检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽药杂志 2018年第8期52卷 7-11页

作者：朱庆贺张鹏宇崔红玉王观悦王爽陈曦刘力威史同瑞黑龙江省兽医科学研究所黑龙江齐齐哈尔161006 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨150000

以4型禽腺病毒(FAdV-4)的DNA为模板,扩增其六邻体(hexon)部分基因并进行重组表达,以重组hexon蛋白为包被抗原,优化ELISA检测条件,建立了FAdV-4的ELISA抗体检测方法。该方法对FAdV-4阳性血清检测为阳性,对于其他鸡常见病毒,如禽流感病毒5... 详细信息

以4型禽腺病毒(FAdV-4)的DNA为模板,扩增其六邻体(hexon)部分基因并进行重组表达,以重组hexon蛋白为包被抗原,优化ELISA检测条件,建立了FAdV-4的ELISA抗体检测方法。该方法对FAdV-4阳性血清检测为阳性,对于其他鸡常见病毒,如禽流感病毒5、7、9型,新城疫病毒以及鸡传染性支气管炎病毒阳性血清检测均为阴性;与PCR方法的阳性符合率为83.3%。试验表明,建立的以重组hexon蛋白为包被抗原检测FAdV-4血清抗体的ELISA方法可以用于检测FAdV-4的感染及相关流行病学调查。

关键词： 4型禽腺病毒 hexon蛋白原核表达间接ELISA

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具有免疫反应活性的猪源重组抗体的原核表达及鉴定

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中国预防兽医学报 2017年第3期39卷 220-224页

作者：沈旦枫王睿郭佃磊霍琳琳刘永刚郭龙军王玉娥李曦中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150069

为制备与猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)具有反应活性的猪源化原核表达抗体(Pr Ab),本实验通过流式细胞技术,以PRRSV GP5蛋白多肽及抗猪Ig G抗体,筛选出能够与PRRSV抗原表位结合的阳性B淋巴细胞,利用RT-PCR从筛选得到的B细胞的mRNA... 详细信息

为制备与猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)具有反应活性的猪源化原核表达抗体(Pr Ab),本实验通过流式细胞技术,以PRRSV GP5蛋白多肽及抗猪Ig G抗体,筛选出能够与PRRSV抗原表位结合的阳性B淋巴细胞,利用RT-PCR从筛选得到的B细胞的mRNA中扩增出编码抗体重链可变区(VH)基因序列和轻链可变区(VL)基因序列,将扩增的可变区基因序列分别与本实验室前期克隆的猪源抗体轻链恒定区(CL)和重链恒定区(CH)基因序列连接后,以Linker序列将轻链和重链全长基因序列相连,构建全长的猪源抗体编码基因(H-linker-L)。将该基因克隆于原核表达载体p ET-28a中进行原核表达及纯化。Western blot鉴定结果显示,表达的重组蛋白能够被抗猪IgG抗体所识别,表明表达的重组蛋白为PrAb;经PRRSV包被的ELISA鉴定,PrAb与PRRSV弱毒株CH1R和强毒株HuN4呈阳性反应,表明所制备的PrAb为PRRSV特异性抗体。本实验为进一步制备诊断PRRS的猪源化重组抗体奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒原核表达猪源化重组抗体

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牛传染性鼻气管炎病毒VP8蛋白表位鉴定

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中国预防兽医学报 2017年第3期39卷 225-228页

作者：杨婷周跃辉朱远茂宋文凤马磊薛飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150069

为鉴定牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的VP8蛋白抗原表位,本研究采用超速离心纯化的IBRV免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术获得了2株针对IBRV的VP8蛋白的单克隆抗体(MAb),命名为1F5和3C2。MAb1F5和3C2的腹水效价均大于1:4×10~5,亚型均为I... 详细信息

为鉴定牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的VP8蛋白抗原表位,本研究采用超速离心纯化的IBRV免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术获得了2株针对IBRV的VP8蛋白的单克隆抗体(MAb),命名为1F5和3C2。MAb1F5和3C2的腹水效价均大于1:4×10~5,亚型均为IgG1/κ。间接免疫荧光试验表明,2株MAb与IBRV呈特异性反应。利用肽扫描技术对MAb进行抗原表位鉴定,结果表明MAb3C2的抗原表位为^(138)PHRSLLERTA^(147),MAb1F5的抗原表位为^(183)GGGQEPG^(189),2株MAb针对的抗原表位在不同的IBRV分离株中高度保守。本研究为VP8蛋白的结构与功能的进一步分析及IBRV的检测奠定了基础。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒 VP8蛋白单克隆抗体抗原表位

