检索结果-内蒙古大学图书馆

中国细胞生物学学报 2014年第10期36卷 1413-1421页

作者：沙志强许琪中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

SUN(Sad-1,UNC-84)结构域家族蛋白是一种广泛分布于酵母、线虫等真核生物的膜蛋白,主要定位于细胞核膜以及内质网。由于在酵母中发现Sad-1突变后的表型与线虫中UNC-84突变的表型一致,并且两者C-端有近一半的同源相似性,因此得名SUN结构... 详细信息

SUN(Sad-1,UNC-84)结构域家族蛋白是一种广泛分布于酵母、线虫等真核生物的膜蛋白,主要定位于细胞核膜以及内质网。由于在酵母中发现Sad-1突变后的表型与线虫中UNC-84突变的表型一致,并且两者C-端有近一半的同源相似性,因此得名SUN结构域,其家族成员也都具有SUN结构域。根据SUN结构域所在家族成员中蛋白质一级序列位置的不同,分为经典及非经典家族蛋白,经典的家族蛋白一般通过与KASH(Klarsicht、ANC-1、Syne homology)蛋白相互作用行使功能。越来越多的研究结果表明,SUN蛋白可能参与核膜锚定、核膜重塑、细胞迁移和DNA损伤修复等过程,其形成的复合体与人类进行性肌营养不良等疾病的发生发展也有紧密联系。该文就SUN家族各成员蛋白的结构特性以及功能特点的研究进展进行简要综述。

关键词： SUN结构域核膜锚定细胞迁移进行性肌营养不良

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小RNA干扰PCBP2在神经胶质瘤细胞中对P53相关基因的调节和对细胞增殖的影响

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基础医学与临床 2014年第6期34卷 776-781页

作者：韩为阴彬彭小忠中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探索多聚胞嘧啶结合蛋白2(PCBP2)表达下调对相关基因和胶质瘤细胞增殖的影响。方法 3株神经胶质瘤细胞系(T98G、U87MG和U251)各分为2组,分别转入特异性靶向PCBP2基因的小干扰RNA(siRNA)和对照siRNA,用Western blot法检测siRNA对PCBP... 详细信息

目的探索多聚胞嘧啶结合蛋白2(PCBP2)表达下调对相关基因和胶质瘤细胞增殖的影响。方法 3株神经胶质瘤细胞系(T98G、U87MG和U251)各分为2组,分别转入特异性靶向PCBP2基因的小干扰RNA(siRNA)和对照siRNA,用Western blot法检测siRNA对PCBP2蛋白的抑制效果及对P53蛋白和它的两个靶基因PUMA和BAX的表达影响,同时检测P53共调节因子FHL2和同家族成员FHL1表达变化。用生物素pull-down分析PCBP2是否和FHL家族成员mRNA结合。用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U)掺入法检测细胞增殖能力,Hoechst染色观察细胞凋亡率。结果 PCBP2 siRNA转染这3株细胞后使PCBP2蛋白表达水平明显下调(P<0.05);增加P53及它的靶基因PUMA和BAX的蛋白表达(P<0.05);抑制FHL2蛋白(P<0.05),但并不结合其mRNA的3'非编码区(3'UTR);Brd U阳性细胞减少(P<0.05);Hoechst染色阳性细胞增多(P<0.05)。结论抑制PCBP2表达可以增强胶质瘤细胞中P53通路活性,并减弱细胞增殖能力,诱导细胞凋亡。

关键词： RNA干扰多聚胞嘧啶结合蛋白2 P53 细胞增殖细胞凋亡

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6硝酸纤维膜和丙酮沉淀尿蛋白质保存方法的比较

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生物工程学报 2014年第6期30卷 982-989页

作者：王小蓉李逊斗贾露露高友鹤中国医学科学院基础医学研究所/北京协和医科大学基础医学院生理与病理生理学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

硝酸纤维膜法是一种简单、快速、经济的尿液蛋白质保存方法,但其与传统尿液蛋白质丙酮沉淀方法的差异有待进一步研究.相同尿液分别经硝酸纤维膜法和丙酮沉淀法制备尿蛋白质,经液相串联质谱分析鉴定蛋白质,采用谱图数定量,研究两种不同... 详细信息

硝酸纤维膜法是一种简单、快速、经济的尿液蛋白质保存方法,但其与传统尿液蛋白质丙酮沉淀方法的差异有待进一步研究.相同尿液分别经硝酸纤维膜法和丙酮沉淀法制备尿蛋白质,经液相串联质谱分析鉴定蛋白质,采用谱图数定量,研究两种不同方法的差别.结果显示硝酸纤维膜法和丙酮沉淀法鉴定蛋白质数目几乎相同,鉴定蛋白质在谱图数的分布上几乎相同,鉴定蛋白质在蛋白质变异系数的分布上也几乎相同.因此,硝酸纤维膜法处理尿蛋白质与丙酮沉淀法基本一致,可以应用于大规模临床尿液样本的保存.

