检索结果-内蒙古大学图书馆

中国医药导报 2025年第6期22卷 165-170页

作者：张凤莲钏鸿云童菲袁广波李诚伟廖国阳北京协和医学院中国医学科学院医学生物学研究所云南昆明650000

目的构建用于检测肺炎支原体抗原的双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)法,并应用其检测不同耐药表型临床分离株抗原。方法鉴定抗肺炎支原体单克隆抗体4G4、8H6的抗体结合位点竞争性及结合活性;以4G4为包被抗体,8H6为酶标抗体建立双抗体... 详细信息

目的构建用于检测肺炎支原体抗原的双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)法,并应用其检测不同耐药表型临床分离株抗原。方法鉴定抗肺炎支原体单克隆抗体4G4、8H6的抗体结合位点竞争性及结合活性;以4G4为包被抗体,8H6为酶标抗体建立双抗体夹心ELISA法,优化其线性范围、稳定性、特异性、广泛适用性与准确度。结果单克隆抗体4G4、8H6具有不同的抗原结合位点,半数最大效应浓度(EC50)分别为0.4113、0.1881μg/ml;最佳反应体系为包被抗体浓度4μg/ml,酶标抗体1∶4000稀释,封闭液为含2%BSA、2%蔗糖的0.01 mol/L PBS。该方法线性范围为1~32 U,线性回归方程Y=0.0742X+0.073,R2=0.9969;批间变异系数为0.4784%~7.9613%,批内变异系数为1.6158%~13.1754%;特异性与广泛适用性佳,不与新型冠状病毒感染、流感、猴痘病毒及多种细菌交叉反应,可检测不同耐药株抗原;与肺炎支原体抗原检测商用试剂盒(ELISA法与胶体金法)检测结果符合率96.7%~103.3%。结论该双抗体夹心ELISA法线性范围优、稳定性强、特异性好、适用广、准确度高,可用于肺炎支原体疫苗生产中的抗原定量。

关键词：肺炎支原体双抗体夹心酶联免疫吸附试验法抗原检测单克隆抗体

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柯萨奇病毒A组6型和B组1型混合感染叙利亚金黄地鼠动物模型的实验研究

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中国比较医学杂志 2025年第1期35卷 30-40页

作者：侯婧涵段素琴徐鸿界孙文亭李明学李艳艳靳玮华陈丽雄刘权赵远杨凤梅和占龙中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 呼吸与共病全国重点实验室北京100005

目的建立柯萨奇病毒A组6型(coxsackievirus A6,CVA6)和B组1型(coxsackievirus B1,CVB1)混合感染叙利亚金黄地鼠手足口病动物模型。方法本研究将24只地鼠分为CVA6感染组、CVB1感染组、CVA6和CVB1混合感染组及对照组,采取鼻腔滴注病毒液和... 详细信息

目的建立柯萨奇病毒A组6型(coxsackievirus A6,CVA6)和B组1型(coxsackievirus B1,CVB1)混合感染叙利亚金黄地鼠手足口病动物模型。方法本研究将24只地鼠分为CVA6感染组、CVB1感染组、CVA6和CVB1混合感染组及对照组,采取鼻腔滴注病毒液和PBS方式造模。监测记录15 d内临床指标、生理指标、排毒情况,并在感染后第7天(D7)选取动物进行组织病理学和病毒抗原与核酸检测。结果单独和混合感染的实验组地鼠均出现类似人类手足口病的临床症状;WBC、NEUT、LYMPH结果提示病毒感染血象特征;咽拭子、粪便、血液和组织中均能检测到两种病毒核酸;粪便样品中能分离出两种病毒;脑等组织出现病理损伤表现及CVA6和CVB1病毒抗原蛋白和核酸的阳性共定位。结论经鼻腔同时滴注CVA6和CVB1混合液能够成功感染叙利亚金黄地鼠,复制出类似人类手足口病的疱疹、造成病毒性心肌炎和脑炎病理损伤等,结果显示混合感染组相较于单独感染组病情更为严重,表现为临床症状加重、病毒复制增高以及组织病理损伤明显。本研究为开展人类肠道病毒混合感染基础和临床研究提供一定借鉴和参考。

关键词：叙利亚金黄地鼠混合感染动物模型柯萨奇病毒A组6型柯萨奇病毒B组1型手足口病

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人乳头瘤病毒39型遗传变异分析及T细胞与B细胞抗原表位预测

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中华实验和临床病毒学杂志 2025年第1期39卷 9-17页