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NPM1 K263 SUMO化位点在PEDV N蛋白与NPM1共定位中的作用

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中国预防兽医学报 2017年第11期39卷 940-942页

作者：季朝阳石达陈建飞王潇博时洪艳张鑫冯力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪消化道传染病创新团队黑龙江哈尔滨150069

为阐明细胞核仁蛋白NPM1与猪流行性腹泻病毒(PEDV)核衣壳蛋白(N蛋白)共定位的关键位点。本实验通过设计突变引物,利用重叠延伸PCR方法对NPM1氨基酸位点T199、K230和K263进行定点突变,分别将其克隆至真核表达载体pDsRed2-N1中,获得重组质... 详细信息

为阐明细胞核仁蛋白NPM1与猪流行性腹泻病毒(PEDV)核衣壳蛋白(N蛋白)共定位的关键位点。本实验通过设计突变引物,利用重叠延伸PCR方法对NPM1氨基酸位点T199、K230和K263进行定点突变,分别将其克隆至真核表达载体pDsRed2-N1中,获得重组质粒pDsRed2-NPM1(T199A)、pDsRed2-NPM1(K230R)、pDsRed2-NPM1(K263R)。随后分别将pDsRed2-NPM1(WT)、pDsRed2-NPM1(T199A)、pDsRed2-NPM1(K230R)、pDsRed2-NPM1(K263R)与重组质粒pAcGFP-N共转染VeroE6细胞。共聚焦结果显示NPM1(T199A)、NPM1(K230R)、野生型NPM1均与N蛋白共定位于细胞的核仁中。虽然NPM1(K263R)与N蛋白具有共定位现象,但两者共定位于细胞核中。该实验结果为进一步研究核仁蛋白NPM1参与PEDV复制的分子机制奠定了基础。

关键词：猪流行性腹泻病毒核衣壳蛋白核仁蛋白NPM1 定点突变

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猪氨基肽酶N不是猪德尔塔冠状病毒入侵宿主细胞的受体

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中国预防兽医学报 2017年第9期39卷 701-706页

作者：卢曼曼张家林王洪峰时洪艳张鑫袁婧石达刘建波陈建飞冯力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪消化道传染病创新团队黑龙江哈尔滨150069 哈尔滨维科生物技术开发公司黑龙江哈尔滨150069

猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)是一种新出现的冠状病毒,能够引起猪只发生呕吐和水样腹泻,临床症状与猪流行性腹泻(PED)和猪传染性胃肠炎(TGE)相似。相关研究表明猪氨基肽酶N(pAPN)是PED病毒(PEDV)和TGE病毒(TGEV)入侵宿主细胞的功能性受体。... 详细信息

猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)是一种新出现的冠状病毒,能够引起猪只发生呕吐和水样腹泻,临床症状与猪流行性腹泻(PED)和猪传染性胃肠炎(TGE)相似。相关研究表明猪氨基肽酶N(pAPN)是PED病毒(PEDV)和TGE病毒(TGEV)入侵宿主细胞的功能性受体。为研究pAPN是否是PDCoV入侵宿主细胞的受体,本研究以TGEV为指示病毒,通过BHK-pAPN细胞感染试验、pAPNRNA干扰试验、ST细胞过表达pAPN试验、可溶性pAPN阻断试验,发现BHK-pAPN细胞是PDCoV非易感细胞,在易感细胞ST上沉默和过表达pAPN对PDCoV的增殖并无影响,可溶性pAPN不能阻止PDCoV感染ST细胞。这些研究结果表明pAPN不是PDCoV入侵宿主细胞的受体,而且对PDCoV的增殖无影响。

关键词：猪德尔塔冠状病毒猪氨基肽酶N 受体

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新城疫弱毒活疫苗中FAdV-4的分离鉴定及分子特征

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微生物学通报 2017年第12期44卷 2773-2781页

作者：刘亮亮王娟李慧昕刘胜旺马得莹东北农业大学动物科学技术学院黑龙江哈尔滨150030 东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

