检索结果-内蒙古大学图书馆

中国实验动物学报 2007年第4期15卷 267-270,I0003,I0004页

作者：冯娟高苒全雄志邸冉董伟马春梅黄澜刘亚莉曹兴水秦川张连峰中国医学科学院实验动物研究所中国协和医学院比较医学中心北京100021

目的建立红色荧光和绿色荧光转基因小鼠,为活体荧光影像系统建立重要的实验动物模型。方法把DsRed-Express和EGFP基因插入chicken-βactin强启动子下游构建转基因载体,建立红色荧光和绿色荧光转基因C57BL/6J小鼠。PCR鉴定红色荧光和绿... 详细信息

目的建立红色荧光和绿色荧光转基因小鼠,为活体荧光影像系统建立重要的实验动物模型。方法把DsRed-Express和EGFP基因插入chicken-βactin强启动子下游构建转基因载体,建立红色荧光和绿色荧光转基因C57BL/6J小鼠。PCR鉴定红色荧光和绿色荧光转基因小鼠的基因表型,活体荧光影像系统分析红色荧光和绿色荧光转基因小鼠,荧光显微镜检测红色荧光和绿色荧光转基因小鼠全身组织器官的组织形态。结果分别建立了3个系的红色荧光和3个系的绿色荧光转基因小鼠。活体荧光影像系统分析转基因小鼠分别呈现红色荧光和绿色荧光。经荧光显微镜观察,DsRed-Express转基因小鼠的红色荧光蛋白在多个组织器官中表达,尤其在胰腺、肝脏、肾脏和脾脏等器官表达量较高。EGFP转基因小鼠绿色荧光蛋白在全身各个组织器官中表达,尤其在胰腺、心脏、小肠、外周血细胞和脑组织等器官组织中表达量较高。结论DsRed-Express和EGFP基因在转基因小鼠中系统性高表达,成功建立了红色荧光和绿色荧光转基因小鼠。DsRed-Express和EGFP转基因小鼠将成为活体荧光影像系统的重要实验动物模型。

关键词：红色荧光蛋白绿色荧光蛋白转基因模型,动物

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cTnT^(R141W)转基因小鼠扩张型心肌病模型的建立

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中国比较医学杂志 2007年第10期17卷 563-567,I0001页

作者：冯娟董伟全雄志祝梅香邸冉高苒马春梅黄澜刘亚莉朱华秦川张连峰中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心北京100021

目的建立cTnTR141W扩张型心肌病的转基因小鼠模型。方法把cTnTR141W基因插入-αMHC启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立cTnTR141W转基因C57BL/6J小鼠。PCR鉴定cTnTR141W转基因小鼠的基因表型,实时PCR检测基因的拷贝数,Nor... 详细信息

目的建立cTnTR141W扩张型心肌病的转基因小鼠模型。方法把cTnTR141W基因插入-αMHC启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立cTnTR141W转基因C57BL/6J小鼠。PCR鉴定cTnTR141W转基因小鼠的基因表型,实时PCR检测基因的拷贝数,Northern blotting检测基因表达,光学显微镜和超声检测cTnTR141W转基因小鼠心脏的病理改变。结果建立了3个系的cTnTR141W转基因小鼠。3个系的基因拷贝数分别是15、20和59拷贝。cTnTR141W基因在心脏组织的表达水平高于内源性cTnT。病理分析显示cTnTR141W转基因小鼠心房心室明显大于野生型,心室壁明显变薄,心肌细胞不均匀肥大,心肌间质纤维增多。超声检查显示心室腔明显扩大,收缩期容积和舒张期容积显著增大,射血分数、短轴缩短率、室壁运动度明显降低。结论cTnTR141W转基因小鼠的全心扩大,室壁变薄,心肌细胞肥大,间质纤维化以及心肌收缩力下降,说明成功建立了cTnTR141W转基因小鼠扩张型心肌病模型,为研究扩张型心肌病发病机制和药物研发提供了有价值的动物模型。

关键词：心肌肌钙蛋白T 扩张型心肌病转基因超声

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乌鳢血清免疫球蛋白IgM的分离纯化及其兔抗血清的制备

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中国比较医学杂志 2007年第11期17卷 648-651页

作者：林树柱李万波刘先菊杨帆全雄志全志云秦川张连峰中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心北京100021

目的分离纯化乌鳢血清免疫球蛋白,并制备其兔抗血清。方法用Protein A亲和层析的方法纯化乌鳢血清免疫球蛋白,通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测蛋白的纯度,测定其重链、轻链的分子量,免疫大耳白兔制备抗血清,利用免疫双扩散检测抗血清的... 详细信息

目的分离纯化乌鳢血清免疫球蛋白,并制备其兔抗血清。方法用Protein A亲和层析的方法纯化乌鳢血清免疫球蛋白,通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测蛋白的纯度,测定其重链、轻链的分子量,免疫大耳白兔制备抗血清,利用免疫双扩散检测抗血清的效价。结果纯化了乌鳢血清免疫球蛋白,SDS-PAGE测定其重链和轻链的相对分子质量分别为78×103和27×103左右,免疫双扩散法测定兔抗乌鳢免疫球蛋白抗血清效价为1∶32。结论成功纯化了乌鳢免疫球蛋白,制备了兔抗乌鳢IgM抗血清,为研究乌鳢的免疫机制、建立乌鳢的血清学检测系统奠定了基础。

