检索结果-内蒙古大学图书馆

基础医学与临床 2014年第6期34卷 819-823页

作者：张靖吴朝朱丽媛阴彬侯琳彭小忠中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 中国医学科学院神经科学中心北京100005

目的探索小鼠神经系统重要编码基因Lmo4基因座位上自然反义转录产物Lmo4as对该编码基因的表达调控功能。方法 1)使用c DNA末端快速扩增(RACE)与RT-PCR技术,验证Lmo4as是否具有多聚腺苷酸(poly A)尾,克隆Lmo4as的全长序列;2)使用实时定量... 详细信息

目的探索小鼠神经系统重要编码基因Lmo4基因座位上自然反义转录产物Lmo4as对该编码基因的表达调控功能。方法 1)使用c DNA末端快速扩增(RACE)与RT-PCR技术,验证Lmo4as是否具有多聚腺苷酸(poly A)尾,克隆Lmo4as的全长序列;2)使用实时定量PCR和原位杂交技术确定Lmo4as及相应编码基因的时空表达谱;3)使用荧光素酶报告基因实验在体外验证Lmo4as对Lmo4是否具有调控作用。结果 1)Lmo4as是一个具有多聚腺苷酸(poly A)尾的非编码RNA转录本,获得其RNA全长信息;2)Lmo4as与相应编码基因转录Lmo4的丰度在时间上具有协同性,而在空间表达上具有明显不同的分布;3)Lmo4as对Lmo4在转录后水平具有负性调节作用,另外miR-124也能够抑制Lmo4的表达。结论编码基因Lmo4基因座位上自然反义转录产物Lmo4as对其转录后水平的负性调节与microRNA的调节共同发挥作用。

关键词：小鼠大脑发育 Lmo4 自然反义转录物原位杂交转录后调控

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新疆哈萨克族人弗林蛋白Furin基因变异与高总胆固醇血症、高低密度脂蛋白胆固醇血症的相关性

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中国医学科学院学报 2014年第2期36卷 168-175页

作者：王红梅李南方洪静罗文利严治涛王新玲朱沂沈岩中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院博士后流动站北京100005 新疆维吾尔自治区人民医院博士后工作站乌鲁木齐830001 新疆维吾尔自治区人民医院高血压科乌鲁木齐830001 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的研究新疆哈萨克族人高总胆固醇血症、高低密度脂蛋白胆固醇血症与弗林蛋白(Furin)基因变异的相关性。方法本研究是以横断面流行病学调查为基础的病例-对照研究,878例研究对象均来自新疆哈萨克族自然人群。测定48例随机选择的哈萨克... 详细信息

目的研究新疆哈萨克族人高总胆固醇血症、高低密度脂蛋白胆固醇血症与弗林蛋白(Furin)基因变异的相关性。方法本研究是以横断面流行病学调查为基础的病例-对照研究,878例研究对象均来自新疆哈萨克族自然人群。测定48例随机选择的哈萨克族高胆固醇血症患者(女性24例、男性24例)弗林蛋白基因启动子、外显子区序列,筛查代表性变异。采用TaqMan PCR分析弗林蛋白基因变异在878例哈萨克族自然人群(男性370例、女性508例)中的分型,分析其与哈萨克族人血总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇水平的相关性。结果在48例高胆固醇血症患者中,共筛查出弗林蛋白基因的12个变异,包括4个代表性变异(rs6226、rs6227、rs2071410、rs4932178)。4个代表性变异均在大样本哈萨克族人中基因型分型成功(成功率≥99%)。在哈萨克族自然人群中,rs6226、rs6227、rs2071410、rs4932178多态性的基因型、等位基因、单体型频率分别在高胆固醇血症组、对照组间及高低密度脂蛋白胆固醇血症组、对照组间的分布差异均无统计学意义(P均>0.05);每个多态性的不同基因型携带者之间的血总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇平均水平差异无统计学意义(P均>0.05)。结论新疆哈萨克族人高总胆固醇血症、高低密度脂蛋白胆固醇血症与弗林蛋白基因变异不相关,该变异可能不是哈萨克族人高胆固醇血症、高低密度脂蛋白胆固醇血症的易感因素。

关键词：弗林蛋白基因高胆固醇血症高低密度脂蛋白胆固醇血症哈萨克族基因变异

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CDR3δ2基因修饰γδT细胞的构建及其功能鉴定

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基础医学与临床 2014年第6期34卷 746-752页

作者：胡愉赵慧王准何维中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院免疫学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005 中国食品药品检定研究院病毒三室北京100050