作者：张誉小杨一娟王丽蓝锶菡俞晶何洁张红平冯敏中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118 北京大学肿瘤医院云南医院云南省肿瘤医院昆明医科大学第三附属医院妇科昆明650118

目的分析人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)39基因组遗传变异特征,并对病毒早期蛋白(E1、E2、E6、E7)和晚期蛋白(L1、L2)的T、B细胞优势抗原表位进行预测和筛选。方法从临床样本和NCBI数据库中共获取70条HPV39全长序列构建进化树... 详细信息

目的分析人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)39基因组遗传变异特征,并对病毒早期蛋白(E1、E2、E6、E7)和晚期蛋白(L1、L2)的T、B细胞优势抗原表位进行预测和筛选。方法从临床样本和NCBI数据库中共获取70条HPV39全长序列构建进化树、分析基因多态性,并对病毒蛋白理化性质进行预测;采用IEDB和ABCpred预测T、B细胞抗原表位,并结合表位所在区域的二级结构,以及肽段的柔韧性、亲水性、表面可及性、抗原性评分等参数进一步筛选潜在优势抗原表位;最后对潜在优势抗原表位与12种高危型HPV进行同源性分析。结果HPV39突变株可分为两个进化分支,分布于不同进化分支的毒株具有其特定的突变模式。在不同病毒基因中,E7突变率最高,而E1突变率最低,但这些碱基/氨基酸突变未对病毒的理化性质产生明显影响。经预测和筛选后,L1、L2各获得5、6条B细胞潜在优势抗原表位;E1、E2、E6、E7分别获得18、10、4及1条HLA-I类T细胞潜在优势抗原表位;E1、E2、E6获得7、3及2条HLA-II类T细胞潜在优势抗原表位。同源性分析发现E1、E2、E6区域的T细胞抗原表位,以及L2中的B细胞抗原表位与HPV68、HPV33、HPV45和HPV59具有较高的同源性(93%~100%)。结论HPV39突变株可分为A、B两个主要进化分支,各进化分支具有其特定突变模式。病毒蛋白中含有可供进一步研究的T、B细胞潜在优势抗原表位,为HPV39相关多肽形式的疫苗和药物开发提供了更多理论依据。

关键词：人乳头瘤病毒39型遗传变异分析 T细胞 B细胞抗原表位预测

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云南德宏地区G6PD缺乏症的基因突变分析

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中国优生与遗传杂志 2025年第3期 577-581页

作者：易薇完颜张翔番云华张凯杨航边成杨昭庆德宏州人民医院检验科中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所医学遗传学研究室

目的分析云南德宏地区G6PD缺乏症患者的G6PD基因型特征,探讨基因突变与酶活性的关联性。方法采用DNA Sanger测序法对174名G6PD缺乏症患者的G6PD基因进行检测,分析突变型与G6PD活性之间的关联性。结果 G6PD缺乏症患者中致病突变检出率... 详细信息

目的分析云南德宏地区G6PD缺乏症患者的G6PD基因型特征,探讨基因突变与酶活性的关联性。方法采用DNA Sanger测序法对174名G6PD缺乏症患者的G6PD基因进行检测,分析突变型与G6PD活性之间的关联性。结果 G6PD缺乏症患者中致病突变检出率为86.21%(150/174),其中男性检出率为89.76%(114/127),女性检出率为76.60%(36/47)。占比较高的4种基因突变型分别为c.487G>A(54.00%)、c.1388G>A(16.67%)、c.1376G>T(14.67%)和c.392G>T(5.33%)。在中国人群中首次检测到c.563C>T和c.770G>A两种致病基因突变。此外还发现一些复合致病突变类型和基因多态位点。G6PD缺乏症患者中男性G6PD活性更低,在4种主要突变型中,c.392G>T突变型的G6PD活性显著高于c.487G>A、c.1388G>A和c.1376G>T三种突变型。结论云南德宏地区G6PD基因突变谱与其他地区有所不同,以c.487G>A突变多见,其酶活性显著低于c.392G>T突变。本研究进一步丰富了云南人群G6PD缺乏症的基因突变谱和表型谱。

关键词： G6PD缺乏症基因突变葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性罕见突变

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登革病毒对树鼩不同组织来源细胞的易感性及感染特性研究

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实验动物与比较医学 2025年第2期45卷 229-238页

