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中国比较医学杂志 2021年第4期31卷 91-98页

作者：李国祥潘玥胡鹏杜廷福马开利中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所药物安全性评价研究中心昆明650118 中国医学科学院&北京协和医学院医学灵长类研究中心&神经科学中心北京100005

目的快速高效地构建一种人源SNCA(hSNCA)的全脑转基因鼠,并初步探究α-突触核蛋白过表达对小鼠中枢神经系统的影响。方法对新生乳鼠进行双侧侧脑室(intracerebroventricular,ICV)注射携带人源SNCA-EGFP或EGFP的重组腺相关病毒2/9(recomb... 详细信息

目的快速高效地构建一种人源SNCA(hSNCA)的全脑转基因鼠,并初步探究α-突触核蛋白过表达对小鼠中枢神经系统的影响。方法对新生乳鼠进行双侧侧脑室(intracerebroventricular,ICV)注射携带人源SNCA-EGFP或EGFP的重组腺相关病毒2/9(recombinant adeno-associated virus2/9,rAAV2/9)(1.5×10^(13) genome copies(GC)/mL),在2周和3个月龄用免疫荧光及Western blot检测α-突触核蛋白的表达模式及亚细胞定位,并用免疫荧光及免疫组化探究星形胶质细胞、小胶质细胞及病理性α-突触核蛋白的变化。结果用rAAV2/9侧脑室注射的方式成功构建了hSNCA全脑转基因鼠,α-突触核蛋白在整个脑中广泛表达,且趋向于在嗅球、皮层、海马、间脑及中脑中高表达。进一步研究发现,在嗅球、皮层、海马的CA2/3区及小脑的浦肯野细胞中观测到α-突触核蛋白在神经元胞核中表达的现象,α-突触核蛋白过表达引起了胶质增生。此外,在嗅球及大脑皮层检测到α-突触核蛋白Ser129磷酸化(pS129)及聚集。结论快速成功地构建了一种hSNCA全脑转基因小鼠模型,其α-突触核蛋白持久地高表达,并出现胶质增生和病理性α-突触核蛋白表达的现象,为研究α-突触核蛋白的生理功能及其在帕金森病(Parkinson’s disease,PD)中的作用奠定一定的基础。

关键词： α-突触核蛋白转基因乳鼠注射胶质增生

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α-突触核蛋白的核易位机制及其功能

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中国生物化学与分子生物学报 2020年第10期36卷 1138-1144页

作者：李国祥杜廷福马开利中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所药物安全性评价研究中心昆明650118 中国医学科学院&北京协和医学院医学灵长类研究中心&神经科学中心北京100005

α-突触核蛋白(alpha-synuclein,α-Syn)是一种脑内含量丰富的可溶性蛋白质,既能参与正常突触功能的维持和囊泡运输,又与多种神经退行性疾病有关,然而其确切的功能目前仍未完全清楚。已有研究表明,在生理条件下,α-突触核蛋白主要定位... 详细信息

α-突触核蛋白(alpha-synuclein,α-Syn)是一种脑内含量丰富的可溶性蛋白质,既能参与正常突触功能的维持和囊泡运输,又与多种神经退行性疾病有关,然而其确切的功能目前仍未完全清楚。已有研究表明,在生理条件下,α-突触核蛋白主要定位在细胞质中,少部分能定位在细胞核中,具有多种生物学功能。在帕金森病(Parkinson’s disease,PD)、阿尔兹海默病(Alzheimer’s disease,AD)患者大脑及氧化应激的细胞中,均发现α-突触核蛋白趋向于向细胞核中聚集。α-突触核蛋白核易位受到多种因素的精密调控,除自身氨基酸序列外,还受到其129位丝氨酸磷酸化(S129)水平、点突变(A53T,A30P,G51D)、细胞内Ca2+水平的影响,以及核输入蛋α(importin-α)、三结构域蛋白28(tripartite motif-containing protein 28,TRIM28)等多种蛋白质的精密调控,其异常的核易位则与细胞毒性相关。核易位的α-突触核蛋白能和组蛋白去乙酰化酶及组蛋白甲基化酶相互作用,从而改变组蛋白乙酰化和甲基化水平,最终影响染色质的稳定性。此外,α-突触核蛋白能与DNA相互作用,从而改变DNA构象、参与DNA损伤修复及基因表达调控。本文综述了α-突触核蛋白的结构特征,生理及病理条件下的细胞核内定位现象,详细的核易位机制及其在胞核中的功能研究进展,将有助于了解α-突触核蛋白生理功能及其在疾病发生发展中的作用。