目的将全长γ9链mRNA和肿瘤反应性CDR3移植的δ2链mRNA共转染到抗CD3抗体刺激的PBMC,制备CDR3δ2基因修饰型γδT淋巴细胞,研究其抗肿瘤作用。方法通过PCR扩增含有肿瘤反应性特异CDR3δ2序列(OT3和OT10)的TCRδ2链及γ9链,构建重组质粒p... 详细信息

目的将全长γ9链mRNA和肿瘤反应性CDR3移植的δ2链mRNA共转染到抗CD3抗体刺激的PBMC,制备CDR3δ2基因修饰型γδT淋巴细胞,研究其抗肿瘤作用。方法通过PCR扩增含有肿瘤反应性特异CDR3δ2序列(OT3和OT10)的TCRδ2链及γ9链,构建重组质粒p GEM4Z/δ2(OT3)/A64、p GEM4Z/δ2(OT10)/A64和p GEM4Z/γ9/A64;以线性化的重组质粒作为模板,体外合成δ2(OT3)、δ2(OT10)和γ9 mRNA;将δ2(OT3)mRNA和δ2(OT10)mRNA分别与γ9 mRNA共电转染入抗CD3抗体刺激的正常人PBMC;经流式细胞术检测和分选γ9δ2(OT3)T细胞和γ9δ2(T10)T细胞。ELISA及MTT法分别检测上述转染细胞的抗肿瘤作用。结果 CDR3δ2基因修饰的TCRγδ细胞γ9δ2(OT3)T细胞和γ9δ2(T10)T细胞能够分泌较高的IFN-γ及TNF-α(P<0.05),对多种肿瘤细胞具有显著的细胞毒作用(P<0.05)。结论基因修饰型γ9δ2 T细胞能够明显增强对肿瘤的杀伤活性,为肿瘤过继免疫细胞的制备提供了新的策略。

关键词： T细胞 CDR3δ2 γδTCR 过继免疫治疗 OT3 OT10

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视交叉上核损毁对小鼠疼痛日节律行为的影响

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基础医学与临床 2014年第6期34卷 787-791页

作者：张靖阴彬孙中生彭小忠中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 中国医学科学院神经科学中心北京100005 中国科学院北京生命科学研究院北京100101

目的通过建立视交叉上核(SCN)损毁实验建立小鼠节律调控中枢失能模型,观察中枢节律控制中心SCN对疼痛节律行为的影响。方法 1)12 h光照/12 h黑暗条件下观察小鼠甲醛诱导的炎性痛反应的节律波动;2)SCN损毁建立小鼠节律中枢失能模型,观察... 详细信息

目的通过建立视交叉上核(SCN)损毁实验建立小鼠节律调控中枢失能模型,观察中枢节律控制中心SCN对疼痛节律行为的影响。方法 1)12 h光照/12 h黑暗条件下观察小鼠甲醛诱导的炎性痛反应的节律波动;2)SCN损毁建立小鼠节律中枢失能模型,观察小鼠转轮节律行为紊乱;3)观察SCN损毁后小鼠甲醛诱导的炎性痛日节律波动特征的改变。结果 1)12 h光照/12 h黑暗条件下小鼠的甲醛诱导炎性痛存在日节律波动;2)SCN损毁后小鼠正常的炎性痛日节律波动特点明显改变,出现活动期与静息期波动峰值的反转。结论脑内的节律调控中枢SCN对小鼠炎性痛的节律波动具有中枢调控作用。

关键词：疼痛甲醛炎性痛视交叉上核日节律

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Dok5基因3'非编码区(3'UTR)的多态性与我国汉族2型糖尿病关系的初步研究

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中国卫生检验杂志 2014年第14期24卷 2051-2053页

作者：刘雪梅朱丽媛安芳朱惠娟彭小忠潘慧河北北方学院河北张家口075000 中国医学科学院北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 中国医学科学院北京协和医院北京100730

目的在胞浆接头蛋白Dok5基因3'非编码区(3'UTR)筛查与我国汉族2型糖尿病(T2DM)相关的单核苷酸多态性(SNP)。方法从493例T2DM患者及573例健康体检者外周血中提取DNA,特异性扩增Dok5基因3'UTR并进行测序,分析筛查出的SNPs的... 详细信息

目的在胞浆接头蛋白Dok5基因3'非编码区(3'UTR)筛查与我国汉族2型糖尿病(T2DM)相关的单核苷酸多态性(SNP)。方法从493例T2DM患者及573例健康体检者外周血中提取DNA,特异性扩增Dok5基因3'UTR并进行测序,分析筛查出的SNPs的等位基因及基因型频率。结果共检测到4种SNPs,分别为rs2842(G>A)、rs2841(G>A)、rs15899(T>C)及rs2843(C>G),只有rs2841的等位基因及基因型频率在两组间差异有统计学意义(P<0.01)。结论在Dok5基因3'UTR区鉴定出4个SNPs位点,其中rs2841可能是我国汉族2型糖尿病的功能性易感位点。