作者：刘欣杞梦迪王文广罕园园陆美丽李娜代解杰陆彩霞北京协和医学院/中国医学科学院医学生物学研究所昆明650118 云南大学生命科学学院昆明650500

目的探究登革病毒(dengue virus,DENV)对树鼩不同组织来源细胞的易感性及感染特征,为扩充DENV的树鼩易感细胞库提供依据。方法将DENV以感染复数(multiplicity of infection,MOI)为0.02的剂量分别接种于树鼩皮肤成纤维细胞(tree shrew sk... 详细信息

目的探究登革病毒(dengue virus,DENV)对树鼩不同组织来源细胞的易感性及感染特征,为扩充DENV的树鼩易感细胞库提供依据。方法将DENV以感染复数(multiplicity of infection,MOI)为0.02的剂量分别接种于树鼩皮肤成纤维细胞(tree shrew skin fibroblasts,TSFs)、原代树鼩肾上皮细胞(primary tree shrew renal epithelial cells,pTRECs)、树鼩主动脉内皮细胞(tree shrew aortic endothelial cells,TAECs)、树鼩主动脉平滑肌细胞(tree shrew aortic smooth muscle cells,TASMCs)、树鼩肝细胞(tree shrew hepatocytes,THs)、树鼩角膜基质细胞(tree shrew corneal stromal cells,TCSCs)、树鼩脑微血管内皮细胞(tree shrew brain microvascular endothelial cells,TBMECs)及树鼩视网膜微血管内皮细胞(tree shrew retinal microvascular endothelial cells,TRMECs),用常规培养DENV的C6/36、Vero、A549及BHK-21细胞系作为阳性对照。在感染病毒后6 d内,每12 h用倒置显微镜观察各种细胞的病变效应,用实时荧光定量PCR检测细胞培养物中病毒核酸载量,绘制病毒增殖曲线,用噬斑实验检测病毒滴度。结果除TRMECs外,DENV对7种树鼩细胞均易感。随着感染时间的延长,7种树鼩细胞均出现变圆、脱落、坏死及裂解等明显的病变效应。在pTRECs、TBMECs、TASMCs、TAECs和THs这5种树鼩细胞的培养裂解物中检测到的病毒核酸载量与4种阳性对照细胞接近,大于4×10^(7)拷贝/μL。以上5种树鼩细胞均能产生感染性子代病毒,其中3种树鼩细胞TAECs(3.13×10^(5)PFU/mL)、THs(2.03×10^(5)PFU/mL)、pTRECs(1.58×10^(5)PFU/mL)中的DENV滴度较接近阳性对照细胞C6/36(3.85×10^(5)PFU/mL),且能更早收获病毒。结论DENV对树鼩多种组织来源的细胞易感,且病毒增殖速度快于常见其他物种来源的传代细胞系,其中TAECs、THs和pTRECs尤其适于DENV增殖培养。同时,这些细胞可能参与DENV在树鼩体内的感染。

关键词：树鼩细胞登革病毒细胞病变效应病毒增殖曲线病毒感染

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病毒通过Rubicon抑制自噬晚期或干扰素的产生实现固有免疫逃逸的研究进展

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细胞与分子免疫学杂志 2025年第1期41卷 83-89页

作者：宿俊玮袁瑾王峰李珺岳磊严敏昆明医科大学基础医学院病原生物学与免疫学系云南昆明650500 浙江大学邵逸夫医院麻醉科浙江杭州310016 云南省普洱市中医医院检验科云南普洱665099 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南昆明650118

固有免疫反应是宿主抵御病毒感染的第一道防线。通过自噬靶向降解病原微生物,协同模式识别受体诱导干扰素(IFN)产生,是机体抵御病毒感染的重要途径。Rubicon,一种Run结构域Beclin 1相互作用和富含半胱氨酸结构域蛋白,对自噬和IFN产生具... 详细信息

固有免疫反应是宿主抵御病毒感染的第一道防线。通过自噬靶向降解病原微生物,协同模式识别受体诱导干扰素(IFN)产生,是机体抵御病毒感染的重要途径。Rubicon,一种Run结构域Beclin 1相互作用和富含半胱氨酸结构域蛋白,对自噬和IFN产生具有抑制效应。一方面,Rubicon作为磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)复合体的一种结合成分,通过不同的结构域分别与液泡蛋白分选34(Vps34)、紫外线辐射耐受相关基因(UVRAG)、小鸟苷三磷酸(GTP)激酶和RAS癌基因家族成员7(Rab7)相互作用,介导自噬成熟抑制;另一方面,Rubicon抑制核因子κB关键调节因子(NEMO)的泛素化和干扰素调节因子3(IRF3)的二聚化,进而阻断IFN产生相关的信号转导。研究发现卡波西肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)、乙型肝炎病毒(HBV)、仙台病毒(SeV)、丙型肝炎病毒(HCV)等多种病毒,通过调节Rubicon的表达或功能实现固有免疫逃逸,Rubicon有望成为抗病毒治疗的新靶点。

