检索结果-内蒙古大学图书馆

Zoological Research 2012年第1期33卷 7-13页

作者：王文广黄晓燕徐娟孙晓梅代解杰李琦涵中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所全国医学灵长类研究中心云南昆明650118

树鼩是灵长类动物的近亲,且具有体型小、繁殖周期短、饲养管理成本低等优点,长期以来被认为有望替代灵长类动物用于人类疾病的动物模型研究。该文研究了肠道病毒EV71对幼年中缅树鼩的感染特点,探索建立EV71感染树鼩动物模型及替代灵长... 详细信息

树鼩是灵长类动物的近亲,且具有体型小、繁殖周期短、饲养管理成本低等优点,长期以来被认为有望替代灵长类动物用于人类疾病的动物模型研究。该文研究了肠道病毒EV71对幼年中缅树鼩的感染特点,探索建立EV71感染树鼩动物模型及替代灵长类动物的可行性。实验分别采用灌胃、滴鼻和尾静脉注射3种方式,感染3月龄树鼩,定期观察动物临床症状和血常规变化和定期采集血液和粪便样品,并使用中和抗体试验、reverse transcription-PCR(RT-PCR)和Real-TimePCR等技术,检测相关样品中和抗体效价、病毒核酸及载量变化。结合组织病理学检查,分析感染病变特点。研究结果发现,实验组树鼩体温在第4天前后开始升高,白细胞、淋巴细胞也有类似趋势;3种攻毒方式均可检测到病毒载量,峰值出现在第10天前后,灌胃途径尤为明显,血清的最大中和抗体效价为1:16。感染EV71病毒的树鼩2周左右出现急性松弛性瘫痪,大体解剖发现伴有尿潴留症状,组织病理学检查发现在脑、肺、肠、脾脏、肾脏等部位发生病变。结果表明,EV71病毒通过灌胃、滴鼻和静脉注射3种方式均可以感染中缅树鼩,并使之出现神经系统及相关病变,该实验为将来研究EV71感染树鼩致病机理、建立手足口病树鼩动物模型奠定了理论基础。

关键词：手足口病 EV71 中缅树鼩动物模型

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吸附无细胞百日咳-白喉-破伤风-乙型肝炎-Sabin株灭活脊髓灰质炎联合疫苗加强免疫效果及安全性评价

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中国生物制品学杂志 2020年第1期33卷 6-12,18页

作者：李洪哲郑惠文陈梦娇邓燕许秀雯叶慧刘小畅孙明波杨净思中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所

目的评价不同剂量配比及制备工艺的吸附无细胞百日咳-白喉-破伤风-乙型肝炎-Sabin株灭活脊髓灰质炎联合疫苗(DTaP-HepB-sIPV)免疫大鼠后加强免疫效果及安全性。方法以中、低剂量与铝佐剂相互配伍的不同sIPV配方设计4个DTaP-HepB-sIPV联... 详细信息

目的评价不同剂量配比及制备工艺的吸附无细胞百日咳-白喉-破伤风-乙型肝炎-Sabin株灭活脊髓灰质炎联合疫苗(DTaP-HepB-sIPV)免疫大鼠后加强免疫效果及安全性。方法以中、低剂量与铝佐剂相互配伍的不同sIPV配方设计4个DTaP-HepB-sIPV联合疫苗实验组,即中剂量含铝佐剂sIPV组(A组)、中剂量不含铝佐剂sIPV组(B组)、低剂量含铝佐剂sIPV组(C组)、低剂量不含铝佐剂sIPV组(D组),并设相应各组分的对照组和Infanrix hexaTM疫苗参考组。以已完成3剂基础免疫的Wistar大鼠为实验动物,在全程免疫第16个月接种1剂次加强免疫,进行安全性评价,并比较加强免疫前后各组大鼠血清中各组分抗体水平、中和抗体几何平均滴度(GMT)及阳转率,同时观察加强免疫对大鼠外周血中淋巴细胞的影响。结果加强免疫后未观察到不良反应,大鼠接种部位未见红肿、硬结、溃烂等现象,且各组大鼠体重维持稳定。加强免疫后30 d,各组大鼠各型别脊灰病毒中和抗体均为阳性,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型抗体阳转率A组分别为100%、71.4%、85.7%,B组分别为71.4%、85.7%、100%,C组分别为80%、80%、100%,D组分别为71.4%、100%、85.7%;A组诱导的各型别脊灰病毒中和抗体GMT均高于B组,且可达到或超过参考组;B、D组诱导产生的各型脊灰病毒中和抗体GMT均能达到同等剂量相应对照组水平。加强免疫后,各组百白破各组分抗体GMT有5~106倍增长,联合疫苗实验组GMT与对照组相比,总体上差异无统计学意义(P>0.05)。加强免疫后,乙肝抗体阳转率乙肝对照组为66.7%,B组为55.6%,C组为50%,A组为16.7%,D组为14.3%,参考组为0%;各组Anti-HBsAg水平有不同程度的升高,但两两相比,各组差异均无统计学意义(P>0.05)。结论DTaPHepB-sIPV具有良好的安全性,sIPV中剂量含铝佐剂的DTaP-HepB-sIPV联合疫苗所诱导的各抗体水平更加稳定持久,可作为未来疫苗最佳配比的参考。

