检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2009年第10期31卷 766-769页

作者：张云郭东春耿宏伟王钰魏萍东北农业大学动物医学院博士后流动站黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江省农科院植物脱毒苗木研究所黑龙江哈尔滨150086

为确定番鸭呼肠孤病毒(DRV)p10.8蛋白的生物学功能,本研究采用RT-PCR方法扩增DRVS14株p10.8编码基因,将其克隆到真核表达载体中,构建了重组表达质粒pcDNA-p10.8;通过转染鸭胚成纤维细胞(DEF),首次对p10.8蛋白的凋亡功能进行了研究。细... 详细信息

为确定番鸭呼肠孤病毒(DRV)p10.8蛋白的生物学功能,本研究采用RT-PCR方法扩增DRVS14株p10.8编码基因,将其克隆到真核表达载体中,构建了重组表达质粒pcDNA-p10.8;通过转染鸭胚成纤维细胞(DEF),首次对p10.8蛋白的凋亡功能进行了研究。细胞转染48h后,Hoechest、DNALadder和TUNEL法的细胞凋亡检测结果显示:光镜下可见细胞形态学上出现的细胞皱缩,Hoechest染色后可见细胞核固缩,染色质凝固成团块状;DNALadder法可检测到凋亡细胞DNA样品呈梯形条带;TUNEL法可观察到褐色调亡细胞的存在。以上结果均表明,p10.8在DEF中的表达具有诱导宿主细胞凋亡的作用,是番DRV的凋亡蛋白。

关键词：番鸭呼肠孤病毒 p10.8蛋白凋亡细胞鸭胚原代成纤维细胞

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

我国部分地区猪圆环病毒2型流行毒株的遗传变异分析

我国部分地区猪圆环病毒2型流行毒株的遗传变异分析

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：郭龙军陆月华危艳武黄立平刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨 150001

临床上由猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)感染引起的相关疾病日益严重,流行毒株基因不断发生变异,为了了解我国PCV2流行毒株遗传变异情况,本试验对来自全国10个省份不同地区送检的90份病料中分离到19株PCV2流行毒株.通... 详细信息

临床上由猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)感染引起的相关疾病日益严重,流行毒株基因不断发生变异,为了了解我国PCV2流行毒株遗传变异情况,本试验对来自全国10个省份不同地区送检的90份病料中分离到19株PCV2流行毒株.通过病毒基因组克隆和测序,将19株病毒分为2个大基因群和3个亚群,基因组组成分别为1766nt、1767nt和1768nt,各占15.8％、73.7％和10.5％.以1767nt毒株为基准,其第39或1039位有1个碱基缺失后突变成1766nt毒株;第1040位有1个碱基插入后突变成1768nt毒株。对19株病毒ORF2编码的Cap蛋白分析发现,有4株病毒编码基因发生了突变,出现了705nt和708nt两种突变型,使ORF2编码的Cap蛋白C末端分别有1和2个氨基酸延伸.本试验选用AccⅠ和Fba Ⅰ内切酶对19株病毒基因组PCR产物进行了限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP),其结果可作为流行毒株分型鉴别手段。研究表明,我国猪群中流行的PCV2以基因组1767nt毒株为主,但也出现了1766nt基因变异毒株。此外,试验也证实上述毒株的ORF2编码Cap蛋白的C末端有突变现象,表明我国PCV2流行毒株呈现多样性,本研究建立的PCR-RFLP方法可为PCV2流行毒株分型提供鉴别手段。

关键词：猪圆环病毒2型流行毒株遗传变异 PCR-RFLP法鉴别诊断

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒的研制及应用

猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒的研制及应用

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：张朝霞刘长明危艳武袁婧黄立平中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨 150001

用纯化的重组杆状病毒表达的猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白作为检测抗原,建立了一种间接ELISA用于血清抗体检测。昆虫细胞株(Sf9)接种重组杆状病毒,对蛋白表达参数及纯化工艺进行了优化。制备了5批重组蛋白抗原,表达量占总蛋白的18.7％左... 详细信息