关键词：尿蛋白质保存硝酸纤维素膜蛋白质组学生物样本保存

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神经干细胞定向分化过程中编码基因表达谱分析

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基础医学与临床 2014年第6期34卷 734-739页

作者：张靖朱丽媛阴彬侯琳彭小忠中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 中国医学科学院神经科学中心北京100005

目的探索小鼠神经干细胞定向分化为神经元及胶质细胞过程中重要发育基因的表达变化。方法 1)神经干细胞培养及定向分化诱导培养;2)分化神经元、星形胶质细胞的流式分选;3)针对编码基因表达谱芯片的生物信息学分析,包括基因功能聚类、通... 详细信息

目的探索小鼠神经干细胞定向分化为神经元及胶质细胞过程中重要发育基因的表达变化。方法 1)神经干细胞培养及定向分化诱导培养;2)分化神经元、星形胶质细胞的流式分选;3)针对编码基因表达谱芯片的生物信息学分析,包括基因功能聚类、通路分析等。结果 1)经细胞分选获得神经干细胞、神经元、星形胶质细胞;2)Sox2、Nestin等神经干细胞、神经元及星形胶质细胞的标志性基因表达谱式明显;3)Wnt通路、Insulin通路、P53通路活性的改变在定向分化细胞类群中存在细胞特异性。结论神经干细胞的分化过程是一个多基因通路综合变化的复杂网络。

关键词：神经干细胞定向分化 Wnt通路 insulin通路 P53通路

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STAT3激活促进K562细胞中AHSP的表达升高

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中国科学：生命科学 2014年第5期44卷 463-470页

作者：曹聪赵国伟于伟解学敏王文天杨瑞峰吕湘刘德培中国医学科学院北京协和医学院基础研究所、生物化学与分子生物学系、医学分子生物学国家重点实验室北京100005

近年对伴侣分子AHSP的研究结果表明,在?血红蛋白累积导致的病理状态下,大量存在的AHSP可以增强红系细胞的抗氧化能力.但是,氧化胁迫条件下内源性AHSP基因表达的调控机制仍未见报道.本研究探讨了一种抗氧化调控蛋白STAT3对AHSP表达的影... 详细信息

近年对伴侣分子AHSP的研究结果表明,在?血红蛋白累积导致的病理状态下,大量存在的AHSP可以增强红系细胞的抗氧化能力.但是,氧化胁迫条件下内源性AHSP基因表达的调控机制仍未见报道.本研究探讨了一种抗氧化调控蛋白STAT3对AHSP表达的影响及其分子机制.在K562细胞中,STAT3信号通路的激活剂白介素6(IL-6)可以增加AHSP的表达水平.同时,本底水平干扰STAT3的表达后,AHSP的表达量下降.本研究在?珠蛋白过表达的K562稳定细胞株中检测了AHSP在氧化胁迫条件的表达水平.实时定量PCR的结果显示,AHSP与STAT3的表达都显著增强.进一步,染色质免疫共沉淀的实验证明,IL-6和过表达的?珠蛋白都可以诱导STAT3在AHSP启动子区的结合增强.野生型及突变的双荧光素酶报告基因检测结果显示,AHSP启动子区的SB3位点为一个IL-6应答元件,表明STAT3可以直接调控AHSP基因的表达.最后,通过凝胶阻滞实验再次确认了STAT3在SB3元件上的结合.本研究揭示了一个AHSP在细胞氧化还原状态改变时的补偿性调控机制,即AHSP受到STAT3信号通路的调控.本工作为地中海贫血症治疗中提高AHSP水平的研究方案提供了一些思路.