关键词：吸附无细胞百日咳白喉破伤风乙型肝炎 Sabin株灭活脊髓灰质炎加强免疫安全性

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腮腺炎病毒蛋白组分疫苗的免疫效果

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中国生物制品学杂志 2008年第11期21卷 981-984页

作者：梁燕杨子江董承红马绍辉崔萍芳王丽春刘龙丁史长军李琦涵中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118

目的观察腮腺炎病毒蛋白组分疫苗的免疫效果。方法SP株腮腺炎病毒液经灭活、浓缩、裂解后,采用SP SepharoseTM Fast Flow阳离子层析柱及Sepharose CL-4B分子筛层析柱纯化,收集各峰样品,经12%SDS-PAGE、Western blot分析及HPLC检测。并取... 详细信息

目的观察腮腺炎病毒蛋白组分疫苗的免疫效果。方法SP株腮腺炎病毒液经灭活、浓缩、裂解后,采用SP SepharoseTM Fast Flow阳离子层析柱及Sepharose CL-4B分子筛层析柱纯化,收集各峰样品,经12%SDS-PAGE、Western blot分析及HPLC检测。并取第1峰样品免疫ICR及BALB/c小鼠,检测血清中和抗体效价及CTL杀伤活性。结果所收集的第1峰样品为单一的腮腺炎病毒蛋白组分。免疫ICR小鼠可诱导产生中和抗体,其免疫后各检测时间点的GMT水平与减毒活疫苗组相比,差异均无统计学意义;免疫BALB/c小鼠可诱导产生针对HN肽段的CTL杀伤活性,而减毒活疫苗组则未能诱导此特异性CTL反应。结论腮腺炎病毒蛋白组分疫苗在小鼠体内可诱导特异性细胞免疫和体液免疫应答,为新型腮腺炎疫苗的研制提供了实验依据。

关键词：腮腺炎病毒蛋白组分疫苗体液免疫细胞免疫

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重组B群脑膜炎球菌fHBP融合蛋白的表达和免疫原性研究

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中国生物工程杂志 2011年第5期31卷 28-33页

作者：彭世泽肖红剑彭正华毕妍伟孙振璐戴宗祥高丹丹徐维明李智华李健峰北京协和医学院/中国医学科学院医学生物学研究所昆明650118

采用PCR构建编码B群脑膜炎球菌fHBP蛋白V1变异型全长序列和V2变异型C结构域抗原表位融合蛋白的基因片段。并克隆入pET30a(+)载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),在其实现表达,表达量约占菌体蛋白总量的30%。表达产物经离子交换层析纯化后,获得... 详细信息

采用PCR构建编码B群脑膜炎球菌fHBP蛋白V1变异型全长序列和V2变异型C结构域抗原表位融合蛋白的基因片段。并克隆入pET30a(+)载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),在其实现表达,表达量约占菌体蛋白总量的30%。表达产物经离子交换层析纯化后,获得了纯度达到90%以上的融合蛋白。将融合蛋白免疫小鼠,对其免疫原性进行了初步分析。结果显示,经2次腹腔免疫,血清IgG滴度达到15 849,同时杀菌力实验显示此融合蛋白能诱导针对B群脑膜炎球菌的补体依赖的杀菌反应。表明此融合蛋白具有较好的免疫原性,为B群脑膜炎球菌蛋白疫苗的研究提供了一定的理论基础。

关键词：脑膜炎奈瑟氏菌 fHBP 原核表达融合蛋白

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重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子壳聚糖-海藻酸钠微囊的制备

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中国生物制品学杂志 2010年第10期23卷 1099-1101页