用纯化的重组杆状病毒表达的猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白作为检测抗原,建立了一种间接ELISA用于血清抗体检测。昆虫细胞株(Sf9)接种重组杆状病毒,对蛋白表达参数及纯化工艺进行了优化。制备了5批重组蛋白抗原,表达量占总蛋白的18.7％左右;Ni2+亲和层析柱纯化获得重组蛋白回收率为1.7-1.9μg/108细胞,纯度为90.1％;重组蛋白可被特异性抗体识别,具有良好的免疫活性。建立的ELISA法对30份已知阴性血清样本检测临界OD值为0.343;ELISA与IPMA对150份血清进行平行检测符合率为95.3％(143/150),特异性为91.2％(31/34),敏感性为96.5％(112/116);其他几种常见猪病毒参考血清无交叉。组装的试剂盒批内和批间变异系数分别为4.0％-4.8％和8.9％-9.9％;置-20℃保存12个月稳定。试剂盒对人工感染猪血清检测结果,接种后第5w抗体阳转,第8w-9w抗体水平达到高;对来自黑龙江、吉林、河北、上海等地猪场1085份血清抗体检测,阳性率为73.6％,研制的ELISA试剂盒为临床PCV2血清抗体检测及疫苗免疫效果的评价提供了技术手段。

关键词：猪圆环病毒2型重组蛋白间接ELISA 抗体检测试剂盒纯化工艺

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株分离鉴定及遗传变异分析

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株分离鉴定及遗传变异分析

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：刘长明危艳武张朝霞袁婧黄立平中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨 150001

临床“高热综合征”病例分离到高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株,经细胞传代和蚀斑克隆,培育成功增殖性能稳定的新毒株,命名为PRRSV-HBR。该毒株接种细胞后能够产生细胞病变(CPE),随传代次数增加毒价显著提升,第45-60代毒... 详细信息

临床“高热综合征”病例分离到高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株,经细胞传代和蚀斑克隆,培育成功增殖性能稳定的新毒株,命名为PRRSV-HBR。该毒株接种细胞后能够产生细胞病变(CPE),随传代次数增加毒价显著提升,第45-60代毒价测定达107.5 TCID50/mL,采用免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)检测病毒抗原分布在细胞浆中;电镜观察到的病毒粒子呈圆形,直径约50-55nm。分离株Nsp2基因序列中第483和535-563位氨基酸存在缺失,属PRRSV变异株。用该毒株第5代培养物滴鼻接种试验猪(1×104.5 TCID50),临床表现为持续高热(≥40.5℃,9d-12d)、食欲下降、精神萎靡、消瘦、眼睑水肿、体表淋巴结肿大等,发病率为100％(10/10),死亡率为30％(3/10)。研究表明,PRRSV-HBR分离株对靶动物具有高致病力,培育的细胞适应毒株体外繁殖能力稳定,并产生了标志性基因突变,为该病毒致病机理、遗传变异规律、疫苗免疫等研究奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒高致病性遗传变异分离鉴定基因突变

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

检测猪圆环病毒2型血清中和抗体阻断ELISA方法的建立及应用

检测猪圆环病毒2型血清中和抗体阻断ELISA方法的建立及应用

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：黄立平刘长明危艳武陆月华郭龙军温士刚武嘉男吴洪丽中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨 150001

采用杂交瘤细胞融合技术,获得了一株具有分泌抗猪圆环病毒2型(PCV2)中和活性的单克隆抗体,利用该株单抗建立了一种阻断ELISA方法,用于检测该病毒感染猪血清中和抗体。该方法先用病毒多克隆抗体包被ELISA板以捕获已知病毒抗原,然后与待... 详细信息

采用杂交瘤细胞融合技术,获得了一株具有分泌抗猪圆环病毒2型(PCV2)中和活性的单克隆抗体,利用该株单抗建立了一种阻断ELISA方法,用于检测该病毒感染猪血清中和抗体。该方法先用病毒多克隆抗体包被ELISA板以捕获已知病毒抗原,然后与待检猪血清抗体及辣根过氧化物酶标记的单抗进行反应,通过测定酶标单抗显示阻断ELISA检测结果。该方法与常规免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)对353份试验猪血清样品进行了平行试验,两种方法检测符合率为96.0％;该方法的敏感性为97.9％,特异性为92.4％,与其它几种猪病毒参考阳性血清无交叉反应。用阻断ELISA和血清中和试验检测PCV2血清中和抗体结果表明,两种方法呈显著正相关性(r=0.9970),其敏感性优于血清中和试验。用阻断ELISA对PCV2灭活疫苗免疫与攻毒试验猪血清样品检测结果显示,疫苗接种2 w开始能够检测到病毒中和抗体,4w后血清抗体阳转率达100％;此外,对来自东北3省不同地区送检的703份血清样品进行检测,抗体阳性检出率为73.4％,表明我国养猪场中PCV2感染率较高,该病毒危害严重。本研究建立的阻断ELISA具有操作简便、特异和敏感等特点,可为PCV2流行病学调查及血清抗体检测提供了一种有效技术手段。