关键词： 2型糖尿病 Dok5 单核苷酸多态性等位基因基因型

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Let-7a靶向抑制Ewing肉瘤中CDK6的表达

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基础医学与临床 2014年第11期34卷 1524-1529页

作者：瞿岱彪邵斌袁志峰王芳余佳刘会文景德镇市第一人民医院骨科江西景德镇333000 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的研究抑癌microRNA(Let-7a)在Ewing肉瘤细胞系中的靶基因。方法用Northern blot分析细胞系中Let-7a的表达量;构建p MIR-reporter-CDK6野生型(CDK6_WT)或突变型(CDK6_MUT)及阳性对照(Let-7a_PC)质粒;体外合成的寡核苷酸(Let-7a_mimic)转染Ewing肉瘤细胞系SK-ES-1,用real time PCR检测Let-7a的表达;通过生物信息软件分析、双荧光素酶报告实验和Western blot寻找并确定Let-7a的靶基因。结果 Let-7a在Ewing肉瘤细胞系中系低表达,以MSCs为参照,SK-ES-1 Let-7a/U6 snRNA灰度值最高为:0.193±0.024(P<0.05);双酶切和DNA测序鉴定质粒构建成功;在SK-ES-1细胞中成功过表达Let-7a(P<0.01);野生型CDK6(CDK6_WT)荧光素酶表达水平与对照组和突变型CDK6(CDK6_MUT)相比明显下降(P<0.05);在SK-ES-1细胞系中过表达Let-7a抑制了CDK-6 mRNA和蛋白质的表达。结论确定了抑癌microRNA(Let-7a)在Ewing肉瘤细胞系中靶基因,为进一步实验奠定了基础。

关键词： Let-7a CDK6 Ewing肉瘤

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mRNA电转抗CD3抗体刺激的PBMC方法的建立

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基础医学与临床 2014年第6期34卷 782-786页

目的建立信使RNA(mRNA)电转抗CD3抗体刺激的外周血单个核细胞(PBMC)的方法,为制备基因修饰CDR3δ移植型γδT淋巴细胞,为肿瘤细胞过继治疗提供新的技术方法。方法以SpeⅠ内切酶消化重组p GEM4Z/EGFP/A64质粒,回收纯化线性化的重组质粒p ... 详细信息

目的建立信使RNA(mRNA)电转抗CD3抗体刺激的外周血单个核细胞(PBMC)的方法,为制备基因修饰CDR3δ移植型γδT淋巴细胞,为肿瘤细胞过继治疗提供新的技术方法。方法以SpeⅠ内切酶消化重组p GEM4Z/EGFP/A64质粒,回收纯化线性化的重组质粒p GEM4Z/EGFP/A64,体外转录成mRNA;在电转参数为500 V500μs、400 V 500μs或300 V 500μs等不同条件下,转染抗CD3抗体刺激的人PBMC;用倒置荧光显微镜观察和流式细胞仪观察和分析绿色荧光蛋白的表达;台盼蓝染色计算不同电转条件下细胞的存活率,以确定mRNA电转最佳条件。结果 p GEM4Z/EGFP/A64质粒经过SpeⅠ内切酶酶切,获得了线性化的质粒;体外转录得到了增强型绿色荧光蛋白(EGFP)mRNA;与其他转染条件相比,在500 V 500μs电转参数下转染EGFP mRNA的PBMC细胞,电转后48 h绿色荧光蛋白表达量较高;与其他转染条件相比,在500 V 500μs电转参数下转染EGFP mRNA的PBMC细胞,电转48 h后绿色荧光蛋白表达的阳性细胞高达77%;台盼蓝染色分析不同电转条件下细胞的存活率,在细胞电转48 h后,500 V 500μs参数电转条件下细胞存活率可以达到85%以上。结论电转参数为500 V 500μs的条件可用于电转mRNA于抗CD3抗体扩增的人PBMC,以制备基因修饰T淋巴细胞。

关键词：信使RNA 电转外周血单个核细胞加强型绿色荧光蛋白

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重性抑郁障碍易感基因EHD3与疾病认知功能相关

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中国医学科学院学报 2014年第3期36卷 227-233页

作者：王乐石翠娟许琪中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 天津医科大学总医院神经病理室天津市神经病学研究所天津市神经损伤变异与再生重点实验室教育部中枢神经创伤修复与再生重点实验室天津300052

目的探讨EHD3基因与重性抑郁障碍(MDD)患者认知功能的相关性。方法以47例MDD患者与40例正常对照者为研究对象,分析其认知功能的差异,然后将MDD患者的各项量表得分作为数量性状,采用UNPHASED软件的数量性状模块,分析认知功能与EHD3基因... 详细信息