关键词： AHSP STAT3 氧化胁迫 IL6应答元件

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自然反义转录物Lmo4as对神经系统重要编码基因Lmo4的调节作用

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基础医学与临床 2014年第6期34卷 819-823页

作者：张靖吴朝朱丽媛阴彬侯琳彭小忠中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 中国医学科学院神经科学中心北京100005

目的探索小鼠神经系统重要编码基因Lmo4基因座位上自然反义转录产物Lmo4as对该编码基因的表达调控功能。方法 1)使用c DNA末端快速扩增(RACE)与RT-PCR技术,验证Lmo4as是否具有多聚腺苷酸(poly A)尾,克隆Lmo4as的全长序列;2)使用实时定量... 详细信息

目的探索小鼠神经系统重要编码基因Lmo4基因座位上自然反义转录产物Lmo4as对该编码基因的表达调控功能。方法 1)使用c DNA末端快速扩增(RACE)与RT-PCR技术,验证Lmo4as是否具有多聚腺苷酸(poly A)尾,克隆Lmo4as的全长序列;2)使用实时定量PCR和原位杂交技术确定Lmo4as及相应编码基因的时空表达谱;3)使用荧光素酶报告基因实验在体外验证Lmo4as对Lmo4是否具有调控作用。结果 1)Lmo4as是一个具有多聚腺苷酸(poly A)尾的非编码RNA转录本,获得其RNA全长信息;2)Lmo4as与相应编码基因转录Lmo4的丰度在时间上具有协同性,而在空间表达上具有明显不同的分布;3)Lmo4as对Lmo4在转录后水平具有负性调节作用,另外miR-124也能够抑制Lmo4的表达。结论编码基因Lmo4基因座位上自然反义转录产物Lmo4as对其转录后水平的负性调节与microRNA的调节共同发挥作用。

关键词：小鼠大脑发育 Lmo4 自然反义转录物原位杂交转录后调控

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新疆哈萨克族人弗林蛋白Furin基因变异与高总胆固醇血症、高低密度脂蛋白胆固醇血症的相关性

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中国医学科学院学报 2014年第2期36卷 168-175页

作者：王红梅李南方洪静罗文利严治涛王新玲朱沂沈岩中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院博士后流动站北京100005 新疆维吾尔自治区人民医院博士后工作站乌鲁木齐830001 新疆维吾尔自治区人民医院高血压科乌鲁木齐830001 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的研究新疆哈萨克族人高总胆固醇血症、高低密度脂蛋白胆固醇血症与弗林蛋白(Furin)基因变异的相关性。方法本研究是以横断面流行病学调查为基础的病例-对照研究,878例研究对象均来自新疆哈萨克族自然人群。测定48例随机选择的哈萨克... 详细信息

目的研究新疆哈萨克族人高总胆固醇血症、高低密度脂蛋白胆固醇血症与弗林蛋白(Furin)基因变异的相关性。方法本研究是以横断面流行病学调查为基础的病例-对照研究,878例研究对象均来自新疆哈萨克族自然人群。测定48例随机选择的哈萨克族高胆固醇血症患者(女性24例、男性24例)弗林蛋白基因启动子、外显子区序列,筛查代表性变异。采用TaqMan PCR分析弗林蛋白基因变异在878例哈萨克族自然人群(男性370例、女性508例)中的分型,分析其与哈萨克族人血总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇水平的相关性。结果在48例高胆固醇血症患者中,共筛查出弗林蛋白基因的12个变异,包括4个代表性变异(rs6226、rs6227、rs2071410、rs4932178)。4个代表性变异均在大样本哈萨克族人中基因型分型成功(成功率≥99%)。在哈萨克族自然人群中,rs6226、rs6227、rs2071410、rs4932178多态性的基因型、等位基因、单体型频率分别在高胆固醇血症组、对照组间及高低密度脂蛋白胆固醇血症组、对照组间的分布差异均无统计学意义(P均>0.05);每个多态性的不同基因型携带者之间的血总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇平均水平差异无统计学意义(P均>0.05)。结论新疆哈萨克族人高总胆固醇血症、高低密度脂蛋白胆固醇血症与弗林蛋白基因变异不相关,该变异可能不是哈萨克族人高胆固醇血症、高低密度脂蛋白胆固醇血症的易感因素。

关键词：弗林蛋白基因高胆固醇血症高低密度脂蛋白胆固醇血症哈萨克族基因变异

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CDR3δ2基因修饰γδT细胞的构建及其功能鉴定

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基础医学与临床 2014年第6期34卷 746-752页

作者：胡愉赵慧王准何维中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院免疫学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005 中国食品药品检定研究院病毒三室北京100050

目的将全长γ9链mRNA和肿瘤反应性CDR3移植的δ2链mRNA共转染到抗CD3抗体刺激的PBMC,制备CDR3δ2基因修饰型γδT淋巴细胞,研究其抗肿瘤作用。方法通过PCR扩增含有肿瘤反应性特异CDR3δ2序列(OT3和OT10)的TCRδ2链及γ9链,构建重组质粒p... 详细信息

