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实验动物与药理学、毒理学研究学术交流会

作者：张伟冯娟陈炜张小娟袁树民廉虹张连峰中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类疾病比较医学重点实验室

目的建立系统表达肝素结合性表皮生长因子(HB-EGF)的转基因动物模型,利用转基因动物模型研究HB-EGF与组织纤维化的关系。方法RT-PCR法克隆小鼠HB-EGF基因,将其插入Chickenβ-actin启动子下游,构建Chickenβ-actin-HB-EGF表达载体,利用... 详细信息

目的建立系统表达肝素结合性表皮生长因子(HB-EGF)的转基因动物模型,利用转基因动物模型研究HB-EGF与组织纤维化的关系。方法RT-PCR法克隆小鼠HB-EGF基因,将其插入Chickenβ-actin启动子下游,构建Chickenβ-actin-HB-EGF表达载体,利用显微注射的技术把表达载体注射到受精卵的雄原核中,建立HB-EGF转基因小鼠。利用特异引物PCR的方法鉴定转基因的基因型,采用Westem blotting方法鉴定HB-EGF基因在全身组织的表达。分别取HB-EGF转基因鼠与同窝阴性小鼠的肝、肾、肺及膀胱组织进行Massion染色。结果建立了系统表达HB-EGF转基因小鼠,Western blotting发现其HB-EGF在肝、肺、肾及膀胱的表达与同窝阴性对照小鼠相比明显增加。Massion染色结果表明转基因鼠肝、肺、肾及膀胱组织纤维化程度明显高于同窝阴性对照小鼠。结论成功建立了系统表达HB-EGF转基因小鼠,HB-EGF的过度表可显著加重组织纤维化程度。

关键词：肝素结合性表皮生长因子转基因小鼠纤维化

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24-脱氢胆固醇还原酶基因转基因小鼠血生化指标分析

24-脱氢胆固醇还原酶基因转基因小鼠血生化指标分析

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实验动物与药理学、毒理学研究学术交流会

作者：全雄志董伟曹兴水张连峰中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类疾病比较医学重点实验室

目的建立全身表达24-脱氢胆固醇还原酶基因(Dhcr24)转基因小鼠动物模型,研究该基因过表达对小鼠代谢的影响。方法RT-PCR法克隆小鼠Dhcr24基因,把该基因插入CMV启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立Dhcr24转基因小鼠。PCR鉴... 详细信息

目的建立全身表达24-脱氢胆固醇还原酶基因(Dhcr24)转基因小鼠动物模型,研究该基因过表达对小鼠代谢的影响。方法RT-PCR法克隆小鼠Dhcr24基因,把该基因插入CMV启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立Dhcr24转基因小鼠。PCR鉴定Dhcr24转基因小鼠的基因型,RT-PCR和Western Blot检测基因表达水平,血生化检测仪检测转基因小鼠血生化指标的改变。结果建立了2个不同表达水平的Dhcr24转基因小鼠品系,转入的Dhcr24基因在肝和脾组织中的表达高于内源的Dhcr24。血生化检测证实:乳酸脱氢酶(LDH)、总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)和血肌酐(SCr)较野生型小鼠明显降低,而高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)和碱性磷酸酶(ALP)较野生型小鼠明显增加,并且Dhcr24转基因雌鼠的体重比野生型小鼠明显降低,均有显著差异。但Dhcr24转基因雄鼠各项指标与野生型小鼠相比没有显著差异。结论成功建立了全身表达Dhcr24转基因小鼠,并证实Dhcr24基因对雌性小鼠的体重和血生化指标,包括LDH,TP,Alb,SCr,HDL-c and ALP具有明显的影响。

关键词： 24-脱氢胆固醇还原酶转基因小鼠血生化指标

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人宫颈癌细胞HeLa移植模型肿瘤生长的荧光分析和卡尺测量的比较

人宫颈癌细胞HeLa移植模型肿瘤生长的荧光分析和卡尺测量的比较

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实验动物与药理学、毒理学研究学术交流会

作者：李小颖马春梅张连峰中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类疾病比较医学重点实验室

目的建立稳定表达绿色荧光蛋白的人宫颈癌细胞系,建立移植瘤模型并比较移植模型肿瘤生长的荧光分析和卡尺测量的优缺点。方法以Lipofectamine 2000介导chickenβ-actin-GFP-NEO转染人宫颈癌细胞Hela,经梯度浓度G418筛选获得稳定表达绿... 详细信息