目的探讨EHD3基因与重性抑郁障碍(MDD)患者认知功能的相关性。方法以47例MDD患者与40例正常对照者为研究对象,分析其认知功能的差异,然后将MDD患者的各项量表得分作为数量性状,采用UNPHASED软件的数量性状模块,分析认知功能与EHD3基因多态性的相关性。结果 MDD组WAIS-RC和WMS-R量表的各项评分均显著低于正常对照组(P均<0.05)。EHD3基因的rs3769621等位基因及基因型分别与WAIS-RC图形拼凑原始分(χ2=10.561,P=0.001;χ2=7.922,P=0.019)和图形拼凑量表分(χ2=12.627,P=0.00038;χ2=11.775,P=0.0027),以及WMS-R心智(1-100)原始分(χ2=8.762,P=0.003;χ2=17.399,P=0.00016)和心智(1-100)量表分(χ2=10.356,P=0.001;χ2=14.958,P=0.00056)显著相关;经过Bonferroni法校正后,上述结果差异仍显著。结论在中国北方汉族人群中,EHD3基因可能与MDD认知功能内表型相关。

关键词：重性抑郁障碍认知功能 EHD3基因

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细胞内吞的研究进展

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生命的化学 2014年第4期34卷 492-499页

作者：范真真陈虹黄秉仁中国医学科学院&北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

细胞外基质的各种分子经细胞膜进入真核细胞是一个复杂的过程。细胞内吞是通过细胞质膜的变形运动将细胞外物质转运入细胞内的过程。不同的细胞内吞途径需要不同的蛋白质分子参与,引起不同的信号转导通路。目前认为细胞内吞和膜转运是... 详细信息

细胞外基质的各种分子经细胞膜进入真核细胞是一个复杂的过程。细胞内吞是通过细胞质膜的变形运动将细胞外物质转运入细胞内的过程。不同的细胞内吞途径需要不同的蛋白质分子参与,引起不同的信号转导通路。目前认为细胞内吞和膜转运是细胞对其信号转导过程的一种精密的组织安排,细胞内吞在细胞信号转导,维持机体动态平衡方面起着重要作用。细胞内吞途径通常可以分为网格蛋白依赖的内吞和非网格蛋白依赖的内吞,其中后者包括陷窝蛋白依赖和非陷窝蛋白依赖的内吞,以及巨胞饮介导的内吞。本文将就这几种主要细胞内吞途径及与细胞信号转导通路关系的研究进展予以介绍。

关键词：细胞内吞网格蛋白陷窝蛋白发动蛋白巨胞饮

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IFN-λR1与TRAF6的相互作用及对NF-κB与ISRE活性的影响

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医学研究杂志 2014年第10期43卷 53-58页

作者：杨霞张俊文黄秉仁陈虹中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室

目的构建含有信号肽的全长IFN-λR1质粒,研究在配体IFN-λ1存在的情况下IFN-λR1与TRAF6的相互作用及对NF-κB与ISRE活性的影响。方法利用多次PCR将信号肽编码序列引入IFN-λR1序列中,构建表达载体,用免疫荧光及膜蛋白分离实验鉴定IFN-... 详细信息

目的构建含有信号肽的全长IFN-λR1质粒,研究在配体IFN-λ1存在的情况下IFN-λR1与TRAF6的相互作用及对NF-κB与ISRE活性的影响。方法利用多次PCR将信号肽编码序列引入IFN-λR1序列中,构建表达载体,用免疫荧光及膜蛋白分离实验鉴定IFN-λR1的表达定位。用免疫共沉淀的方法研究IFN-λ1刺激下IFN-λR1与TRAF6间的相互作用。用双荧光素酶报告基因实验研究IFN-λR1与TRAF6相互作用后对下游NF-κB与ISRE活性的影响,采用实时定量PCR的方法检测此种作用对OAS1与Mx1基因表达的影响。结果成功构建了含信号肽的全长IFN-λR1表达载体,细胞内表达的IFN-λR1可正确定位于细胞膜上。细胞共转染IFN-λR1和TRAF6,在免疫沉淀物中可以检测到两个蛋白同时存在。细胞内共表达的IFN-λR1能够抑制TRAF6诱导的NF-λB的激活,而共表达的TRAF6可以抑制IFN-λR1下游ISRE的活性,并下调OAS1与Mx1基因的表达。结论证实了在IFN-λ1存在下IFN-λR1与TRAF6的相互作用及二者相互作用对各自细胞信号转导通路的影响,为TRAF6作为IFN-λ受体信号通路中的相互作用蛋白提供了新的实验依据。

关键词： IFN-λR1 TRAF6 NF-κB ISRE 相互作用

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