检索结果-内蒙古大学图书馆

中国卫生检验杂志 2013年第8期23卷 1835-1838页

作者：周文君施海霞宋铭晶中国医学科学院医学实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类疾病比较医学重点实验室北京100021 农业虫害鼠害综合治理研究国家重点实验室北京100101

目的:构建表达布氏田鼠催产素基因的慢病毒载体及过表达检测。方法:从布氏田鼠脑组织提取RNA逆转录PCR得到OT的cDNA片段,并分别连接到带有荧光素酶(luciferase,LUC)标记的慢病毒载体PGK启动子下游,以及带有绿色荧光蛋白(EGFP)标记的EF1... 详细信息

目的:构建表达布氏田鼠催产素基因的慢病毒载体及过表达检测。方法:从布氏田鼠脑组织提取RNA逆转录PCR得到OT的cDNA片段,并分别连接到带有荧光素酶(luciferase,LUC)标记的慢病毒载体PGK启动子下游,以及带有绿色荧光蛋白(EGFP)标记的EF1A启动子下游,通过这两个载体转染细胞,分别利用生物发光标记与荧光标记这两种技术示踪OT基因的表达;再通过提取RNA逆转录以及实时荧光定量PCR检测OT基因不同模板转录的拷贝数。结果:成功构建LUC标记和EGFP标记的表达布氏田鼠催产素基因的慢病毒载体,进行了真核表达检测,并建立了实时荧光定量PCR的方法。结论:催产素(oxytocin,OT)基因是哺乳动物特有的神经垂体激素,与社会认知行为和社会适应行为有关,为研究该基因的功能奠定基础。

关键词：布氏田鼠催产素荧光素酶绿色荧光蛋白

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敲除淀粉样前体蛋白基因促进铝诱导的小鼠认知障碍损伤

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解剖学报 2013年第4期44卷 451-455页

作者：王冬梅袁树民张旭张连峰河南科技大学医学院病原生物学教研室河南洛阳471003 中国医学科学院北京协和医学院医学实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室北京100021

目的淀粉样前体蛋白(APP)基因是与痴呆症发生发展相关的重要基因,利用APP基因敲除小鼠探讨铝诱导的认知障碍损伤,及APP对中毒性认知障碍损伤的作用。方法 3月龄同窝阴性小鼠分为野生对照组(WT)和铝处理组(WT+Al),APP敲除小鼠分为模型对... 详细信息

目的淀粉样前体蛋白(APP)基因是与痴呆症发生发展相关的重要基因,利用APP基因敲除小鼠探讨铝诱导的认知障碍损伤,及APP对中毒性认知障碍损伤的作用。方法 3月龄同窝阴性小鼠分为野生对照组(WT)和铝处理组(WT+Al),APP敲除小鼠分为模型对照组(APP-/-)和模型处理组(APP-/-+Al),每组10只。铝处理组在粮食中加入相应剂量的乳酸铝,同窝阴性小鼠和APP-/-小鼠给予常规鼠粮作为对照,乳酸铝处理8周后进行水迷宫实验。HE染色观察小鼠脑组织神经病理改变;Western blotting检测糖原合成激酶3β(GSK-3β)和Caspase-3的活性变化。结果与WT相比,WT+Al小鼠在原平台区域停留时间和穿越原平台区域次数减少了28.1%和18.8%,而APP-/-+Al小鼠在原平台区域停留时间和穿越原平台区域次数减少了44.1%和51%。Western blotting显示,WT+Al小鼠和APP-/-+Al小鼠脑组织中p-GSK-3β分别减少了17.4%和46.4%。结论APP基因敲除促进铝诱导的神经毒性和学习记忆损伤。APP基因敲除导致GSK-3β的磷酸化水平降低、活性增高。由于GSK-3β活性增加对痴呆症具有促进作用,推测APP通过抑制GSK-3β活性在痴呆症发生过程中发挥保护效应。

关键词：淀粉样前体蛋白铝水迷宫认知障碍糖原合成激酶3β 小鼠

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三种突变GRK4转基因小鼠的血压动态分析

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中国实验动物学报 2013年第5期21卷 25-30页

作者：鲍丹董伟刘宁张旭吕丹张连峰中国医学科学院医学实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类疾病比较医学重点实验室国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室北京100021

目的建立GRK4γ野生型和三种GRK4γ基因突变的转基因小鼠,并对其血压进行动态分析,建立高血压模型。方法把人GRK4γ野生型、GRK4γR 65L、GRK4γA142V和GRK4γA486V三个突变基因分别插入鸡β-肌动蛋白启动子下游,构建转基因表达载体,显... 详细信息

