检索结果-内蒙古大学图书馆

中国家禽 2012年第1期34卷 15-18页

作者：李久宽王永强康忠惠王琦高玉龙高宏雷祁小乐秦立廷林欢王笑梅许修宏东北农业大学黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

本试验利用鸡传染性法氏囊病超强毒Gx及其致弱疫苗毒Gt为对象,研究超强毒与弱毒株在鸡体主要免疫器官内的复制情况,以探讨两类毒株表现不同生物特性的原因。分别利用鸡胚半数致死量和鸡胚成纤维细胞半数感染量对超强毒Gx和疫苗株Gt进行... 详细信息

本试验利用鸡传染性法氏囊病超强毒Gx及其致弱疫苗毒Gt为对象,研究超强毒与弱毒株在鸡体主要免疫器官内的复制情况,以探讨两类毒株表现不同生物特性的原因。分别利用鸡胚半数致死量和鸡胚成纤维细胞半数感染量对超强毒Gx和疫苗株Gt进行病毒滴度的测定;再利用荧光定量RT-PCR对两类毒株进行病毒量的校准。以相同量的病毒对2周龄SPF鸡进行攻毒。攻毒试验表明超强毒Gx能造成47.5%的死亡,法氏囊、脾脏、胸腺等免疫器官均严重损伤;而疫苗毒Gt无致死,且未能造成任何病理可见的损伤。病毒的体内复制情况表明超强毒相对于疫苗毒复制更为迅速,病毒载量更高。

关键词：传染性法氏囊病病毒超强毒疫苗毒体内复制

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鸡传染性喉气管炎病毒TaqMan real-time PCR检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2012年第8期34卷 642-646页

作者：赵妍孔聪聪张晓敏崔红玉石星明赵晓岩薛美胡顺磊闫帅牛秀杰李巧玲王玫王云峰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 云南农业大学预防兽医系云南昆明650201

为建立鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)TaqMan Real-time PCR检测方法,本研究根据GenBank中登录的ILTV gB基因序列设计了2对引物与一条特异性TaqMan探针,通过对反应体系和反应条件的优化,特异性、敏感性以及重复性试验,证明该方法在核酸含量... 详细信息

为建立鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)TaqMan Real-time PCR检测方法,本研究根据GenBank中登录的ILTV gB基因序列设计了2对引物与一条特异性TaqMan探针,通过对反应体系和反应条件的优化,特异性、敏感性以及重复性试验,证明该方法在核酸含量108拷贝/μL～101拷贝/μL范围内具有良好的线性关系;能够检测初始模板中10-3EID50的病毒核酸及16拷贝的标准品;与其它相关的鸡源病毒均无交叉反应,并且批内、批间变异系数均小于2%,具有良好的重复性。该检测方法的建立为ILTV的临床检测和定量分析提供了一种快速、准确的技术手段。

关键词：鸡传染性喉气管炎病毒 gB基因 TaqMan Real-time PCR

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Vero E6细胞中B23.1基因的扩增及其原核表达

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中国畜牧兽医 2012年第3期39卷 33-36页

作者：吕茂杰陈建飞时洪艳冯力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 瑞普(保定)生物药业有限公司河北保定071000

应用RT-PCR技术,利用含有酶切位点的上、下游引物扩增得到Vero E6细胞中编码B23.1蛋白的基因片段,并进行序列测定及分析,结果表明,B23.1基因含有一个长901bp的开放阅读框(ORF),未发现碱基的插入和缺失。将其进行BamHⅠ和XhoⅠ双酶切,而... 详细信息

应用RT-PCR技术,利用含有酶切位点的上、下游引物扩增得到Vero E6细胞中编码B23.1蛋白的基因片段,并进行序列测定及分析,结果表明,B23.1基因含有一个长901bp的开放阅读框(ORF),未发现碱基的插入和缺失。将其进行BamHⅠ和XhoⅠ双酶切,而后定向克隆到经相同双酶切的pGEX-6p-1载体中,构建的重组质粒命名为pGEX-6p-B23.1;将该质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,在IPTG诱导下进行表达;SDS-PAGE结果表明,表达出与预期大小相符的约68ku的重组蛋白,重组蛋白主要以包涵体形式存在;Western blotting分析结果表明,表达的重组蛋白与B23蛋白单克隆抗体有很好的反应活性。