作者：戴宗祥姬秋彦杨增福杨旭李健峰李智华徐维明中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118

目的以壳聚糖和海藻酸钠为原料,制备重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)微囊,探讨开发口服蛋白多肽类药物的可行性。方法以rhGM-CSF为药物模型,通过壳聚糖与海藻酸钠聚电解质的络合反应制备rhGM-CSF壳聚糖-海藻酸钠微囊,观察... 详细信息

目的以壳聚糖和海藻酸钠为原料,制备重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)微囊,探讨开发口服蛋白多肽类药物的可行性。方法以rhGM-CSF为药物模型,通过壳聚糖与海藻酸钠聚电解质的络合反应制备rhGM-CSF壳聚糖-海藻酸钠微囊,观察微囊的形态大小,测定其包封率,不同pH值下的膨胀度和体外释放率。结果制备的rhGM-CSF壳聚糖-海藻酸钠微囊呈均匀、完整的圆球形,平均直径1mm左右;包封率达80%以上;在模拟肠液(磷酸盐缓冲液,pH7.4)中浸泡3h,膨胀度可达600%,药物释放率达85%以上。结论壳聚糖-海藻酸钠微囊具有肠溶控释作用,有望成为rhGM-CSF等蛋白类口服药物的控释载体。

关键词：壳聚糖海藻酸钠微囊粒细胞巨噬细胞集落刺激因子,重组

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轮状病毒疫苗的研究进展

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中国生物制品学杂志 2010年第7期23卷 786-789页

作者：张艳魏海涛陈元鼎中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118

轮状病毒(Rotavirus,RV)是世界范围内引起婴幼儿腹泻的主要病原体。RV疫苗的研制工作已取得了很大进展,但仍存在较大缺陷。目前投入使用的3种RV疫苗虽然能够对重症腹泻起到良好的保护作用,但却不能很好地预防RV感染,因此继续研制新的RV... 详细信息

轮状病毒(Rotavirus,RV)是世界范围内引起婴幼儿腹泻的主要病原体。RV疫苗的研制工作已取得了很大进展,但仍存在较大缺陷。目前投入使用的3种RV疫苗虽然能够对重症腹泻起到良好的保护作用,但却不能很好地预防RV感染,因此继续研制新的RV疫苗十分重要。本文对RV及RV疫苗的研究进展作一综述。

关键词：轮状病毒属轮状病毒疫苗

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生物反应器大规模培养脊髓灰质炎病毒

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中国生物制品学杂志 2008年第12期21卷 1083-1084页

作者：衡燮李桂兰奚光跃温嘉纳沈伟何秀莲唐成丽廖国阳姜述德孙明波中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118

目的应用生物反应器大规模培养脊髓灰质炎病毒。方法用7L、75L和550L生物反应器逐级放大培养Vero细胞,每天取样进行细胞计数。在550L生物反应器中培养脊髓灰质炎病毒,观察细胞病变,并检测病毒感染性滴度。结果一级细胞培养(灌流培养法)... 详细信息

目的应用生物反应器大规模培养脊髓灰质炎病毒。方法用7L、75L和550L生物反应器逐级放大培养Vero细胞,每天取样进行细胞计数。在550L生物反应器中培养脊髓灰质炎病毒,观察细胞病变,并检测病毒感染性滴度。结果一级细胞培养(灌流培养法)、二级细胞培养(循环培养法)和三级细胞培养(批培养法)的平均细胞密度分别为2.79×106、2.38×106和1.04×106个/ml,一级培养的细胞倍增数最高;病毒培养体积达350L,病毒收获液滴度大于7.625lgCCID50∕ml。结论通过三级放大工艺,可大规模培养脊髓灰质炎病毒。

关键词：生物反应器脊髓灰质炎病毒微载体 Vero细胞

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A组轮状病毒NSP6蛋白表达及免疫学性质研究(英文)

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中国生物工程杂志 2009年第9期29卷 33-39页

作者：李传印范耀春文喻玲张艳魏海涛陈元鼎中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118

轮状病毒(RV)NSP6与NSP5由同一基因片段编码,至今对NSP6性质了解很少。用基因重组表达和免疫学方法,重组表达了A组人RVNSP6蛋白,进行了NSP6的动物免疫及其抗原反应性、免疫原性研究以及RV感染细胞中NSP6的合成及亚细胞分布研究。研究结... 详细信息