目的建立稳定表达绿色荧光蛋白的人宫颈癌细胞系,建立移植瘤模型并比较移植模型肿瘤生长的荧光分析和卡尺测量的优缺点。方法以Lipofectamine 2000介导chickenβ-actin-GFP-NEO转染人宫颈癌细胞Hela,经梯度浓度G418筛选获得稳定表达绿色荧光蛋白的细胞克隆并扩大培养。BALB/CA-nu裸鼠皮下接种1×10～6个发光细胞使其成瘤,利用活体荧光成像系统和游标卡尺观察肿瘤的生长情况。结果获得了稳定表达GFP的人宫颈癌细胞株,将其接种到裸鼠体内可成瘤。活体荧光成像观察发现,1至3周随着肿瘤体积逐渐增大,平均荧光光子数逐渐增加;4周时随着肿瘤出现明显坏死,平均荧光光子数呈现下降趋势,而游标卡尺测量结果显示肿瘤在4至5周仍然不断的增大。结论绿色荧光蛋白能够在人宫颈癌细胞Hela中长期稳定表达,用绿色荧光蛋白标记的人宫颈癌细胞Hela建立的裸鼠肿瘤模型可以为人宫颈癌研究提供理想的实验材料,应用小动物活体成像系统能够客观定量评价活的肿瘤细胞在动物体内的生长情况,而不是肿瘤体积的变化。

关键词：人宫颈癌细胞裸小鼠活体荧光成像系统,游标卡尺

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SW1990和Capan-2红色荧光标记胰腺癌移植肿瘤模型的建立和比较

SW1990和Capan-2红色荧光标记胰腺癌移植肿瘤模型的建立和比较

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实验动物与药理学、毒理学研究学术交流会

作者：李小颖苏卫张连峰中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类疾病比较医学重点实验室

目的建立稳定表达红色荧光蛋白基因的人胰腺癌细胞系,为体内监测肿瘤的早期生长及抗肿瘤药物的药效评价建立一种新的肿瘤动物模型。方法以Lipofectamine 2000介导chickenβ-actin-RFP-NEO转染人胰腺癌细胞SW1990和Capan-2,经梯度浓度G41... 详细信息

目的建立稳定表达红色荧光蛋白基因的人胰腺癌细胞系,为体内监测肿瘤的早期生长及抗肿瘤药物的药效评价建立一种新的肿瘤动物模型。方法以Lipofectamine 2000介导chickenβ-actin-RFP-NEO转染人胰腺癌细胞SW1990和Capan-2,经梯度浓度G418筛选获得稳定表达红色荧光蛋白的细胞克隆并扩大培养。BALB/CA-nu裸鼠皮下接种1×10～6个发光细胞使其成瘤,活体荧光成像系统观察肿瘤的生长情况。结果获得了稳定表达RFP的两种不同的人胰腺癌细胞株,将其接种到裸鼠体内可成瘤,利用活体成像系统观察了肿瘤的生长动态过程,并且SW1990肿瘤细胞的生长速度较Capan-2细胞快。结论用红色荧光蛋白标记的人胰腺癌细胞建立的裸鼠肿瘤模型为胰腺癌的研究和相关药物筛选提供了可进行荧光影像活体、动态分析的动物模型。

关键词：人胰腺癌细胞红色荧光蛋白活体荧光成像系统

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实验动物病原菌的一体化蛋白芯片检测方法

实验动物病原菌的一体化蛋白芯片检测方法

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实验动物与药理学、毒理学研究学术交流会

作者：林树柱张丽芳刘星马春梅高凯刘先菊李万波张连峰中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类疾病比较医学重点实验室

目的制备实验动物小鼠需检测病原菌的多组特异性抗原,并制作成蛋白芯片,为建立一体化的实验动物病原微生物检测方法提供基础。方法通过western blot方法选择病原菌的特异性抗原,并利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶回收的方法制备选定的抗原,利用... 详细信息