关键词： VeroE6细胞 B23.1基因重组蛋白反应活性

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猪捷申病毒TaqMan实时定量RT-PCR方法的建立

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中国预防兽医学报 2012年第3期34卷 206-210页

作者：胡峰赵亚荣吕超超王贵华崔玉东王春仁崔尚金黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 大北农动物医学研究中心北京100097

为建立猪捷申病毒(PTV)的早期检测及定量分析方法,本研究基于PTV 11个血清型基因组5'端非编码区保守序列,设计引物和TaqMan探针,建立了检测PTV的TaqMan实时定量RT-PCR方法。应用该方法对PTV、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合症病毒、... 详细信息

为建立猪捷申病毒(PTV)的早期检测及定量分析方法,本研究基于PTV 11个血清型基因组5'端非编码区保守序列,设计引物和TaqMan探针,建立了检测PTV的TaqMan实时定量RT-PCR方法。应用该方法对PTV、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合症病毒、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病毒以及猪瘟病毒进行特异性试验,结果除PTV为阳性外其它均为阴性;针对PTV最低可检测到10个拷贝;批内、批间重复试验的变异系数均小于3%。应用建立的方法与病毒分离方法分别对91份临床样品进行检测,检出率分别为79.12%和57.14%,两者的符合率是78.02%。经临床应用表明,该实时定量RT-PCR方法可为PTV的早期诊断及定量分析提供技术手段。

关键词：猪捷申病毒实时定量RT-PCR TaqMan

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兔抗猪CD163蛋白多克隆抗体制备及鉴定

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中国兽医学报 2012年第11期32卷 1624-1628页

作者：郭娟娟彭金美安同庆冷超良吴江宫大庆陈家锃杨永倩田志军张德礼西北农林科技大学、动物医学院病毒免疫与生物信息研究室、生物信息研究中心、分子病毒免疫与肿瘤系统生物学研究组陕西杨凌712100 中国农业科学院、哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室、猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为制备兔抗猪CD163多克隆抗体,采用RT-PCR方法从猪PAM RNA中扩增CD163胞质外区部分基因SRCR4-5,克隆至pGEX-6p-1原核表达载体,在IPTG诱导下获得约50 000以包涵体形式表达的重组蛋白。WesternBlotting分析表明,表达产物能够被GST单抗所... 详细信息

为制备兔抗猪CD163多克隆抗体,采用RT-PCR方法从猪PAM RNA中扩增CD163胞质外区部分基因SRCR4-5,克隆至pGEX-6p-1原核表达载体,在IPTG诱导下获得约50 000以包涵体形式表达的重组蛋白。WesternBlotting分析表明,表达产物能够被GST单抗所识别。用该重组蛋白免疫兔制备多抗血清,经间接ELISA检测,多抗血清效价可达105,流式检测发现可与Marc-145和PAM上的天然CD163分子相互作用。抗体阻断试验证明制备的多抗血清可以部分阻断PRRSV感染。本试验为进一步研究PRRSV与受体-CD163相互作用机制打下了基础。

关键词： CD163 抗体鉴定

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猪圆环病毒疫苗的研究进展

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兽医导刊 2012年第2期 55-56页

作者：刘长明陆月华郭龙军危艳武中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

猪圆环病毒2型（PCV2）主要引起以患猪全身性淋巴结肿大为特征的多系统功能衰竭性疾病，临床上表现为断奶仔猪多系统衰竭综合征、猪皮炎与肾炎综合征、猪呼吸道疾病综合征、母猪繁殖障碍、坏死性淋巴结炎、肉芽肿性肠炎和渗出性表皮炎... 详细信息

猪圆环病毒2型（PCV2）主要引起以患猪全身性淋巴结肿大为特征的多系统功能衰竭性疾病，临床上表现为断奶仔猪多系统衰竭综合征、猪皮炎与肾炎综合征、猪呼吸道疾病综合征、母猪繁殖障碍、坏死性淋巴结炎、肉芽肿性肠炎和渗出性表皮炎等，统称为猪圆环病毒病。

