检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医学报 1997年第1期17卷 5-7页

作者：陈忠斌徐宜为于康震王艳华袁世山王秀丽卢景良中国农科院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

以鸡胚成纤维细胞培养ＩＢＤＶ弱毒疫苗株Ｄ７８，经蔗糖密度梯度离心纯化，电镜下见典型ＩＢＤＶ粒子。用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ法提取病毒基因组，低熔点胶回收，琼脂糖凝胶电泳，可见ＩＢＤＶ典型双节段基因组。根据已发表的ＩＢＤＶ基因... 详细信息

以鸡胚成纤维细胞培养ＩＢＤＶ弱毒疫苗株Ｄ７８，经蔗糖密度梯度离心纯化，电镜下见典型ＩＢＤＶ粒子。用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ法提取病毒基因组，低熔点胶回收，琼脂糖凝胶电泳，可见ＩＢＤＶ典型双节段基因组。根据已发表的ＩＢＤＶ基因组序列，设计并合成了１对特异扩增ＩＢＤＶＶＰ２基因的引物。以ＩＢＤＶ基因组为模板，利用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增出了１．５ｋｂ的ｃＤＮＡ产物，将ＰＣＲ产物适当处理后与经ＳｍａⅠ酶切的ｐＵＣ１９质粒平端连接，转化大肠杆菌ＤＨ５α，在含Ａｍｐ、Χ－ｇａｌ和ＩＰＴＧ的琼脂平板上培养，产生大量白色菌落。挑取白色菌落，经质粒大小比较分析初步筛选到一重组质粒。以重组质粒ＤＮＡ为模板作ＰＣＲ检测和部分酶切分析证实。

关键词： IBDV 病毒 VP2基因基因克隆 RT-PCR

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马耳他布鲁氏菌OmpR基因缺失株的构建及其对布鲁氏菌生长与复制的影响

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中国预防兽医学报 2018年第12期40卷 1105-1110页

作者：宋甲宝许达姜利英宗树成李兆利刘文兴李干武步志高胡森中国农科院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为探究布鲁氏菌OmpR基因的功能,本研究以马耳他布鲁氏菌M28为亲本株,利用同源重组构建OmpR基因缺失株M28ΔOmpR。菌落生长实验显示:M28ΔOmpR生长速度极显著低于亲本株M28(p<0.001),回补株M28ΔOmpR-com可恢复菌落生长速度。巨噬细... 详细信息

为探究布鲁氏菌OmpR基因的功能,本研究以马耳他布鲁氏菌M28为亲本株,利用同源重组构建OmpR基因缺失株M28ΔOmpR。菌落生长实验显示:M28ΔOmpR生长速度极显著低于亲本株M28(p<0.001),回补株M28ΔOmpR-com可恢复菌落生长速度。巨噬细胞感染试验显示:M28ΔOmpR与M28相比,细菌分离数极显著降低2 Log10以上(p<0.001),回补株M28ΔOmpR-com可恢复其在巨噬细胞中的复制能力。小鼠感染实验显示:感染1周后,M28ΔOmpR接种小鼠比M28接种小鼠脾重极显著降低(p<0.001);第4周,前者细菌分离数极显著降低,二者相差0.8 Log10(p<0.001)。以上结果表明,OmpR基因缺失抑制马耳他布鲁氏菌菌落生长,显著降低其在巨噬细胞和小鼠体内的复制能力,研究结果为探究OmpR在布鲁氏菌中的作用机制奠定了基础。

关键词：布鲁氏茵 OmpR 生长与复制

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犬瘟热病毒的结构多肽分析

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中国兽医杂志 1995年第12期21卷 5-7页

作者：江国托闫庆生刘长明卢景良中国农科院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

差速离心和蔗糖密度梯度离心纯化经鸡胚成纤维细胞蚀斑克隆后的犬瘟热毒Ｓ＿８毒株，采用ＳＤＳ－ＰＡＥＧ电泳及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ转印技术详细分析了犬瘟热病毒的结构多肽。回收凝胶中１条６３Ｋｄ的蛋白带，经３种不同的蛋白酶... 详细信息