关键词：猪圆环病毒2型血清中和抗体检测单克隆抗体阻断ELISA法

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

用荧光定量RT-PCR法对高致病性PRRSV变异株感染猪体内分布规律的研究

用荧光定量RT-PCR法对高致病性PRRSV变异株感染猪体内分布规律的...

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：危艳武刘长明张朝霞黄立平中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨 150001

根据GenBank发表的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株Nsp2基因序列设计一对特异引物,以重组质粒作为阳性标准品,采用SYBR-Green Ⅰ嵌合荧光染料建立了一种荧光定量RT-PCR方法用于检测该病毒核酸载量,在1001-106拷贝/μL范围... 详细信息

根据GenBank发表的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株Nsp2基因序列设计一对特异引物,以重组质粒作为阳性标准品,采用SYBR-Green Ⅰ嵌合荧光染料建立了一种荧光定量RT-PCR方法用于检测该病毒核酸载量,在1001-106拷贝/μL范围内具有良好的线性关系,相关系数为R2=0.9998,扩增效率为E=0.950,对质粒标准品最低检测限为12.8拷贝/μL,重复性检测的变异系数低于2.0％。用高致病性PRRSV变异毒株人工感染25日龄非免疫仔猪,对不同时间采集的血清进行了病毒核酸定量检测,结果表明病毒血症于攻毒后48 h被检测出,于7-10d达到高峰,其病毒核酸载量能达到106拷贝/μL。试验猪临床表现为体温升高至40.5℃以上,持续7-11 d;出现嗜睡、打喷嚏、眼结膜炎、偶见一过性的耳尖发绀、皮肤苍白或有小疱疹、被毛粗糙、消瘦、便秘、后躯无力等临床症状。感染猪发生高热期与毒血症消长规律有一定相关性。对人工感染猪体内病毒分布检测结果表明,以多种脏器均有病毒存在,如扁桃体、淋巴结、心脏、肾脏中含量较高,肝和脾脏和肺次之,脑组织中也检测到病毒存在。实验表明,该方法可用于PRRSV变异毒株核酸定量检测,为该病毒致病性、致病机理、疫苗免疫及诊断等方面的研究提供了技术手段。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒变异毒株荧光定量分析 RT-PCR法体内分布

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

仔猪常见肠道疾病的鉴别诊断与防制

引用

畜禽业 2009年第5期20卷 68-71页

作者：苗岚飞张振梅祝超姚贵哲李金敏崔尚金东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室

新生仔猪的肠道疾病是限制养猪业养殖效率和经济收益最重要的因素之一。它主要是导致仔猪死亡率上升和饲料效率的降低，进而可能使生猪推迟上市．猪的质量下降。因此，此类疾病应引起足够重视。本文就仔猪常见肠道疾病的鉴别诊断与预防... 详细信息

新生仔猪的肠道疾病是限制养猪业养殖效率和经济收益最重要的因素之一。它主要是导致仔猪死亡率上升和饲料效率的降低，进而可能使生猪推迟上市．猪的质量下降。因此，此类疾病应引起足够重视。本文就仔猪常见肠道疾病的鉴别诊断与预防进行探讨和总结如下。

关键词：新生仔猪肠道疾病鉴别诊断防制经济收益养殖效率饲料效率养猪业

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪细小病毒分离株感染初孕母猪的病毒组织分布和病理学观察

引用

养猪 2009年第3期 65-68页

作者：苗岚飞胡守萍张超范张卓崔尚金中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院哈尔滨150030