关键词：病毒 Rubicon 干扰素(IFN) 自噬固有免疫逃逸综述

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5种国产丙型肝炎病毒抗体胶体金检测试剂评价结果分析

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中国药事 2025年第4期39卷 439-444页

作者：宋彩花李红梅董贤雅胡安艳蔡玮杨晓娟中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118 保山市疾病预防控制中心保山678000

目的:评估市场上在售的国产丙型肝炎病毒(HCV)抗体胶体金检测试剂,为抗体筛查检测试剂选择方面提供依据。方法:选择市场上在售的5种国产HCV抗体胶体金检测试剂,对200份阴性样本和141份阳性样本进行检测。结果:GZWF的假阳性率和假阴性率... 详细信息

目的:评估市场上在售的国产丙型肝炎病毒(HCV)抗体胶体金检测试剂,为抗体筛查检测试剂选择方面提供依据。方法:选择市场上在售的5种国产HCV抗体胶体金检测试剂,对200份阴性样本和141份阳性样本进行检测。结果:GZWF的假阳性率和假阴性率均为0%;YKXC的假阳性率为1%,假阴性率为1.4%;BJWT的假阳性率为2%,假阴性率为1.4%;SHKH的假阳性率为0%,假阴性率为0.7%;HZAB假阳性率为1%,假阴性率为0%。结论:5种国产HCV抗体胶体金检测试剂的敏感性为98%^(1)00%,特异性为98.5%^(1)00%,敏感性和特异性均大于98%,说明总体质量较好,结果可靠,可作为一种快速高效发现丙肝感染者的筛查方法。

关键词：丙型肝炎病毒胶体金检测试剂评价

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奶牛高、低体细胞数乳区间微生物组和代谢组整合分析

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中国畜牧杂志 2025年第1期61卷 130-138页

作者：冯霄赵丝艺唐永杰王迪俞英中国农业大学动物科学技术学院农业农村部动物遗传育种与繁殖重点实验室&畜禽育种国家工程实验室北京100193 中国医学科学院&北京协和医学院病原生物学研究所国家卫生健康委病原系统生物学重点实验室北京100176

本研究旨在确保在遗传背景一致的基础上,探究奶牛乳房炎相关的微生物、代谢物以及两者之间的关系。研究共选取6头同时具有高体细胞数(Somatic Cell Count,SCC大于100万/mL)乳区和低体细胞数(SCC小于11万/mL)乳区的奶牛,每头牛分别取高/... 详细信息

本研究旨在确保在遗传背景一致的基础上,探究奶牛乳房炎相关的微生物、代谢物以及两者之间的关系。研究共选取6头同时具有高体细胞数(Somatic Cell Count,SCC大于100万/mL)乳区和低体细胞数(SCC小于11万/mL)乳区的奶牛,每头牛分别取高/低体细胞数2个乳区的奶样(n=6)进行16S rRNA基因测序和LC-MC非靶向代谢组测定,并进行整合分析。结果表明,在微生物层面,高、低SCC乳区间的微生物丰富度和多样性差异并不显著,但在属水平上筛选到链球菌属(Streptococcus)、罗姆布茨菌属(Romboutsia)、Turicibacter、双歧杆菌属(Bifidobacterium)、毛螺菌属(Lachnospiraceae_NK4A136_group)、费克蓝姆菌属(Facklamia)6种差异菌群(P<0.05),且均在高SCC乳区牛乳中丰度更高;在代谢组层面,正、负离子模式下共检测筛选出15种差异代谢物(P<0.05),其中2种富集到甘油磷脂代谢通路上并在高SCC乳区牛乳中下调,2-(2-氨基-3-甲基丁酰胺基)-3-苯基丙酸盐酸盐、N2-二甲基鸟苷、苯丙酰脯氨酸、前列腺素F_(2)α甘油酯、D-色氨酸、海藻糖在高SCC乳区牛乳中显著增加。整合分析微生物组及代谢组学结果,发现2-(2-氨基-3-甲基丁酰胺基)-3-苯基丙酸盐酸盐与罗姆布茨菌、Turicibacter、双歧杆菌、费克蓝姆菌属均呈显著正相关。2-(2-氨基-3-甲基丁酰胺基)-3-苯基丙酸盐酸盐有望作为由相关菌群引起乳房炎的特征指示代谢物。本研究中筛选出的差异微生物和代谢物有望作为早期预警奶牛乳房炎的生物标志物。