差速离心和蔗糖密度梯度离心纯化经鸡胚成纤维细胞蚀斑克隆后的犬瘟热毒Ｓ＿８毒株，采用ＳＤＳ－ＰＡＥＧ电泳及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ转印技术详细分析了犬瘟热病毒的结构多肽。回收凝胶中１条６３Ｋｄ的蛋白带，经３种不同的蛋白酶消化后，首次证明在犬瘟热病结构多肽中，融合蛋白Ｆ多肽的两个亚单位（Ｆ＿１和Ｆ＿２）是以胰蛋白酶的特异性水解位点精氨酸为桥梁连接形成Ｆ多肽的。试验结果表明，犬瘟热病毒主要包括Ｌ（２００．５Ｋｄ）、ＨＡ（７４Ｋｄ）、Ｐ（６８Ｋｄ）、Ｆ（６３Ｋｄ）、ＮＰ（５６Ｋｄ）、Ｍ（３５Ｋｄ）等６条结构多肽，同时下蛋白可在电泳中裂解成Ｆ＿１（４１Ｋｄ）和Ｆ＿２（２７Ｋｄ）２个亚单位。试验还发现其它３条分子量分别为５２Ｋｄ、４４Ｋｄ、３２Ｋｄ的病毒蛋白成分，它们是否均为病毒的结构多肽仍需深入研究。

关键词：犬病瘟病病毒结构多肽蛋白亚单位电泳

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传染性法氏囊病病毒VP2基因的克隆及其重组鸡痘病毒转移载体的构建

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农业生物技术学报 1996年第3期4卷 249-253页

作者：陈忠斌于康震王艳华袁世山徐宜为中国农科院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 中国农科院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

根据已发表的IBDV基因组序列设计并合成一对特异扩增IBDV VPcDNA的引物,以纯化的IBDV—D78弱毒疫苗株基因组为模板,利用RT—PCR技术扩增出约1.5kb产物.将PCR产物克隆到pUC19的Smal位点,经酶切图谱分析等方法鉴定出重组VPcDNA质粒(pVP).... 详细信息

根据已发表的IBDV基因组序列设计并合成一对特异扩增IBDV VPcDNA的引物,以纯化的IBDV—D78弱毒疫苗株基因组为模板,利用RT—PCR技术扩增出约1.5kb产物.将PCR产物克隆到pUC19的Smal位点,经酶切图谱分析等方法鉴定出重组VPcDNA质粒(pVP).将VP基因正向插入FPV启动子LPEP下游,连同痘菌病毒启动子P启动的LacZ报告基因盒插入FPV转移载体中的FPV复制非必需片段,经鉴定,成功构建了重组FPV—VP转移载体.

关键词：传染性法氏囊病病毒 VP2基因 RT—PCR FPV转移载体

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H9N2禽流感病毒中国分离株血凝素基因序列的初步分析

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中国预防兽医学报 2002年第4期24卷 249-251页

作者：李曦于康震田国斌唐秀英邓国华王秀荣孟庆文中国农科院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

10株中国H9N2禽流感病毒分离株的血凝素基因分析表明 ,这些分离株间的亲缘关系较近 ,推测它们可能来源于同一种系。H9亚型分离株的HA1亚单位系统发育分析表明中国AIV分离株与 97香港禽类市场上分离到的毒株不同。中国分离株中在HA切割... 详细信息

10株中国H9N2禽流感病毒分离株的血凝素基因分析表明 ,这些分离株间的亲缘关系较近 ,推测它们可能来源于同一种系。H9亚型分离株的HA1亚单位系统发育分析表明中国AIV分离株与 97香港禽类市场上分离到的毒株不同。中国分离株中在HA切割位点上均未见到典型的高致病力毒株H5、H7所具有的一系列碱性氨基酸 ,其排列均为_PARSSGLF_ ,系统发育分析表明该

关键词：禽流感病毒血凝素基因系统发育分析

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不同毒力马耳他种布鲁氏菌体内外诱导细胞凋亡的研究

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中国预防兽医学报 2018年第2期40卷 133-137页

