、狐狸和貉的625份组织样品,以及2019年8~12月在吉林省采集的水貂、狐和貉的150份粪便样品,通过WHO推荐的Real-time RT-PCR检测方法对上述组织及粪便样品中SARS-CoV-2进行检测。结果显示,上述775份样品中SARS-CoV-2核酸检测结果均为阴性。

关键词：毛皮动物 2019新型冠状病毒(SARS-CoV-2) Real-time RT-PCR

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