目的建立GRK4γ野生型和三种GRK4γ基因突变的转基因小鼠,并对其血压进行动态分析,建立高血压模型。方法把人GRK4γ野生型、GRK4γR 65L、GRK4γA142V和GRK4γA486V三个突变基因分别插入鸡β-肌动蛋白启动子下游,构建转基因表达载体,显微注射法建立C57BL/6J GRK4野生型和突变的转基因小鼠,PCR鉴定转基因小鼠基因型。采用Western Blot鉴定GRK4在心脏、肾脏和肾上腺中的表达筛选高表达转基因品系。用无创血压测量仪分析转基因小鼠动态血压。结果建立了在心脏、肾脏和肾上腺均高表达GRK4基因的转基因小鼠。转基因表达人GRK4γ野生型和GRK4γR 65L突变的小鼠血压正常,转基因表达人GRK4γA142V突变的小鼠在正常的钠盐摄入情况下即可发生高血压,而转基因表达人GRK4γA486V突变的小鼠只有在增加钠盐摄入情况下才发生高血压。结论 GRK4γA142V转基因小鼠可作为自发性高血压动物模型,GRK4γA486V转基因小鼠可作为盐敏感性高血压动物模型。

关键词： GRK4γ 突变转基因高血压盐敏感小鼠

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CD45RON-糖基化位点对galectin-3结合CD45RO突变体转染细胞的影响

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基础医学与临床 2013年第9期33卷 1165-1170页

作者：薛婧高锡强傅春燕魏强北京协和医学院中国医学科学院医学实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室北京100021

目的构建CD45RO不同N-糖基化位点突变的T细胞株,并检测其与galectin-3的结合情况。方法采用N→Q定点突变技术分别去除CD45RO的11个N-糖基化位点,制备单个N-糖基化位点缺失的CD45RO,然后将其导入慢病毒表达载体pWPXL中,11个携带单个N-糖... 详细信息

目的构建CD45RO不同N-糖基化位点突变的T细胞株,并检测其与galectin-3的结合情况。方法采用N→Q定点突变技术分别去除CD45RO的11个N-糖基化位点,制备单个N-糖基化位点缺失的CD45RO,然后将其导入慢病毒表达载体pWPXL中,11个携带单个N-糖基化位点缺失的CD45RO重组慢病毒质粒与慢病毒包装质粒psPAX2和MD2.G共转染293T细胞,将包装重组慢病毒感染CD45-的J45.01细胞,流式分选后获得11株分别表达CD45RO单个N-糖基化位点缺失的J45.01 T细胞株。通过RT-PCR和流式细胞术分别从RNA水平和蛋白水平验证CD45RO突变体的转录和表达,应用流式细胞术检测CD45RO突变细胞株与galectin-3的结合情况。结果成功构建了11个CD45RO单个N-糖基化位点缺失的T细胞株,各突变细胞株能稳定表达突变基因,经测序再次证实突变位点正确,CD45RO突变体能稳定表达于细胞表面。galectin-3与N327Q突变细胞的结合明显增强,与N36Q突变细胞和N217Q突变细胞的结合明显减弱。结论 CD45RO N-糖基化位点对galectin-3与CD45RO-J45.01细胞的结合有调节作用。

关键词：半乳糖凝集素-3 结合 N-糖基化位点 CD45RO JurkatT细胞

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胰岛素通过调节SIRT1诱导SH-SY5Y细胞系轴突生长

胰岛素通过调节SIRT1诱导SH-SY5Y细胞系轴突生长

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全国老年性痴呆与相关疾病学术会议

作者：刘羽姚志刚张玲朱华邓巍秦川北京协和医学院比较医学中心中国医学科学院医学实验动物研究所

目的：在中枢神经系统中,胰岛素对学习和记忆力的调节起着重要作用。胰岛素受体在脑组织中分布广泛,而在大脑皮层和海马区域分布密度较。在海马区域胰岛素信号通路参与神经元存活、突触的形成及突触可塑性、树突棘的形成和兴奋性突触的... 详细信息

目的：在中枢神经系统中,胰岛素对学习和记忆力的调节起着重要作用。胰岛素受体在脑组织中分布广泛,而在大脑皮层和海马区域分布密度较。在海马区域胰岛素信号通路参与神经元存活、突触的形成及突触可塑性、树突棘的形成和兴奋性突触的发育。研究显示,SIRT1参与正常学习过程、记忆能力、突触可塑性。然而,胰岛素是否调节中枢神经系统神经元SIRT1的表达,或者其是否影响突触可塑性,这些问题仍然是未知。