关键词：奶牛乳区乳房炎微生物组非靶向代谢组

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EV-A71或CV-A16灭活疫苗通过两种不同接种途径免疫小鼠诱导的BCR重链可变区基因特征比较

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病毒学报 2025年第2期 317-325页

作者：陈可琪廖芸蒋国润赵恒于丽孔美军王晶晶李丹丹赵鑫刘龙丁郑惠文中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所中国医学科学院病毒疫苗研发系统创新研究重点实验室

本研究使用EV-A71灭活疫苗或CV-A16灭活疫苗免疫BALB/c小鼠，每种疫苗通过肌肉注射和皮内注射的方式分别两针免疫小鼠后14d，检测动物体内的中和抗体和细胞免疫应答水平。随后我们筛选CD19+EV-A71+B细胞或CD19+CV-A16+B细胞，对分选获... 详细信息

本研究使用EV-A71灭活疫苗或CV-A16灭活疫苗免疫BALB/c小鼠，每种疫苗通过肌肉注射和皮内注射的方式分别两针免疫小鼠后14d，检测动物体内的中和抗体和细胞免疫应答水平。随后我们筛选CD19+EV-A71+B细胞或CD19+CV-A16+B细胞，对分选获得的特异性B细胞的BCR抗体重链基因进行巢式PCR扩增。随后对获取的抗体基因打靶，获得重链IGHV、IGHD、IGHJ基因的胚系来源，并对抗体IGH基因分类，对可变区CDR3区域氨基酸长度进行分析。结果表明，EV-A71实验性疫苗和CV-A16实验性疫苗两次免疫后，均能诱导较好的中和抗体水平，但是皮内免疫效果优于肌肉注射效果。EV-A71实验性疫苗或CV-A16实验性疫苗皮内注射小鼠与肌肉注射小鼠相比，IGHV基因谱系更加丰富。其中EV-A71疫苗通过两种接种方式产生的共有基因谱系为IGHV1-63*02,CV-A16疫苗通过两种接种方式产生的共有基因谱系为IGHV3-8*02。皮内注射比肌肉注射诱导的抗体重链可变区CDR3结构域的氨基酸长度变化更为明显，特别是CV-A16皮内注射小鼠重链可变区的CDR3区域长度主要集中在13个氨基酸，最长达到17个氨基酸。综上，皮内注射和肌肉注射诱导产生的特异性中和抗体滴度不同，CVA16通过皮内免疫诱导的中和抗体滴度高于肌肉注射诱导的抗体滴度，后续的BCR重链基因进化特征也存在明显的差异，这些发现为后续的联合疫苗设计提供参考。

关键词： EV-A71 CV-A16 肌肉注射皮内注射 B细胞受体库重链可变区基因

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野生恒河猴肠道病毒病原谱分析

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实验动物科学 2025年第1期42卷 12-17页

作者：侯婧涵徐鸿界孙文亭李明学李艳艳靳玮华杨凤梅和占龙中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 呼吸与共病全国重点实验室北京100005

目的本研究旨在调查野生恒河猴的肠道病毒病原谱状况,为野生猴群疾病预防、引入及饲养管理人员职业健康防护提供科学依据。方法本研究收集云南省218份野生恒河猴新鲜粪便样本,提取病毒RNA,采用肠道病毒通用引物222/224、AN88/AN89进行巢... 详细信息

目的本研究旨在调查野生恒河猴的肠道病毒病原谱状况,为野生猴群疾病预防、引入及饲养管理人员职业健康防护提供科学依据。方法本研究收集云南省218份野生恒河猴新鲜粪便样本,提取病毒RNA,采用肠道病毒通用引物222/224、AN88/AN89进行巢式PCR检测,对阳性样本进行测序分析,以确认病毒种类。结果恒河猴肠道病毒携带率为11%(24/218),其中,婴猴组携带率为7.5%(4/53);青少年猴组携带率为3.5%(2/57);成年猴组携带率为16.7%(9/54);老年猴组携带率为16.7%(9/54)。结论经肠道病毒基因分型确定该肠道病毒病原谱主要为肠道病毒J组、肠道病毒sp.组和肠道病毒A组;经系统发育分析发现218只野生恒河猴肠道病毒病原谱与EVJ、EVA92、EVA119、SV19和SV46等亲缘关系较近。

关键词：肠道病毒野生恒河猴年龄性别系统发育

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