本研究旨在研究猪细小病毒分离株感染初孕母猪后母猪和胎猪的病毒组织分布和组织病理学变化情况。试验选用妊娠35d的初孕母猪接种PPV-BQ株第15代细胞毒,以接种RPMI1640的母猪作为对照。攻毒40d后剖杀,采集母猪的心脏、肝脏、脾脏、肺脏... 详细信息

本研究旨在研究猪细小病毒分离株感染初孕母猪后母猪和胎猪的病毒组织分布和组织病理学变化情况。试验选用妊娠35d的初孕母猪接种PPV-BQ株第15代细胞毒,以接种RPMI1640的母猪作为对照。攻毒40d后剖杀,采集母猪的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、扁桃体、子宫内膜和腹部淋巴结,胎猪的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脑和小肠,进行组织病毒载量测定和组织病理学检测。实时定量PCR检测结果显示,攻毒组母猪的心脏、脾脏、肺脏、肾脏和子宫内膜存在病毒复制,子宫内病毒含量最高;胎猪的心脏、脾脏、肺脏中存在病毒复制。对照组脏器中无病毒复制。病理切片结果显示,攻毒组母猪肺脏出现细支气管性肺炎,脾脏出现淋巴细胞减少,心脏、肝脏、肾脏、扁桃体、子宫内膜和腹部淋巴结未见明显的组织病理学变化;胎猪的脏器未见明显的病理损伤。对照组未发现组织病理学变化。

关键词：猪细小病毒病毒组织分布组织病理学变化

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

5种重要猪病病毒基因芯片探针的建立及其初步应用

5种重要猪病病毒基因芯片探针的建立及其初步应用

引用

第四届全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会

作者：陈微晶符芳蔡雪辉田志军宋淑萍李曦黑龙江省八一农垦大学黑龙江大庆1631109 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

本研究将猪呼吸与繁殖综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、2型猪圆环病毒(PCV-2)5种病毒核酸的特异cDNA片段作为探针点制于氨基修饰的玻片上，以5种细胞培养毒的核酸作为模板，进行不对称PCR扩增... 详细信息

本研究将猪呼吸与繁殖综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、2型猪圆环病毒(PCV-2)5种病毒核酸的特异cDNA片段作为探针点制于氨基修饰的玻片上，以5种细胞培养毒的核酸作为模板，进行不对称PCR扩增，制备靶物，经绿色荧光染料Cy3标记后，分别与cDNA微阵列的芯片探针进行杂交。杂交信号经Genepix4000A扫描仪扫描。结果显示，芯片探针可以分别特异地与Cy3标记的5种特异靶物结合。应用本研究制备的基因芯片对100份现地采集的猪全血样品进行检测，其中，PRRSV阳性样品26份，PCV-2阳性样品47份，且PRRSV、PCV-2混合感染阳性样品17份，PPV阳性样品5份，PRV阳性样品2份，CS-FV检测阳性样品20份。结果表明，本研究设计并点制的cDNA芯片可以特异的检出5种病毒，具有明确的、潜在的诊断应用性。

关键词：猪病病毒病毒感染免疫学检验基因芯片探针

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗

引用

中国科技成果 2009年第21期10卷 8-8页

作者：王云峰童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

本课题的研究起始于1996年，得到“九五”国家高技术研究发展计划（863计划）课题（课题名称：鸡传染性喉气管炎、马立克氏病和新城疫二价、三价基因工程疫苗的研究）的支持（1996～2000年）。后来，该成果又得到了“十五”国家863计划... 详细信息

本课题的研究起始于1996年，得到“九五”国家高技术研究发展计划（863计划）课题（课题名称：鸡传染性喉气管炎、马立克氏病和新城疫二价、三价基因工程疫苗的研究）的支持（1996～2000年）。后来，该成果又得到了“十五”国家863计划课题（课题名称：鸡痘病毒载体多价基因工程疫苗及禽流感等亚单位疫苗的研制）的支持（2001～2005年）和农业科技成果转化资金项目课题（课题名称：传染性喉气管炎重组鸡痘病毒二价疫苗）（2001年～2003年）的资助。

关键词：鸡传染性喉气管炎基因工程疫苗重组鸡痘病毒农业科技成果转化资金项目国家863计划马立克氏病亚单位疫苗病毒载体

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：