关键词： α-突触核蛋白核易位功能

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高效制备重组人α-突触核蛋白原纤维方法的建立

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生物学杂志 2020年第2期37卷 96-100页

作者：罗海玉吴正存马开利中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所药物安全性评价研究中心昆明650118 中国医学科学院北京协和医学院医学灵长类研究中心&神经科学中心北京100005

通过设计PCR引物,从pcDNA3.1-α-syn载体中扩增人α-突触核蛋白的编码DNA序列,将其克隆至PGEX-5X-1载体中,成功构建了人α-突触核蛋白高效原核表达载体pGEX-5X-1-syn。转化BL21菌株后进行IPTG诱导,通过对诱导剂浓度、诱导时间和温度、... 详细信息

通过设计PCR引物,从pcDNA3.1-α-syn载体中扩增人α-突触核蛋白的编码DNA序列,将其克隆至PGEX-5X-1载体中,成功构建了人α-突触核蛋白高效原核表达载体pGEX-5X-1-syn。转化BL21菌株后进行IPTG诱导,通过对诱导剂浓度、诱导时间和温度、纯化方法和原纤维培养条件的优化,获取了重组人α-突触核蛋白原纤维,采用硫黄素T染色和透射电镜方法确认原纤维的制备情况。结果发现,经终浓度为1.0 mmol/L的IPTG,37℃条件下诱导3 h,人α-突触核蛋白得到大量表达。采用GST融合蛋白纯化磁珠进行蛋白纯化,可快速高效获取高纯度的人α-突触核蛋白,纯化产量可达到25 mg/L。浓度为9 mg/mL的人α-突触核蛋白,在37℃,1000 r/min震荡条件下培养至6 d,可大量成功制备人α-突触核蛋白原纤维,并在透射电镜下成功观察到了原纤维的形态。α-突触核蛋白原纤维是建立PD模型的重要材料,以上结果建立了一套可快速高效制备重组人α-突触核蛋白原纤维的方法,为PD的动物模型及细胞模型的建立提供了重要的研究材料。

关键词：帕金森氏病 α-突触核蛋白原纤维 PGEX-5X-1载体 GST

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基于α-突触核蛋白原纤维的帕金森氏疾病模型的研究进展

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中国比较医学杂志 2019年第9期29卷 103-108页

作者：罗海玉吴正存马开利中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所药物安全性评价研究中心昆明650118 中国医学科学院&北京协和医学院医学灵长类研究中心&神经科学中心北京100005

帕金森氏病(Parkinson’s disease,PD)是一种常见的神经系统退行性疾病,主要病理学标志为中脑黑质致密部可见部分的一种球状包涵体,称为路易小体(Lewy bodies,LBs)。LBs的主要成分为部分中空的放射状淀粉样纤维,而该淀粉样纤维的主要成... 详细信息

帕金森氏病(Parkinson’s disease,PD)是一种常见的神经系统退行性疾病,主要病理学标志为中脑黑质致密部可见部分的一种球状包涵体,称为路易小体(Lewy bodies,LBs)。LBs的主要成分为部分中空的放射状淀粉样纤维,而该淀粉样纤维的主要成分为α-突触核蛋白(α-synuclein,AS)。AS与PD的发生有着密切的关系,是PD致病机制研究中的关键蛋白。AS的原纤维具有独特的传播特性,且能诱发产生与PD病理相类似的一系列特征,因此其可以作为建立PD模型的全新材料。本文就基于AS原纤维的PD模型的研究进展进行综述。