关键词：乌鳢免疫球蛋白亲和层析

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检测H5N1型高致病性禽流感病毒抗体的间接ELISA方法的初步建立

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中国比较医学杂志 2007年第12期17卷 743-744,756页

作者：刘红霞代小伟朱华刘先菊秦川中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心北京100021

目的建立一种快速检测H5N1病毒感染的血清学方法。方法以H5N1病毒作为抗原包被96孔板,与待检血清作用后,以辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG作为二抗,用ELISA方阵法确定最佳抗原、血清稀释浓度。结果感染7 d小鼠血清中抗体水平很低,感染... 详细信息

目的建立一种快速检测H5N1病毒感染的血清学方法。方法以H5N1病毒作为抗原包被96孔板,与待检血清作用后,以辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG作为二抗,用ELISA方阵法确定最佳抗原、血清稀释浓度。结果感染7 d小鼠血清中抗体水平很低,感染14 d血清抗体水平较高,最佳抗原稀释度1∶100,最佳血清稀释度1∶200。结论这种快速检测H5N1病毒的诊断方法直接有效、方便易行。

关键词： H5N1病毒感染酶联免疫吸附测定

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爬行动物的体液免疫

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中国比较医学杂志 2007年第11期17卷 I0005-I0007页

作者：林树柱张连峰中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心北京100021

爬行动物针对颗粒性和可溶性抗原,能够快速、有效的产生抗体。爬行动物血清中的抗体主要包括高分子量的免疫球蛋白(HMWIg)和不止一种的低分子量免疫球蛋白(LMWIg),爬行动物中还有在亲代和子代间传递的免疫球蛋白Ig Y。目前爬行动物免疫... 详细信息

爬行动物针对颗粒性和可溶性抗原,能够快速、有效的产生抗体。爬行动物血清中的抗体主要包括高分子量的免疫球蛋白(HMWIg)和不止一种的低分子量免疫球蛋白(LMWIg),爬行动物中还有在亲代和子代间传递的免疫球蛋白Ig Y。目前爬行动物免疫球蛋白的纯化方法主要有:硫酸铵沉淀法、联合凝胶过滤层析和离子交换层析法、Protein A亲和层析法。研究爬行动物体液免疫对研究动物免疫的进化及对病原控制具有重要意义。

关键词：爬行动物体液免疫免疫球蛋白纯化

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鹭科和鸬鹚科卵黄抗体的纯化

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中国比较医学杂志 2007年第11期17卷 659-661页

作者：杨帆林树柱刘先菊全雄志秦川张连峰中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心北京100021

目的纯化鹭科具有代表性的夜鹭及鸬鹚科具有代表性的鸬鹚的卵黄抗体IgY。方法采用了水稀释法和硫酸铵分级沉淀法粗提IgY,再过HiTrap IgY Purification HP柱子进一步纯化。结果经两步纯化,得到了纯化的鸬鹚和夜鹭的卵黄抗体IgY,经SDS-PAG... 详细信息

目的纯化鹭科具有代表性的夜鹭及鸬鹚科具有代表性的鸬鹚的卵黄抗体IgY。方法采用了水稀释法和硫酸铵分级沉淀法粗提IgY,再过HiTrap IgY Purification HP柱子进一步纯化。结果经两步纯化,得到了纯化的鸬鹚和夜鹭的卵黄抗体IgY,经SDS-PAGE检测为电泳纯,夜鹭和鸬鹚的卵黄抗体的相对分子质量约为180×103。结论证实了鸬鹚和夜鹭的卵黄抗体IgY的存在及其特性,为这两种鸟类的卵黄抗体IgY纯化,二级抗体制备提供了参考。

关键词：鹭科鸬鹚科亲和层析 IgY

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三种鸡形目雉科禽类卵黄抗体的纯化及二抗的制备

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中国比较医学杂志 2007年第11期17卷 652-655页

作者：杨帆刘先菊林树柱秦川张连峰中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心北京100021

目的纯化三种鸡形目雉科的禽类孔雀、鹌鹑、贵妃鸡的卵黄抗体IgY,并且免疫家兔制备抗血清。方法采用了水稀释法,HiTrap IgYPurification HP免疫亲和层析法和硫酸铵沉淀法纯化IgY。免疫家兔制备抗血清,免疫双扩散法测定效价。Protein-A... 详细信息