作者：宗树成许达宋甲宝姜丽英刘文兴李兆利王金良步志高胡森中国农科院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为探究不同毒力马耳他种布鲁氏菌能否在体内外诱导凋亡以及诱导凋亡程度的差异,本研究将M28(强毒株)和M5-90(疫苗株)以MOI=100感染小鼠巨噬细胞系RAW264.7,利用激光共聚焦显微镜观察和流式细胞术检测凋亡产物caspase3/7。结果显示:M5-90... 详细信息

为探究不同毒力马耳他种布鲁氏菌能否在体内外诱导凋亡以及诱导凋亡程度的差异,本研究将M28(强毒株)和M5-90(疫苗株)以MOI=100感染小鼠巨噬细胞系RAW264.7,利用激光共聚焦显微镜观察和流式细胞术检测凋亡产物caspase3/7。结果显示:M5-90和M28在体外细胞水平均能够诱导RAW264.7细胞凋亡,且M5-90促进细胞凋亡能力高于M28。然后将M28和M5-90以1×10~6 cfu的剂量接种BALB/c小鼠,分别在接种后3 d、7 d和42 d迫杀小鼠,取小鼠脾脏组织制备切片,经HE染色后进行形态学观察,利用透射电镜观察并通过Tunel法检测细胞凋亡。结果显示M5-90和M28感染后均可诱导小鼠脾脏细胞凋亡,凋亡细胞主要为T淋巴细胞。本研究为布鲁氏菌诱导宿主细胞凋亡和布鲁氏菌致病机理研究奠定了基础。

关键词：马耳他种布鲁氏菌 M5-90 M28 凋亡

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蜜蜂KBV和APV病毒RT-PCR检测技术研究

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畜牧兽医学报 2004年第4期35卷 459-462页

作者：周婷姚军兰文升温建新王强中国农科院蜜蜂研究所北京100093 中国农科院哈尔滨兽医研究所国家兽医生物技术重点实验室哈尔滨150001

根据蜜蜂克什米尔病毒(Kashmirbeevirus,KBV)和急性麻痹病毒(Acuteparalysisvirus,APV)的RNA聚合酶基因序列,参照DonStoltz报道的引物KBV1、KBV2,美国农业部提供的引物DC62F、DC682R,对美国农业部惠赠的标准KBV和APV的RNA聚合酶基因片段,以及2001-2002年收集到的中国21个省市的180份疑似KBV和APV病蜂RNA聚合酶基因片段进行RT-PCR。对以KBV1、KBV2和DC62F、DC682R为引物扩增出的RNA聚合酶基因片段进行克隆、转化,并对克隆结果测序,证明其可靠性。建立了用分子生物学方法检测蜜蜂KBV和APV病毒的技术,有一定的应用前景。检测结果表明:到目前为止,我国蜜蜂群中未发现KBV和APV病毒病。

关键词： RT-PCR 检测技术蜜蜂克什米尔病毒蜜蜂急性麻痹病毒口岸检疫成蜂病

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新城疫病毒F48E9株F基因主要功能区的核苷酸序列分析

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中国预防兽医学报 1999年第1期21卷 31-34页

作者：苑纯秀曹殿军郭鑫闵平卢景良中国农科院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

本试验首先以ＮＤＶＦ４８Ｅ９株的基因组ＲＮＡ为模板，逆转录合成Ｆ基因ｃＤＮＡ第一链，再通过ＰＣＲ技术扩增Ｆ基因的ｃＤＮＡ，然后将其克隆到质粒ｐＵＣ１９中，经分子量比较、酶切分析、ＰＣＲ等方法证明，我们已经获得了ＮＤＶ... 详细信息

本试验首先以ＮＤＶＦ４８Ｅ９株的基因组ＲＮＡ为模板，逆转录合成Ｆ基因ｃＤＮＡ第一链，再通过ＰＣＲ技术扩增Ｆ基因的ｃＤＮＡ，然后将其克隆到质粒ｐＵＣ１９中，经分子量比较、酶切分析、ＰＣＲ等方法证明，我们已经获得了ＮＤＶＦ４８Ｅ９株Ｆ基因的阳性克隆。经初步序列分析，ＦＡ段核苷酸序列与参考株（Ｄ２６／７６）序列同源性为８９％，ＦＢ段同源性为９１％。二者的氨基酸序列表明，Ｆ４８Ｅ９株Ｆ蛋白裂解位点与其它强毒株裂解位点氨基酸组成相同，即１１２ＲＲＱＲＲ１１６Ｆ１１７。这两段序列中包含的三个Ｃｙｓ残基和三个潜在的糖基化位点都相当保守。