关键词：帕金森氏病 α-突触核蛋白原纤维疾病模型

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一种改良的恒河猴和食蟹猴促排卵后取卵术

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中国科技论文在线精品论文 2016年第9期9卷 881-886页

作者：高家红黄璋琼江勤芳曾桥吴正存李聪李云马开利中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所药物安全性评价研究中心昆明 650118 同济大学附属同济医院转化医学中心上海 200065

目的:探索一种经改良、微创、高效的恒河猴和食蟹猴促排卵后的手术取卵方法.方法:采用 B 超对促排卵后的食蟹猴和恒河猴卵巢进行定位及尺寸测量,然后采用自制的导尿管导尿以解除膀胱对卵巢的遮挡,在下腹部中央或两侧(靠近卵巢上方)行1.5... 详细信息

目的:探索一种经改良、微创、高效的恒河猴和食蟹猴促排卵后的手术取卵方法.方法:采用 B 超对促排卵后的食蟹猴和恒河猴卵巢进行定位及尺寸测量,然后采用自制的导尿管导尿以解除膀胱对卵巢的遮挡,在下腹部中央或两侧(靠近卵巢上方)行1.5～2.5 cm的小切口,暴露卵巢,然后用5 mL注射器配置23 Gauge针头负压抽吸卵泡.结果:共对11只恒河猴和13只食蟹猴行改良取卵术,恒河猴卵巢平均大小为2.2 cm×2.4 cm,食蟹猴卵巢平均大小为2.1 cm×2.4 cm,恒河猴手术切口平均大小为(2.3±0.2)cm,食蟹猴手术切口平均大小为(2.2±0.1)cm,手术总体平均时间为(44±10)min,恒河猴平均获卵数为(26.5±15.8)个,食蟹猴平均获卵数为(25.1±16.3)个.结论:在B超下确认卵泡位置和大小、导尿后在下腹部中央或两侧行小切口的取卵术是一种可行、低创伤、高效的取卵方式.

关键词：动物学恒河猴食蟹猴促排卵 B超定位导尿

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非人灵长类动物在体外受精-胚胎移植实验中的管理措施

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医学动物防制 2014年第7期30卷 709-710,714页

作者：江勤芳高家红黄璋琼罕园园李聪吴正存马开利中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所药物安全性评价研究中心云南昆明650118

非人灵长类动物(Non-human Primates)已被广泛应用于人类医学和生殖生物学研究,其在体外受精-胚胎移植(In Vitro Fertilization and Embryo Transfer)实验中的管理措施对实验研究的顺利进行至关重要。根据实践经验,本文对于非人灵长实... 详细信息

非人灵长类动物(Non-human Primates)已被广泛应用于人类医学和生殖生物学研究,其在体外受精-胚胎移植(In Vitro Fertilization and Embryo Transfer)实验中的管理措施对实验研究的顺利进行至关重要。根据实践经验,本文对于非人灵长实验动物的饲养环境条件、日常饲喂管理、实验中动物的护理以及手术后预防性治疗等关键环节进行了叙述总结,以供参考。

关键词：非人灵长类动物体外受精-胚胎移植管理措施

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树鼩全基因组分泌蛋白的预测分析

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中国比较医学杂志 2014年第4期24卷 33-37页

作者：罕园园马开利中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所药物安全性评价研究中心云南昆明650118

目的综合了解树鼩的分泌蛋白的信息。方法利用真核生物分泌蛋白预测流程EuSecPred 2.0对树鼩的分泌蛋白进行全基因组预测,并对获得的分泌蛋白及所携带的信号肽进行系统分析。结果树鼩全基因组蛋白基因中鉴定获得279个分泌蛋白,占基因组... 详细信息