关键词：胰岛素 SIRT1 神经元轴突生长 SH-SY5Y细胞系

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HDAC6在成年小鼠脑内的分布和亚细胞定位

HDAC6在成年小鼠脑内的分布和亚细胞定位

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2013年全国老年性痴呆与相关疾病学术会议

作者：张玲刘羽姚志刚黄澜邓巍朱华秦川北京协和医学院比较医学中心中国医学科学院医学实验动物研究所

目的:确定组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)在成年小鼠脑内的分布和亚细胞定位。方法:应用免疫组织化学的方法检测3月龄野生C57BL/6J小鼠脑组织中HDAC6的区域性分布,并采用三重免疫荧光标记的方法分析HDAC6在该小鼠脑组织中的亚细胞定位。结果... 详细信息

目的:确定组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)在成年小鼠脑内的分布和亚细胞定位。方法:应用免疫组织化学的方法检测3月龄野生C57BL/6J小鼠脑组织中HDAC6的区域性分布,并采用三重免疫荧光标记的方法分析HDAC6在该小鼠脑组织中的亚细胞定位。结果:免疫组织化学的结果显示HDAC6在全脑内广泛表达,尤以与学习记忆和情感相关的脑区免疫着色最强。三重免疫荧光标记结果发现,HDAC6在胆碱能、多巴胺能、去甲肾上腺素能、血清素能、突触后谷氨酸能和GABA能神经元中均有表达。星形胶质细胞中也有HDAC6的表达,但在小胶质细胞和少突胶质细胞中未发现有HDAC6阳性着色。结论:通过分析HDAC6在脑内的区域性分布和亚细胞定位,希望能为研究HDAC6在脑功能和神经精神疾病中的作用提供理论基础。

关键词：组蛋白去乙酰化酶去乙酰化神经元星形细胞海马

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HDAC6在成年小鼠脑内的分布和亚细胞定位

HDAC6在成年小鼠脑内的分布和亚细胞定位

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全国老年性痴呆与相关疾病学术会议

作者：张玲刘羽姚志刚黄澜邓巍朱华秦川北京协和医学院比较医学中心中国医学科学院医学实验动物研究所

目的：确定组蛋白去乙酰化酶6 (HDAC6)在成年小鼠脑内的分布和亚细胞定位。方法：应用免疫组织化学的方法检测3月龄野生C57BL/6J小鼠脑组织中HDAC6的区域性分布,并采用三重免疫荧光标记的方法分析HDAC6在该小鼠脑组织中的亚细胞定位。... 详细信息

目的：确定组蛋白去乙酰化酶6 (HDAC6)在成年小鼠脑内的分布和亚细胞定位。方法：应用免疫组织化学的方法检测3月龄野生C57BL/6J小鼠脑组织中HDAC6的区域性分布,并采用三重免疫荧光标记的方法分析HDAC6在该小鼠脑组织中的亚细胞定位。结果：免疫组织化学的结果显示HDAC6在全脑内广泛表达,尤以与学习记忆和情感相关的脑区免疫着色最强。三重免疫荧光标记结果发现,HDAC6在胆碱能、多巴胺能、去甲肾上腺素能、血清素能、突触后谷氨酸能和GABA能神经元中均有表达。星形胶质细胞中也有HDAC6的表达,但在小胶质细胞和少突胶质细胞中未发现有HDAC6阳性着色。

关键词：组蛋白去乙酰化酶去乙酰化神经元星形细胞海马

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两种核酸提取方法对小鼠诺如病毒RNA提取效能的比较

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中国比较医学杂志 2013年第9期23卷 57-60页

作者：田胜男苏静芬向志光刘云波中国医学科学院医学实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部实验动物检测中心北京100021

目的比较两种核酸提取方法对小鼠诺如病毒RNA的提取效能。方法用Trizol提取法和QIAamp Viral RNA Mini Kit提取法分别提取感染小鼠诺如病毒(Murine Norovirus,MNV)的小鼠小肠组织样品RNA和细胞培养物RNA,测定RNA浓度;用MNV特异的引物对... 详细信息