关键词：猪圆环病毒2型断奶仔猪多系统衰竭综合征病毒疫苗猪呼吸道疾病综合征淋巴结肿大母猪繁殖障碍猪圆环病毒病猪皮炎

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猪圆环病毒(PCV)2a/2b亚型毒株病毒灭活疫苗及其重组Cap蛋白亚单位疫苗的交互免疫试验

猪圆环病毒(PCV)2a/2b亚型毒株病毒灭活疫苗及其重组Cap蛋白亚单...

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会

作者：付玉洁郭龙军黄立平危艳武唐青海吴洪丽刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨 150001

为评价猪圆环病毒(PcV)2a／2b两种基因型毒株及其重组cap蛋白(rCap)之间的交互免疫效果，本研究采用PCV2a-LG和PCv2b-YJ株制备了2种病毒灭活疫苗，及其重组杆状病毒表达的2种C印蛋白(PCv2a-rap和PCv2b-rap)亚单位疫苗。选用8周龄BALB／c... 详细信息

为评价猪圆环病毒(PcV)2a／2b两种基因型毒株及其重组cap蛋白(rCap)之间的交互免疫效果，本研究采用PCV2a-LG和PCv2b-YJ株制备了2种病毒灭活疫苗，及其重组杆状病毒表达的2种C印蛋白(PCv2a-rap和PCv2b-rap)亚单位疫苗。选用8周龄BALB／c鼠165只，随机分成11组，每组15只，用上述4种疫苗各免疫2组，以Pcv2a或Pcv2b毒株攻毒。攻毒后，所有鼠均未见肉眼可见的临床症状和病理变化。采用IPMA法检测抗体，4种疫苗于免疫第3周抗体转阳，第5周抗体效价达到1：200～1：800倍，其中Pcv2a-rCap免疫组抗体效价最高。2种灭活苗和Pcv2a-rCap免疫组攻击同型或异型毒株均可获得完全保护。以Pcv2a和Pcv2b各为指示毒对病毒抗血清和r(=印蛋白抗血清进行交叉中和试验，同型毒株与同型血清的中和抗体效价均高于异型毒株。病理观察显示，免疫鼠均未见明显病理变化，攻毒对照鼠肺脏出现一定程度的病理损伤。本研究表明，病毒灭活疫苗及其rap亚单位疫苗对PcV2a和PcV2b可提供交叉保护。

关键词：猪圆环病毒病毒灭活疫苗重组Cap蛋白交互免疫

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抗猪输血传播病毒1型(PTTV1)Cap蛋白单克隆抗体制备及鉴定

抗猪输血传播病毒1型(PTTV1)Cap蛋白单克隆抗体制备及鉴定

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会

作者：张龙刘建波黄立平郭龙军危艳武唐青海吴洪丽刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨 150001

为表达猪输血传播病毒1型(PTTV1)cap蛋白用于单克隆抗体(MAb)的制备，以含PTTV1全长基因组的质粒(pMD18-TTV1-SY13)为模板，用高保真PCR法扩增PTTV1-ORF1(1501～2475 nt)编码的Cap蛋白C末端截短序列(324 aa)，引物两端设计了salI和Not ... 详细信息