【目的】当前我国鸡群禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAd V)感染严重,该病毒既可水平传播也可经卵垂直传播,因此鸡胚源禽用弱毒活疫苗是否存在FAd V污染,进而造成疫病的传播尚不清楚。检测我国商品化新城疫La Sota弱毒活疫苗中是否存在FAd ... 详细信息

【目的】当前我国鸡群禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAd V)感染严重,该病毒既可水平传播也可经卵垂直传播,因此鸡胚源禽用弱毒活疫苗是否存在FAd V污染,进而造成疫病的传播尚不清楚。检测我国商品化新城疫La Sota弱毒活疫苗中是否存在FAd V污染,探讨国内鸡群中FAd V感染和流行的可能原因。【方法】应用本实验室建立的FAd V PCR检测方法检测商品化新城疫La Sota弱毒活疫苗,并进行FAd V分离鉴定。经序列比对和进化分析,鉴定分离毒株所属种、血清型及进化特征。【结果】分离到一株禽腺病毒,命名为L160962。基因分析表明,分离株L160962的52k和hexon基因片段序列与C种内的血清4型毒株相似性最高,其中与中国毒株HN/151025和CH/HNJZ/2015的相似性为99.9%-100%,与奥地利毒株KR5的相似性为99.3%,但与A、B、D和E种FAd V的相似性分别为79.0%-83.3%。系统进化分析表明,L160962与C种内的血清4型禽腺病毒在同一分支,核苷酸相似性在99.9%以上,应划分为血清4型FAd V。基于分离株L160962的hexon基因构建的系统进化树的拓扑结构,分离株L160962与中国毒株亲缘关系最近,提示疫苗源分离株L160962与我国当前流行毒株相近。【结论】我国商品化的新城疫La Sota弱毒活疫苗中存在血清4型FAd V污染,这可能是我国鸡群中FAd V大面积感染和流行的原因之一。

关键词：禽腺病毒 La Sota疫苗分离鉴定

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鸡HspHsp90α可溶性表达及与传染性法氏囊病病毒衣壳蛋白亲和力的鉴定

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中国家禽 2017年第5期39卷 17-21页

作者：高祥李辉陈玉明刘爱晶吴甜甜王永强高立高玉龙李凯刘长军崔红玉张艳萍潘青王笑梅祁小乐中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 江苏省动物重要疫病与人畜共患病协同创新中心江苏扬州225009

热激蛋白90α(Heat shock protein 90,Hsp90α)在传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease,IBDV)的致病过程中发挥重要作用。蛋白互作及其亲和力均可能导致不同的信号转导和生物效应,鸡源Hsp90α与IBDV衣壳蛋白VP2的互作已经被证... 详细信息

热激蛋白90α(Heat shock protein 90,Hsp90α)在传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease,IBDV)的致病过程中发挥重要作用。蛋白互作及其亲和力均可能导致不同的信号转导和生物效应,鸡源Hsp90α与IBDV衣壳蛋白VP2的互作已经被证明,但两者之间的亲和力尚未被鉴定。研究通过表达和纯化鸡的Hsp90α和IBDV超强毒株的VP2蛋白,运用表面等离子共振(Surface plasmon resonance,SPR)技术,揭示Hsp90α和IBDV VP2蛋白两者互作的动态过程,并确定其亲和力((KD)为7.105×10^(-8)M),为强相互作用。研究结果对进一步揭示IBDV的致病机制有重要意义。

关键词： Hsp90α 传染性法氏囊病病毒衣壳蛋白表面等离子共振亲和力

来源：评论

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利用SPF鸡胚分离传染性法氏囊病病毒超强毒的研究

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中国家禽 2017年第17期39卷 19-23页

作者：吴甜甜李辉刘爱晶 ALTAF Hussain 范林进王永强高立高玉龙李凯刘长军崔红玉张艳萍潘青王笑梅祁小乐中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150069 江苏高校动物重要疫病与人畜共患病协同创新中心江苏扬州225009

传染性法氏囊病病毒(IBDV)超强毒(vvIBDV)不适应鸡胚成纤维细胞培养,其分离鉴定通常采用直接接种无特定病原体(SPF)鸡的方法。然而该方法需要特殊设备,成本较高,较繁琐。研究旨在探讨SPF鸡胚作为IBDV分离工具的可行性,将IBDV阳性病料混... 详细信息