目的比较两种核酸提取方法对小鼠诺如病毒RNA的提取效能。方法用Trizol提取法和QIAamp Viral RNA Mini Kit提取法分别提取感染小鼠诺如病毒(Murine Norovirus,MNV)的小鼠小肠组织样品RNA和细胞培养物RNA,测定RNA浓度;用MNV特异的引物对分离的核酸样品进行一步法RT-PCR扩增。结果Trizol提取法提取小肠组织的RNA浓度高于QIAamp Viral RNA Mini Kit提取法;QIAamp Viral RNA Mini Kit提取得到的细胞培养物RNA浓度高于Trizol提取法。经QIAamp Viral RNA Mini Kit提取的两种核酸样品均能扩增出特异条带,而Trizol提取的核酸样品未见特异条带。结论在MNV的检测中,QIAamp Viral RNA Kit更适合组织样品中MNV病毒核酸的提取。

关键词： Trizol QIAamp Viral RNA Mini Kit 小鼠诺如病毒

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胰岛素通过调节SIRT1诱导SH-SY5Y细胞系轴突生长

胰岛素通过调节SIRT1诱导SH-SY5Y细胞系轴突生长

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2013年全国老年性痴呆与相关疾病学术会议

作者：刘羽姚志刚张玲朱华邓巍秦川北京协和医学院比较医学中心中国医学科学院医学实验动物研究所

目的:在中枢神经系统中,胰岛素对学习和记忆力的调节起着重要作用。胰岛素受体在脑组织中分布广泛,而在大脑皮层和海马区域分布密度较。在海马区域胰岛素信号通路参与神经元存活、突触的形成及突触可塑性、树突棘的形成和兴奋性突触的... 详细信息

目的:在中枢神经系统中,胰岛素对学习和记忆力的调节起着重要作用。胰岛素受体在脑组织中分布广泛,而在大脑皮层和海马区域分布密度较。在海马区域胰岛素信号通路参与神经元存活、突触的形成及突触可塑性、树突棘的形成和兴奋性突触的发育。研究显示,SIRT1参与正常学习过程、记忆能力、突触可塑性。然而,胰岛素是否调节中枢神经系统神经元SIRT1的表达,或者其是否影响突触可塑性,这些问题仍然是未知。方法:应用MTT方法检测不同浓度胰岛素对SH-SY5Y细胞作用的最适浓度;应用胰岛素信号通路抑制剂LY294002,检测胰岛素是否通过激活PI3K/Akt级联反应调节SIRT1表达;应用Western blot实验方法检测胰岛素对SH-SY5Y细胞中SIRT1蛋白表达水平影响;分别应用SIRT1特异性抑制剂和SIRT1-siRNA降低SH-SY5Y细胞中SIRT1表达,检测胰岛素是否通过调节SIRT1表达影响轴突生长。结果:胰岛素促进SH-SY5Y细胞轴突生长和上调SIRT1表达水平,并且胰岛素对SIRT1调节具有时间依赖性。胰岛素通过激活PI3K/Akt级联反应调节SIRT1表达影响神经轴突生长。进一步对SH-SY5Y细胞应用SIRT1特异性抑制剂后,影响胰岛素调节轴突生长。此外,对细胞应用SIRT1-siRNA降低细胞内SIRT1表达后,应用胰岛素不能有效增加细胞轴突生长。结论:体外研究显示,胰岛素通过激活PI3K/Akt级联反应调节SIRT1蛋白的表达,从而进一步影响轴突生长。

关键词：胰岛素 SIRT1 神经元轴突生长 SH-SY5Y细胞系

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恒河猴离乳幼猴B病毒动态监测

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中国比较医学杂志 2013年第2期23卷 38-42页

作者：高进权佟巍张丽芳刘先菊王艳蓉向志光刘云波中国医学科学院医学实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部实验动物检测中心北京100021

目的调查恒河猴离乳幼猴BV感染的动态变化,探讨早期控制的可能。方法采用BV全病毒为抗原的ELISA试剂盒,对两批离乳后群养的54只恒河猴幼猴每月采血检测BV感染情况,连续检测13个月。结果随月龄的增加,BV感染率上升,其中12月、1月、2月、... 详细信息

目的调查恒河猴离乳幼猴BV感染的动态变化,探讨早期控制的可能。方法采用BV全病毒为抗原的ELISA试剂盒,对两批离乳后群养的54只恒河猴幼猴每月采血检测BV感染情况,连续检测13个月。结果随月龄的增加,BV感染率上升,其中12月、1月、2月、3月、4月BV阳性猴数量相对增加较明显。结论幼猴性成熟期之前BV感染率超过70%且呈现出一定的变化规律,春、冬季BV的感染率相对较高,应早期加强BV的有效预防控制,降低BV的感染,提高猴群质量。

关键词： B病毒恒河猴 ELISA 阳性率相对阳性率

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