目的纯化三种鸡形目雉科的禽类孔雀、鹌鹑、贵妃鸡的卵黄抗体IgY,并且免疫家兔制备抗血清。方法采用了水稀释法,HiTrap IgYPurification HP免疫亲和层析法和硫酸铵沉淀法纯化IgY。免疫家兔制备抗血清,免疫双扩散法测定效价。Protein-A亲和纯化兔抗IgY血清IgG。结果经亲和纯化和盐析纯化,得到了孔雀、鹌鹑、贵妃鸡的卵黄抗体IgY,经SDS-PAGE检测为电泳纯,孔雀、鹌鹑、贵妃鸡的卵黄抗体IgY的相对分子质量约为180×103。免疫后经Protein-A亲和纯化后获得了兔抗IgY的IgG。结论证实了孔雀、鹌鹑、贵妃鸡的卵黄抗体IgY的存在及其特性。雉科鸡形目禽类卵黄抗体的纯化方法相似,可以推广到鸡形目其它禽类的卵黄抗体的纯化中,获得的抗血清可以进一步进行标记和今后抗原的检测。

关键词：孔雀鹌鹑贵妃鸡亲和纯化 IgY

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卵黄抗体的分离提取和纯化方法

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中国比较医学杂志 2007年第11期17卷 I0008-I0009,I0013页

作者：杨帆张连峰中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心北京100021

卵黄抗体性能稳定,具有较强抵抗热酸、碱的能力,室温下可保持6个月的活性,4℃下放置几年活性不减,易于大规模生产等许多优点,卵黄免疫球蛋白的纯化方法和哺乳动物的纯化方法不同,包括有机物沉淀法,有机溶剂抽提法,天然胶法和水稀释法等... 详细信息

卵黄抗体性能稳定,具有较强抵抗热酸、碱的能力,室温下可保持6个月的活性,4℃下放置几年活性不减,易于大规模生产等许多优点,卵黄免疫球蛋白的纯化方法和哺乳动物的纯化方法不同,包括有机物沉淀法,有机溶剂抽提法,天然胶法和水稀释法等粗提方法;凝胶过滤层析,离子交换层析和亲和层析等精细纯化方法。本文就卵黄抗体的分离和纯化方法的优缺点作一比较。

关键词： IgY 卵黄纯化

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黑线毛足鼠和金仓鼠血清IgG的纯化及抗血清的制备

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中国比较医学杂志 2007年第11期17卷 656-658,I0002页

作者：刘先菊林树柱杨帆李万波秦川张连峰中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心北京100021

目的纯化黑线毛足鼠和金仓鼠血清IgG,制备兔抗金仓鼠和黑线毛足鼠血清IgG的抗血清。方法用Hitrap Protein G亲和层析纯化黑线毛足鼠和金仓鼠血清IgG,经SDS-PAGE电泳鉴定纯度,标准免疫方法免疫兔子制备抗血清。结果黑线毛足鼠和金仓鼠血... 详细信息

目的纯化黑线毛足鼠和金仓鼠血清IgG,制备兔抗金仓鼠和黑线毛足鼠血清IgG的抗血清。方法用Hitrap Protein G亲和层析纯化黑线毛足鼠和金仓鼠血清IgG,经SDS-PAGE电泳鉴定纯度,标准免疫方法免疫兔子制备抗血清。结果黑线毛足鼠和金仓鼠血清IgG对protein G有很高的亲合性,用Hitrap Protein G亲和层析纯化,得到高纯度黑线毛足鼠和金仓鼠IgG,利用纯化的IgG作抗原制备了高效价的抗血清,免疫双扩散测定效价达1∶32和1∶16。结论证实黑线毛足鼠和金仓鼠IgG和Protein G具有很高的亲和性,Protein G亲和层析是纯化黑线毛足鼠和金仓鼠IgG有效的方法之一,制备了黑线毛足鼠和金仓鼠IgG的抗血清。

关键词：亲和层析黑线毛足鼠金仓鼠 IgG 二级抗体

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黄鳝IgM的分离纯化及兔抗黄鳝IgM抗血清的制备

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中国比较医学杂志 2007年第11期17卷 644-647页

作者：林树柱李万波刘先菊杨帆全雄志宋铭晶全志云秦川张连峰中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心北京100021

目的分离纯化黄鳝血清免疫球蛋白,制备其兔抗血清,并检测抗血清的特异性。方法用Protein A亲和层析的方法纯化黄鳝血清免疫球蛋白,通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测蛋白的纯度,免疫大耳白兔制备抗血清,利用免疫双扩散检测抗血清的效价,通... 详细信息

目的分离纯化黄鳝血清免疫球蛋白,制备其兔抗血清,并检测抗血清的特异性。方法用Protein A亲和层析的方法纯化黄鳝血清免疫球蛋白,通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测蛋白的纯度,免疫大耳白兔制备抗血清,利用免疫双扩散检测抗血清的效价,通过western blotting检测抗血清的特异性。结果纯化了黄鳝血清免疫球蛋白,免疫双扩散法测定兔抗黄鳝免疫球蛋白血清效价为1∶32,western blotting结果显示抗血清具有很好的特异性。结论成功纯化了黄鳝免疫球蛋白,制备了兔抗黄鳝IgM抗血清,为建立黄鳝的血清学检测系统奠定了基础。

关键词：亲和层析黄鳝免疫球蛋白抗血清

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