传染性法氏囊病病毒(IBDV)超强毒(vvIBDV)不适应鸡胚成纤维细胞培养,其分离鉴定通常采用直接接种无特定病原体(SPF)鸡的方法。然而该方法需要特殊设备,成本较高,较繁琐。研究旨在探讨SPF鸡胚作为IBDV分离工具的可行性,将IBDV阳性病料混悬液通过绒毛尿囊膜途径接种9~11日胚龄SPF鸡胚,并盲传三代成功分离获得vvIBDV(IBD16GX01株)。分离毒各代次序列一致,且与SPF鸡分离氨基酸同源性100%。结果表明,SPF鸡胚可用于vvIBDV的分离鉴定,为vvIBDV分子流行病学研究奠定基础。

关键词：传染性法氏囊病病毒分离鸡胚

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三种传染性法氏囊病疫苗对文昌鸡免疫效果的研究

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中国家禽 2017年第18期39卷 78-80页

作者：李辉吴甜甜曹宗喜李凯高立刘爱晶 Altaf Hussain 范林进王永强高玉龙刘长军崔红玉张艳萍潘青王笑梅林哲敏祁小乐中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150069 海南省农业科学院畜牧兽医研究所海南海口571100 江苏高校动物重要疫病与人畜共患病协同创新中心江苏扬州225009

传染性法氏囊病(Infectious bursal disease,IBD)是危害文昌鸡的重要传染病之一。为了筛选最适合文昌鸡的IBD防控措施,试验选用新型重组疫苗(rGt HLJVP2)和商品化的弱毒疫苗、中毒力疫苗,评价其免疫效果。结果显示,重组疫苗(rGt HLJVP2... 详细信息

传染性法氏囊病(Infectious bursal disease,IBD)是危害文昌鸡的重要传染病之一。为了筛选最适合文昌鸡的IBD防控措施,试验选用新型重组疫苗(rGt HLJVP2)和商品化的弱毒疫苗、中毒力疫苗,评价其免疫效果。结果显示,重组疫苗(rGt HLJVP2)组表现更高的抗体滴度,且致死性攻毒后保护率为100%,为文昌鸡的疫病科学防控提供了新思路。

关键词：传染性法氏囊病(IBD) 重组疫苗文昌鸡免疫

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鸡马立克氏病强弱病毒株PCR鉴别检测方法在诊断中的应用评价

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中国预防兽医学报 2016年第7期38卷 567-571页

作者：吕红超张艳萍孙国荣高玉龙李志杰郑惠文包珂岩王笑梅刘长军中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为在现地准确诊断鸡马立克氏病(MD)以及区分发病鸡中MD病毒(MDV)野毒株和疫苗株的感染,本研究选择MDV血清1型(MDV-1)基因组中两个特有的、强弱毒株存在序列差异的基因片段132 bp重复序列(132 bpr)和meq基因作为靶基因,建立了MDV的PCR检... 详细信息

为在现地准确诊断鸡马立克氏病(MD)以及区分发病鸡中MD病毒(MDV)野毒株和疫苗株的感染,本研究选择MDV血清1型(MDV-1)基因组中两个特有的、强弱毒株存在序列差异的基因片段132 bp重复序列(132 bpr)和meq基因作为靶基因,建立了MDV的PCR检测方法。特异性试验和敏感性试验表明该PCR方法特异性强,敏感性高,132 bpr和meq基因两对引物对阳性重组质粒的检测下限分别为1.0×103拷贝/μL和1.0×102拷贝/μL。通过对近10年的1057份临床样品的检测对该PCR方法进行应用评价。结果表明病毒分离与PCR检测结果的符合率为100%,PCR检测结果可信度高;琼脂扩散试验(AGP)对MDV PCR检测阳性样品的检测阳性率为86.25%,PCR法检测敏感性明显高于AGP法。此外,对分离病毒株meq基因序列分析结果表明,所有分离株均具有中国野毒株特征,即突变主要出现于其编码蛋白的6个氨基酸中(K77E、D80 Y、V115 A、T139 A、P176 R或P217A),表明该PCR检测方法具有良好的特异性。本研究建立的MDV PCR检测方法特异性强、灵敏度高,具有良好的实用性,可以用于MD的临床诊断。

关键词：鸡马立克氏病 PCR检测 meq基因 132 bp重复序列临床诊断

来源：评论

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