目的综合了解树鼩的分泌蛋白的信息。方法利用真核生物分泌蛋白预测流程EuSecPred 2.0对树鼩的分泌蛋白进行全基因组预测,并对获得的分泌蛋白及所携带的信号肽进行系统分析。结果树鼩全基因组蛋白基因中鉴定获得279个分泌蛋白,占基因组全部编码基因的7.2%。对其功能和结构域进行注释分析,发现了以水解酶类、行使蛋白结合与离子结合功能蛋白质及初级代谢过程相关蛋白为主的分泌蛋白。氨基酸组成分析表明,树鼩分泌蛋白及其信号肽主要由疏水性氨基酸组成,信号肽剪切位点有部分亲水性氨基酸的存在。基序分析发现,分泌蛋白信号肽中未存在保守基序,而分泌蛋白内部存在GxHxCGG[FSV]L[IV][RAS][EP]D[WF]VLTAAHC、[KG]PPGV[YF]T[RK][VI][SC]x[YF][VL][DS]WIQx[TV][MI][RK]、[DT][SA][CF][QK]GDSGGPLVCNGV[LA]QG[IL]V、GY[HL][FL]CGG[SAT]L[ILV]S[EDP][CR]WV[LV][TS]AAHCF、N[IV][FI]FSP[LV]S[IV][SA][TA]ALAMLSLG[AT]xNDTLTQ[IL]L[EQ][GV]LGF[ND]LT[ES]T[SP]E 5种基序。结论在全基因组范围对树鼩分泌蛋白进行预测分析,有助于进一步研究树鼩机体功能调控机制及动物模型的开发。

关键词：树鼩基因组分泌蛋白信号肽基序

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非人灵长类动物体外受精-胚胎移植(IVF-ET)手术室建设及使用探讨

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中国比较医学杂志 2014年第5期24卷 72-75页

作者：江勤芳高家红曾桥唐东红和占龙马开利中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所药物安全性评价研究中心昆明650118 同济大学转化医学中心上海200039

非人灵长类动物已广泛应用于与人类相关的生殖模型研究,而生殖和转基因操作相关手术室的硬件和软件建设是保证研究顺利开展的前提条件。因此,本文结合我中心的实际建设情况,就非人灵长类动物体外受精-胚胎移植相关手术室的合理建设及可... 详细信息

非人灵长类动物已广泛应用于与人类相关的生殖模型研究,而生殖和转基因操作相关手术室的硬件和软件建设是保证研究顺利开展的前提条件。因此,本文结合我中心的实际建设情况,就非人灵长类动物体外受精-胚胎移植相关手术室的合理建设及可能存在的问题等进行了探讨,为相关科研工作人员提供参考。

关键词：非人灵长类动物体外受精-胚胎移植手术室

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阿尔兹海默症转基因小鼠模型研究进展及评价

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中国实验动物学报 2013年第6期21卷 97-101页

作者：罕园园马开利中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所药物安全性评价研究中心昆明650118

随着世界人口的老龄化,阿尔兹海默症已经成为严重威胁老年人健康的主要疾病之一,研究并建立可靠的阿尔兹海默症动物模型对于探明疾病的病因、发病机制及防治药物的开发均具有重要意义。本文就目前使用最为广泛和研究最为深入的转基因小... 详细信息

随着世界人口的老龄化,阿尔兹海默症已经成为严重威胁老年人健康的主要疾病之一,研究并建立可靠的阿尔兹海默症动物模型对于探明疾病的病因、发病机制及防治药物的开发均具有重要意义。本文就目前使用最为广泛和研究最为深入的转基因小鼠模型的病理、行为学变化特点及其在阿尔兹海默症研究中的应用和发现作一介绍。

关键词：阿尔兹海默症转基因小鼠模型

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