目的制备实验动物小鼠需检测病原菌的多组特异性抗原,并制作成蛋白芯片,为建立一体化的实验动物病原微生物检测方法提供基础。方法通过western blot方法选择病原菌的特异性抗原,并利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶回收的方法制备选定的抗原,利用芯片点样仪将回收的抗原按照预先设定的矩阵点在氨基化处理过的玻片上,制备蛋白芯片,芯片先与小鼠阳性血清杂交,再与辣根过氧化物酶标记的羊抗小鼠IgG杂交,DAB显色,通过扫描及软件分析,获得检测结果。结果通过对比western blot结果,伤寒沙门氏菌、嗜肺巴氏杆菌、假结核耶尔森菌和念珠状链杆菌每种病原菌选定了五组特异性较好的抗原,凝胶回收制备了选定的所有抗原,制作了蛋白芯片,分别与免疫伤寒沙门氏菌、嗜肺巴氏杆菌、假结核耶尔森菌和念珠状链杆的小鼠阳性血清杂交后,扫描结果显示,芯片上对应抗原均显示了很强的阳性信号,并具有良好的特异性。结论制备了可以同时检测几种细菌的蛋白芯片,为建立一体化的实验动物病原微生物检测方法提供了基础。

关键词：实验动物病原菌抗原蛋白芯片一体化检测

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神经皮肤黑变病中黑色素的来源初探

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中国比较医学杂志 2009年第5期19卷 20-22,I0007,I0008页

作者：陈云新 Erwan Bezard 李加美朱华徐艳峰代小伟黄澜刘亚莉马春梅贾春实肖冲刘颖邓巍李秦秦川中国医学科学院&北京协和医学院比较医学中心病理室北京100021 法国Bordeaux第二大学法国国家科学研究院Bordeaux33076 中国医学科学院&北京协和医学院实验动物研究所motac实验室北京100021

目的探讨食蟹猴神经皮肤黑变病(NCM)中黑色素的来源。方法收集北京协和医学院比较医学中心病理室食蟹猴神经皮肤黑变病的病理学标本一例,复习其病理切片并辅助免疫组化及电镜技术对黑色素的来源做进一步探讨。结果皮肤病理检查显示真皮... 详细信息

目的探讨食蟹猴神经皮肤黑变病(NCM)中黑色素的来源。方法收集北京协和医学院比较医学中心病理室食蟹猴神经皮肤黑变病的病理学标本一例,复习其病理切片并辅助免疫组化及电镜技术对黑色素的来源做进一步探讨。结果皮肤病理检查显示真皮内黑色素主要由黑色素细胞产生,黑色素细胞CD31免疫组化染色阴性。脑膜的组织病理学显示脑膜下黑色素主要由黑色素细胞产生,黑色素细胞CD31免疫组化染色阴性。脑实质的组织病理学显示其黑色素由黑色素细胞和血管内皮细胞产生,CD31免疫组化染色显示含有黑色素的血管内皮细胞呈阳性着色。电镜检查结果同样显示血管内皮细胞内可见黑色素小体沉积。结论我们在世界上首次揭示了食蟹猴NCM大脑中血管内皮细胞可产生黑色素,这给内皮细胞增加了一项新的功能。

关键词：神经皮肤黑变病血管内皮细胞黑色素

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小鼠呼肠孤病毒Ⅲ型病毒标准化血清制备及ELISA检测方法的研究

小鼠呼肠孤病毒Ⅲ型病毒标准化血清制备及ELISA检测方法的研究

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实验动物与药理学、毒理学研究学术交流会

作者：侯丽波佟巍谢军芳乔红伟丛哲蒋虹王卫魏强中国医学科学院中国协和医科大学实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类疾病比较医学重点实验室

目的制备标准化小鼠呼肠孤病毒Ⅲ型(Reovirus 3,Reo-3)的免疫血清,建立小鼠Reo-3抗体ELISA检测方法。方法使用动物来源的Reo-3病毒感染BALB/c小鼠,获得高效价免疫血清;以BHK-21细胞制备Reo-3病毒抗原,并做正常抗原对照,滴定抗原和标准... 详细信息