轮状病毒(RV)NSP6与NSP5由同一基因片段编码,至今对NSP6性质了解很少。用基因重组表达和免疫学方法,重组表达了A组人RVNSP6蛋白,进行了NSP6的动物免疫及其抗原反应性、免疫原性研究以及RV感染细胞中NSP6的合成及亚细胞分布研究。研究结果表明,NSP6可在原核系统中高效表达,表达蛋白占菌体总蛋白的34.2%;NSP6免疫豚鼠血清抗体可特异性识别菌体细胞中表达的NSP6和SA11及Wa病毒感染的MA104细胞中合成的NSP6蛋白;病毒感染细胞中合成的NSP6在感染后3h就可检测到,12h表达量达到最高;NSP6在病毒感染细胞质中呈弥散状分布,并主要积聚在细胞核的周围,未观察到毒质体样结构。研究结果对深入了解RVNSP6的结构与功能具有重要的意义,具有重要的潜在应用价值。

关键词：轮状病毒 NSP6 重组表达免疫学特性细胞内分布

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悬浮Vero细胞快速扩增轮状病毒

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中国生物制品学杂志 2010年第5期23卷 526-528,532页

作者：张标易山张光明谢天宏李鸿钧孙茂盛中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118

目的探讨在悬浮Vero细胞中快速扩增轮状病毒(RV)的方法。方法 Vero细胞经消化后,直接接种KMG1b7株RV。采用微量滴定法、PAGE和RT-PCR等方法比较悬浮扩增、静置培养及微载体发酵培养RV的感染性滴度、基因组核酸带型和型特异VP7基因序列;... 详细信息

目的探讨在悬浮Vero细胞中快速扩增轮状病毒(RV)的方法。方法 Vero细胞经消化后,直接接种KMG1b7株RV。采用微量滴定法、PAGE和RT-PCR等方法比较悬浮扩增、静置培养及微载体发酵培养RV的感染性滴度、基因组核酸带型和型特异VP7基因序列;采用电镜观察和Westernblot鉴定悬浮扩增RV的形态及结构蛋白的抗原性。结果悬浮细胞扩增的RV接种24h后病毒感染性滴度达峰值,为6.00lgCCID50/ml;而静置培养和微载体发酵培养分别在接种后(96±24)h和(48±6)h达峰值,分别为(6.00±0.25)lgCCID50/ml和(6.50±0.25)lgCCID50/ml。悬浮扩增的RV基因组呈典型的4-2-3-2G1血清型带型,G1型特异基因VP7序列未发生突变。悬浮扩增的RV形态和结构蛋白的抗原性未发生改变。结论在悬浮Vero细胞中扩增RV可以缩短病毒制备周期,提高病毒收获量,有利于RV疫苗的研制或生产。

关键词：轮状病毒 Vero细胞悬浮扩增

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HSV-1病毒感染细胞诱导蛋白HSRG1影响病毒基因转录的延伸

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中国科学：生命科学 2010年第3期40卷 210-217页

作者：吴文娟余娴李卫中郭磊刘龙丁王丽春李琦涵中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118

病毒刺激相关蛋白HSRG1是HSV-1病毒感染细胞时诱导表达的蛋白之一,本研究组曾报道其具有与转录调控蛋白相互作用的特性.为进一步分析HSRG1对病毒基因转录调控的影响,本研究在转染细胞中上调HSRG1分子的表达,发现它能够延缓HSV-1病毒的增... 详细信息

病毒刺激相关蛋白HSRG1是HSV-1病毒感染细胞时诱导表达的蛋白之一,本研究组曾报道其具有与转录调控蛋白相互作用的特性.为进一步分析HSRG1对病毒基因转录调控的影响,本研究在转染细胞中上调HSRG1分子的表达,发现它能够延缓HSV-1病毒的增殖.CAT分析结果也表明HSRG1对HSV-1多种病毒启动子的转录效率具有量效抑制作用.运用酵母双杂交及免疫沉淀技术表明,HSRG1与对RNA聚合酶Ⅱ(RNAPⅡ)的转录延伸具有重要作用的复合物P-TEFb(positive transcription elongation factor b,P-TEFb)中的调节亚基细胞周期蛋白T2(Cyclin T2)存在蛋白质相互作用,且Cyclin T2氨基端420氨基酸对二者的结合具有重要作用.荧光共定位实验表明,共转染的细胞中两蛋白的细胞内定位因二者相互作用而受影响.进一步利用CAT实验证实,HSRG1能够拮抗Cyclin T2对多种病毒启动子的转录激活作用,提示HSRG1对病毒复制增殖的抑制作用很可能是通过与Cyclin T2的结合而产生的,它具有阻断Cyclin T2的调控,影响病毒基因转录的延伸.

关键词： Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1) HSRG1 Cyclin T2 转录调节

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