关键词：新城疫病毒 F基因克隆序列分析

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鸡瘟病毒载体研制及应用进展

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中国畜禽传染病 1996年第1期18卷 61-64页

作者：袁世山刘桂永沈瑞忠金虹卢景良中国农科院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

鸡瘟病毒载体研制及应用进展袁世山，刘桂永，沈瑞忠，金虹，卢景良（中国农科院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室）重组疫苗特别是活病毒载体疫苗的出现，为改进现有常规疫苗带来了契机，痘苗病毒（ＶＶ）以其外一源基因容... 详细信息

鸡瘟病毒载体研制及应用进展袁世山，刘桂永，沈瑞忠，金虹，卢景良（中国农科院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室）重组疫苗特别是活病毒载体疫苗的出现，为改进现有常规疫苗带来了契机，痘苗病毒（ＶＶ）以其外一源基因容量大，忠实的翻译后处理而一度成为病...

关键词：鸡痘鸡病载体疫苗

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伪狂犬病弱毒疫苗与野毒株PCR鉴别诊断方法的建立

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中国畜禽传染病 1998年第2期20卷 108-111页

作者：冉智光童光志孔令达张绍杰王玫李亚香王玉春崔益珠中国农科院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

目前，在国内用于预防猪伪狂犬病的疫苗主要是基因缺失的弱毒（Ｂａｒｔｈａ－Ｋ６１），为了有效地区分弱毒免疫猪和野毒感染猪，本实验分别建立了一种通用和一种鉴别ＰＣＲ诊断方法。根据已发表的伪狂犬病病毒（ＰｒＶ）ｇＢ、ｇＥ基... 详细信息

目前，在国内用于预防猪伪狂犬病的疫苗主要是基因缺失的弱毒（Ｂａｒｔｈａ－Ｋ６１），为了有效地区分弱毒免疫猪和野毒感染猪，本实验分别建立了一种通用和一种鉴别ＰＣＲ诊断方法。根据已发表的伪狂犬病病毒（ＰｒＶ）ｇＢ、ｇＥ基因的序列，设计并合成了两对引物：ＰＢ１／ＰＢ２和ＰＥ１／ＰＥ２。以疫苗株Ｂａｒｔｈａｋ－６１及野毒株Ｓ、Ｓｕ、Ｆ、Ｌ、Ｙ及闽Ａ（Ｍｉｎ－Ａ）ＤＮＡ为模板进行ＰＣＲ扩增，结果显示用引物ＰＢ１／ＰＢ２从７株病毒ＤＮＡ中均扩增出了一条长３７２ｂｐ的片段，经ＨｐａＩ酶切都产生了１２１ｂｐ和２５１ｂｐ两个片段，与设计大小完全相符；用引物ＰＥ１／ＰＥ２仅从６种野毒株ＤＮＡ中扩增出了一条长为５２６ｂｐ片段，经ＳｍａＩ酶切，皆产生了２２２ｂｐ和３０４ｂｐ的两个片段，这些ＰＣＲ产物大小与设计也完全相符。现用的弱毒疫苗Ｂａｒｔｈａ－Ｋ６１是ｇＩ／ｇＥ双基因缺失的病毒，因此根据ｇＥ基因序列设计的引物ＰＥ１／ＰＥ２只能扩增ＰｒＶ野毒不能扩增疫苗株Ｂａｒｔｈａ－ｋ６１，此ＰＣＲ可用于鉴别ＰｒＶ强、弱毒。ＰｒＶｇＢ是主要免疫原性糖蛋白，也是病毒感染和复制所必需的，因此无论强毒和弱毒均有此基因，根据ｇＢ基因序列设计的引物ＰＢ?

关键词：伪狂犬病病毒 PCR 鉴别诊断

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