目的制备标准化小鼠呼肠孤病毒Ⅲ型(Reovirus 3,Reo-3)的免疫血清,建立小鼠Reo-3抗体ELISA检测方法。方法使用动物来源的Reo-3病毒感染BALB/c小鼠,获得高效价免疫血清;以BHK-21细胞制备Reo-3病毒抗原,并做正常抗原对照,滴定抗原和标准化小鼠Reo-3血清的最佳工作浓度,并进行特异性、敏感性、重复性、稳定性等实验。结果制备18mL抗Reo-3血清,经检测,IFA效价达1:640,IEA效价达1:160;Reo-3抗原和标准化小鼠Reo-3免疫血清最佳工作浓度分别为5ug/mL和1:2,400;该ELISA检测体系Reo-3特异抗原批内变异系数为3.8%,批间变异系数为4.0%;检测灵敏度为1:4400;与仙台病毒(SV)、小鼠肝炎病毒(MHV)、小鼠腺病毒(Mad)、痘苗病毒(Vaccinia Virus)、小鼠多瘤病毒(POLY)均无交叉反应。经37℃破坏性试验,2d稳定性试验相对偏差<27%。结论本研究制备的Reo-3抗血清达到同批次大量高滴度的水平,可作为检测实验小鼠Reo-3病原的标准化质控血清。本研究建立的ELISA方法重复性、稳定性好,特异性、敏感性强。该体系可用于大、小鼠等实验动物Reo-3抗体的检测。

关键词：呼肠孤病毒Ⅲ 标准化血清 ELISA

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淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒在实验动物大鼠中的流行调查

淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒在实验动物大鼠中的流行调查

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实验动物与药理学、毒理学研究学术交流会

作者：佟巍乔红伟魏强中国医学科学院中国协和医科大学实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类疾病比较医学重点实验室

目的对普通级、清洁级和SPF级大鼠血清样本进行LCMV抗体检测。初步摸清LCMV在我国实验大鼠中的感染情况。方法依据现行国家标准中规定的LCMV血清学检测方法——免疫荧光试验(IFA)进行检测。对2006-2008年保存的48份普通级、100份清洁级... 详细信息

目的对普通级、清洁级和SPF级大鼠血清样本进行LCMV抗体检测。初步摸清LCMV在我国实验大鼠中的感染情况。方法依据现行国家标准中规定的LCMV血清学检测方法——免疫荧光试验(IFA)进行检测。对2006-2008年保存的48份普通级、100份清洁级和24份SPF级大鼠血清样本进行LCMC抗体检测。结果其中普通级大鼠血清样本15(n=48)阳性,阳性率为33.25%,强阳性样本滴度可达1:1280;SPF级及清洁级大鼠血清样本全部阴性。结论为保障实验动物从业人员的身体健康,提高我国实验动物质量,促进我国生物医药领域的发展,更好的与国际接轨,可考虑我国现行实验动物等级标准中增加对大鼠进行LCMV抗体检测的项目。

关键词：淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV) 实验大鼠流行调查

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海南省及云南西双版纳州HIV-1的分子流行病学比较研究

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中国比较医学杂志 2009年第6期19卷 1-8,I0001,I0002页

作者：邓巍鲍琳琳 Nicole Vidal 符鹏何启亚方华秦川卢葳北京协和医学院＆中国医学科学院实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室北京100021 中国医学科学院＆北京协和医学院中-法合作艾滋病研究中心北京100021 海南省疾病预防控制中心海口570203 云南省西双版纳州疾病预防控制中心景洪666100 法国发展研究院＆蒙特利尔大学UMR145研究所蒙特利尔34394

目的调查比较HIV-1在海南省及云南西双版纳州的流行情况及分子流行病学分析高危因素传播的情况以及传播链的鉴定。方法我们与海南省CDC及西双版纳州CDC合作在其境内开展了HIV血清学调查,筛查了海南省(1991～2006)及西双版纳州(1996～20... 详细信息