目的将全长γ9链mRNA和肿瘤反应性CDR3移植的δ2链mRNA共转染到抗CD3抗体刺激的PBMC,制备CDR3δ2基因修饰型γδT淋巴细胞,研究其抗肿瘤作用。方法通过PCR扩增含有肿瘤反应性特异CDR3δ2序列(OT3和OT10)的TCRδ2链及γ9链,构建重组质粒p GEM4Z/δ2(OT3)/A64、p GEM4Z/δ2(OT10)/A64和p GEM4Z/γ9/A64;以线性化的重组质粒作为模板,体外合成δ2(OT3)、δ2(OT10)和γ9 mRNA;将δ2(OT3)mRNA和δ2(OT10)mRNA分别与γ9 mRNA共电转染入抗CD3抗体刺激的正常人PBMC;经流式细胞术检测和分选γ9δ2(OT3)T细胞和γ9δ2(T10)T细胞。ELISA及MTT法分别检测上述转染细胞的抗肿瘤作用。结果 CDR3δ2基因修饰的TCRγδ细胞γ9δ2(OT3)T细胞和γ9δ2(T10)T细胞能够分泌较高的IFN-γ及TNF-α(P<0.05),对多种肿瘤细胞具有显著的细胞毒作用(P<0.05)。结论基因修饰型γ9δ2 T细胞能够明显增强对肿瘤的杀伤活性,为肿瘤过继免疫细胞的制备提供了新的策略。

关键词： T细胞 CDR3δ2 γδTCR 过继免疫治疗 OT3 OT10

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视交叉上核损毁对小鼠疼痛日节律行为的影响

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基础医学与临床 2014年第6期34卷 787-791页

作者：张靖阴彬孙中生彭小忠中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 中国医学科学院神经科学中心北京100005 中国科学院北京生命科学研究院北京100101

目的通过建立视交叉上核(SCN)损毁实验建立小鼠节律调控中枢失能模型,观察中枢节律控制中心SCN对疼痛节律行为的影响。方法 1)12 h光照/12 h黑暗条件下观察小鼠甲醛诱导的炎性痛反应的节律波动;2)SCN损毁建立小鼠节律中枢失能模型,观察... 详细信息

目的通过建立视交叉上核(SCN)损毁实验建立小鼠节律调控中枢失能模型,观察中枢节律控制中心SCN对疼痛节律行为的影响。方法 1)12 h光照/12 h黑暗条件下观察小鼠甲醛诱导的炎性痛反应的节律波动;2)SCN损毁建立小鼠节律中枢失能模型,观察小鼠转轮节律行为紊乱;3)观察SCN损毁后小鼠甲醛诱导的炎性痛日节律波动特征的改变。结果 1)12 h光照/12 h黑暗条件下小鼠的甲醛诱导炎性痛存在日节律波动;2)SCN损毁后小鼠正常的炎性痛日节律波动特点明显改变,出现活动期与静息期波动峰值的反转。结论脑内的节律调控中枢SCN对小鼠炎性痛的节律波动具有中枢调控作用。

关键词：疼痛甲醛炎性痛视交叉上核日节律

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Let-7a靶向抑制Ewing肉瘤中CDK6的表达

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基础医学与临床 2014年第11期34卷 1524-1529页

作者：瞿岱彪邵斌袁志峰王芳余佳刘会文景德镇市第一人民医院骨科江西景德镇333000 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的研究抑癌microRNA(Let-7a)在Ewing肉瘤细胞系中的靶基因。方法用Northern blot分析细胞系中Let-7a的表达量;构建p MIR-reporter-CDK6野生型(CDK6_WT)或突变型(CDK6_MUT)及阳性对照(Let-7a_PC)质粒;体外合成的寡核苷酸(Let-7a_mimic)转染Ewing肉瘤细胞系SK-ES-1,用real time PCR检测Let-7a的表达;通过生物信息软件分析、双荧光素酶报告实验和Western blot寻找并确定Let-7a的靶基因。结果 Let-7a在Ewing肉瘤细胞系中系低表达,以MSCs为参照,SK-ES-1 Let-7a/U6 snRNA灰度值最高为:0.193±0.024(P<0.05);双酶切和DNA测序鉴定质粒构建成功;在SK-ES-1细胞中成功过表达Let-7a(P<0.01);野生型CDK6(CDK6_WT)荧光素酶表达水平与对照组和突变型CDK6(CDK6_MUT)相比明显下降(P<0.05);在SK-ES-1细胞系中过表达Let-7a抑制了CDK-6 mRNA和蛋白质的表达。结论确定了抑癌microRNA(Let-7a)在Ewing肉瘤细胞系中靶基因,为进一步实验奠定了基础。

关键词： Let-7a CDK6 Ewing肉瘤

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