为表达猪输血传播病毒1型(PTTV1)cap蛋白用于单克隆抗体(MAb)的制备，以含PTTV1全长基因组的质粒(pMD18-TTV1-SY13)为模板，用高保真PCR法扩增PTTV1-ORF1(1501～2475 nt)编码的Cap蛋白C末端截短序列(324 aa)，引物两端设计了salI和Not I酶切位点，将PcR产物克隆到pGEx-6P-1载体，构建的重组质粒命名为pGEx-TTV1-ORF1-c1。将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株后进行诱导表达，获得了含GST标签的PTTv1-rCap重组融合蛋白，经SDS-AGE电泳分析和western blOt鉴定，目的蛋白获得了高效表达，分子量约为64．0kDa，以包涵体形式存在。用纯化的重组蛋白免疫Balb／c小鼠，采用淋巴细胞杂交瘤技术获得了8株稳定分泌抗PTTv1rCap蛋白的杂交瘤细胞株，依次命名为1H4、1E9、1E11、4G12、5c5、788、8c2、8G2，MAb亚类鉴定均为IgG1，轻链为K型;MAb培养上清效价为400～3200倍，腹水为4．0×105～6．4×1 06倍;有7株单抗与PTTVl=Cap蛋白产生特异性反应，另1株MAb(1E11)呈阴性，可能针对构象表位。为验证8株单抗与真核表达的cap蛋白的免疫反应性，将全长与截短的PTTV1-0RF-基因片段克隆到pcDNA3-1/V5-His TOPO表达载体，转染293T细胞进行蛋白表达，采用免疫过氧化物酶单层细胞染色法(IPMA)检测表明，这8株MAb均能够与表达的c印蛋白产生特异性反应。本研究表达的PTTV1-Cap蛋白及制备的MAb，为该病毒诊断方法的建立及抗原表位的鉴定奠定了基础。

关键词：猪输血传播病毒重组cap蛋白单克隆抗体抗性鉴定

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猪瘟病毒E2蛋白和猪RACK1相互作用的鉴定

猪瘟病毒E2蛋白和猪RACK1相互作用的鉴定

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会

作者：凌理军仇华吉李素董泓贺番冯烁廖亚金申梁孙元翁长江中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨 150001

为筛选和鉴定与猪瘟病毒(csFv)E2蛋白相互作用的猪宿主蛋白，采用酵母双杂交方法筛选猪肺泡巨噬细胞表达文库得到与猪瘟病毒csFV E2蛋白相互作用的宿主细胞RAcKl蛋白，经共转化试验和GsTpull-down试验进一步证实两者可以特异性结合，且... 详细信息

为筛选和鉴定与猪瘟病毒(csFv)E2蛋白相互作用的猪宿主蛋白，采用酵母双杂交方法筛选猪肺泡巨噬细胞表达文库得到与猪瘟病毒csFV E2蛋白相互作用的宿主细胞RAcKl蛋白，经共转化试验和GsTpull-down试验进一步证实两者可以特异性结合，且共聚焦试验表明两者共定位于细胞的细胞浆。本研究证实E2蛋白与宿主细胞RACK1蛋白存在相互作用，RACK1在CSFV感染过程中所发挥的功能有待进一步研究。

关键词：猪瘟病毒E2蛋白猪宿主蛋白酵母双杂交猪巨噬细胞表达文库

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稳定表达猪瘟病毒Npro蛋白PK-1 5细胞系的建立

稳定表达猪瘟病毒Npro蛋白PK-1 5细胞系的建立

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会

作者：凌理军李素李永锋杨硕廖亚金孙元仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨 150001

为构建稳定表达猪瘟病毒(CSFV)Npro蛋白的PK-15细胞系，本研究采用PCR方法，以pOKl2／F1-9质粒为模板扩增Npro基因，并引入Flag标签序列，将其连到plRES2-EGFP载体，构建重组质粒pGFP-Npro;通过脂质体将***转染至PK-15细胞中，利用G418... 详细信息

为构建稳定表达猪瘟病毒(CSFV)Npro蛋白的PK-15细胞系，本研究采用PCR方法，以pOKl2／F1-9质粒为模板扩增Npro基因，并引入Flag标签序列，将其连到plRES2-EGFP载体，构建重组质粒pGFP-Npro;通过脂质体将***转染至PK-15细胞中，利用G418加压筛选、纯化得到稳定表达Npro蛋白的细胞系;连续传代30代后，进行RT—PCR、Western blot和激光共聚焦试验，结果表明获得了稳定表达CSFV Npro蛋白的PK—15细胞系。该细胞系可应用于免疫共沉淀与N印蛋白相互作用的宿主蛋白，为进一步研究CSFV N印的功能奠定了基础。

关键词：猪瘟病毒细胞系蛋白表达基因定位

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