目的调查比较HIV-1在海南省及云南西双版纳州的流行情况及分子流行病学分析高危因素传播的情况以及传播链的鉴定。方法我们与海南省CDC及西双版纳州CDC合作在其境内开展了HIV血清学调查,筛查了海南省(1991～2006)及西双版纳州(1996～2005)高危人群志愿者血清样本。在本次两地调查中,我们通过系统进化分析方法,对已诊断的HIV感染者进行分子流行病学的追踪,来分析其中的主要流行亚群以及结合个案追踪进行传播链的鉴定。结果我们共筛查了海南省499725人,共检出HIV阳性感染者523例(0.1%),以注射器吸毒感染为主要传播途径(经共用注射器吸毒感染占69.2%、经性接触传播占19.3%、供血和使用血液/血液制品感染占3.3%、母婴传播占0.8%、不详占7.7%)。然而,在西双版纳州筛查中发现了较海南省高20倍的检出率:在25390受检人中,共检出HIV阳性感染者501例(2%)并以异性性传播为主(经异性性接触传播占77.3%、经共用注射器吸毒感染占21.1%、经同性性接触传播占0.4%、母婴传播占1.2%)。在海南省抽样的83人中,以CRF01--AE重组亚型(70人,84.3%)为主要病毒亚型,其他病毒亚型包括B’亚型(8人)、C亚型(2人)、CRF08-BC重组亚型(1人)、B亚型(1人)和1个未报道过的CRF01-AE/B’重组亚型。同样,在版纳抽样的44人中,也以CRF01-AE重组亚型(27人,61.3%)为主要病毒亚型,其他病毒亚型包括CRF08-BC重组亚型(15人)、G亚型(1人)、和1个未报道过的B/C重组亚型。在海南省抽样中有66人(79.5%)分布于4个大小不同的传播群,传播群1(59人)较大(奠基效应),属于CRF01-AE重组亚型,传播群2、3、4则较小,分别为3、2、2人,分别属于CRF01-AE重组亚型、C亚型和B’亚型。相反,在版纳抽样中有18人(40.9%)分布于8个较小的传播群(每群平均含2.25感染个体)。在海南省抽样中怀疑的6对异性性接触的传播链中,经系统进化分析方法确认了其中的4对,2对被拒绝。在版纳抽样中怀疑的8对异性性接触的传播链中,经系统进化分析方法确认了其中的5对,2对被拒绝,1对无法分析,此外还新发现了3对异性性接触传播群。结论HIV-1感染者的分子流行病学的追踪和分析对于追溯艾滋病流行的源头和地区性预防策略的制定有着重大的意义。

关键词： HIV-1 分子流行病学海南西双版纳

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神经组织特异表达绿色荧光蛋白转基因小鼠的脑组织形态观察

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解剖学报 2008年第1期39卷 27-30页

作者：冯娟全雄志董伟高苒黄澜陈云新秦川张连峰中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心遗传中心中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心病理中心北京100021

目的建立神经组织特异表达绿色荧光蛋白的转基因小鼠,为神经系统的形态学观察提供可以荧光示踪的工具动物。方法把增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因插入血小板源性生长因子(PDGF)B-链启动子下游构建转基因载体,用显微注射的方法建立转基因C... 详细信息

目的建立神经组织特异表达绿色荧光蛋白的转基因小鼠,为神经系统的形态学观察提供可以荧光示踪的工具动物。方法把增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因插入血小板源性生长因子(PDGF)B-链启动子下游构建转基因载体,用显微注射的方法建立转基因C57BL/6J小鼠。PCR鉴定转基因小鼠的基因表型,对阳性转基因小鼠的脑组织进行矢状面冷冻切片,分别进行HE染色,显微镜观察组织结构,荧光体视镜及荧光显微镜观察绿色荧光蛋白(GFP)在神经组织的表达。结果在8个首建品系中筛选出1个神经组织高表达绿色荧光蛋白的转基因小鼠系。观察到绿色荧光蛋白在大脑皮层、海马、丘脑、小脑及脑干等部位表达。结论建立了稳定遗传的神经组织特异表达绿色荧光蛋白转基因小鼠品系,为神经系统的生理学及病理学研究提供了可以荧光示踪的模型动物。

关键词：神经系统绿色荧光蛋白形态学转基因小鼠

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