检索结果-内蒙古大学图书馆

利用串联亲和纯化结合质谱分析分离和鉴定与蛋白激酶NLK结合的蛋白复合物组分

医学研究杂志 2014年第7期43卷 19-22页

作者：梁俊波缪时英王琳芳中国医学科学院/北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室100005

目的利用串联亲和纯化结合质谱分析分离和鉴定与蛋白激酶NLK结合的蛋白复合物组分。方法将RFP、NLK和其突变体NLKK155M克隆至本室改造的带有Flag和Strep双标签的反转录病毒载体pMSCVpuro中,通过酶切鉴定并测序验证其构建的正确性。采用... 详细信息

目的利用串联亲和纯化结合质谱分析分离和鉴定与蛋白激酶NLK结合的蛋白复合物组分。方法将RFP、NLK和其突变体NLKK155M克隆至本室改造的带有Flag和Strep双标签的反转录病毒载体pMSCVpuro中,通过酶切鉴定并测序验证其构建的正确性。采用反转录病毒感染结合嘌呤霉素筛选的方法,获得稳定表达RFP、NLK、NLK突变体NLKK155M的HCT-116细胞株,Western blot法检测目的蛋白RFP、NLK和NLKK155M的表达。采用串联亲和纯化结合质谱分析,分离、鉴定与NLK结合的蛋白。结果构建的pMSCVpuro/N-Flag-Strep-RFP和pMSCVpuro/N-Flag-Strep-NLK质粒经酶切鉴定、测序证明质粒构建正确,pMSCVpuro/N-Flag-Strep-NLKK155M质粒经测序证明构建正确。携带上述基因的反转录病毒感染的HCT-116细胞,Flag-Strep-RFP、Flag-Strep-NLK和Flag-Strep-NLKK155M均正常表达。经串联亲和纯化和质谱分析,发现多个可能与NLK结合的蛋白。结论本研究采用串联亲和纯化结合质谱分析成功鉴定了若干可能与NLK及其突变体NLKK155M结合的蛋白质。

关键词： NLK 串联亲和纯化质谱分析

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近红外双荧光系统在磷酸酯酶筛选中的应用

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医学研究杂志 2014年第5期43卷 52-54页

作者：杨昕霆阎海霞沈珝琲张业中国医学科学院基础医学研究所/北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室

目的应用奥德赛(Odyssey)近红外双荧光系统筛选去甲基化酶KDM3A去磷酸化的磷酸酯酶。方法使用磷酸酯酶干扰质粒转染HEK293T细胞,使用磷酸化的KDM3A抗体对细胞进行杂交,近红外荧光染料DRAQ5标记细胞核,利用奥德赛(Odyssey)近红外双荧光... 详细信息

目的应用奥德赛(Odyssey)近红外双荧光系统筛选去甲基化酶KDM3A去磷酸化的磷酸酯酶。方法使用磷酸酯酶干扰质粒转染HEK293T细胞,使用磷酸化的KDM3A抗体对细胞进行杂交,近红外荧光染料DRAQ5标记细胞核,利用奥德赛(Odyssey)近红外双荧光系统对细胞进行荧光扫描,荧光强度的比值可代表细胞内相对KDM3A磷酸化水平,进而筛选出相关的磷酸酯酶。结果磷酸酯酶广谱抑制剂冈崎酸OA处理转染后的细胞,近红外双荧光扫描系统可以检测到KDM3A的磷酸化,初步筛选出4个可能参与KDM3A去磷酸化的磷酸酯酶亚基。结论近红外双荧光系统可以应用于磷酸酯酶的初步筛选。

关键词：奥德赛近红外双荧光扫描系统 KDM3A 磷酸酯酶

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MCF10A-Er-Src诱导转化模型的构建

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医学研究杂志 2014年第10期43卷 29-32页

作者：任雪程谟斌张业沈珝琲中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室

目的构建能够被他莫西芬(tamoxifen,TAM)激活的MCF10A-Er-Src诱导转化模型。方法利用PCR扩增法分别获得雌激素受体配体结合结构域序列(hbER)和Src序列,并将其分别插入到改造后的反转录病毒表达载体pMSCV-FLAG-HA中,构建ER-Src融合蛋白... 详细信息

目的构建能够被他莫西芬(tamoxifen,TAM)激活的MCF10A-Er-Src诱导转化模型。方法利用PCR扩增法分别获得雌激素受体配体结合结构域序列(hbER)和Src序列,并将其分别插入到改造后的反转录病毒表达载体pMSCV-FLAG-HA中,构建ER-Src融合蛋白表达质粒。包装pMSCV-ER-Src-FLAG-HA重组反转录病毒,感染MCF10A,利用基因组PCR和Western blot法筛选能够稳定表达外源融合蛋白ER-Src的细胞系。利用免疫沉淀(IP)和Western blot法验证TAM对稳转细胞系的激活,并观察细胞形态变化。结果构建的MCF10A-Er-Src细胞系能够稳定表达ER-Src融合蛋白。TAM能诱使Src第416位酪氨酸发生磷酸化,从而激活Src,使MCF10A-Er-Src发生转化。结论成功获得能够被TAM诱导激活的MCF10A-Er-Src转化模型。

关键词：人乳腺表皮细胞雌激素受体配体结合结构域-Src融合蛋白他莫西芬细胞转化

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HRSP12慢病毒表达载体的构建及对宫颈癌HeLa细胞凋亡及增殖的影响

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医学研究杂志 2014年第10期43卷 63-67页

作者：谭宽张璇马晓骊黄秉仁陈虹陈等中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室

目的构建热反应蛋白12(heat-responsive protein 12,HRSP12)慢病毒表达载体pWPI-HRSP12,包装慢病毒颗粒并感染宫颈癌细胞HeLa,分析过表达的HRSP12对HeLa细胞凋亡和增殖的影响。方法用反转录PCR扩增HRSP12全长编码顺序,构建慢病毒表达载... 详细信息

目的构建热反应蛋白12(heat-responsive protein 12,HRSP12)慢病毒表达载体pWPI-HRSP12,包装慢病毒颗粒并感染宫颈癌细胞HeLa,分析过表达的HRSP12对HeLa细胞凋亡和增殖的影响。方法用反转录PCR扩增HRSP12全长编码顺序,构建慢病毒表达载体,利用人胚肾细胞HEK293T包装重组的慢病毒颗粒,感染HeLa细胞,用蛋白免疫印迹法检测剪切的半胱氨酸/天冬氨酸蛋白水解酶-3(caspase-3)并用MTS比色法检测HeLa细胞增殖的情况。结果编码全长HRSP12的cDNA片段为414bp,克隆至pWPI-linker载体成功构建了慢病毒表达载体pWPI-HRSP12,包装的慢病毒颗粒能够高效感染HeLa细胞,在细胞内表达Flag-HRSP12融合蛋白。HRSP12的过表达能够引起HeLa细胞caspase-3的剪切体增多,能够抑制HeLa细胞的增殖。结论成功构建了慢病毒表达载体pWPI-HRSP12,初步结果表明,HRSP12可能具有诱导HeLa细胞凋亡、抑制细胞增殖的活性,为进一步研究HRSP12的生物学功能奠定了基础。

关键词： HRSP12 慢病毒载体细胞凋亡

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两个多发性内分泌腺瘤病2A型家系RET基因突变研究

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北京医学 2014年第1期36卷 8-11页

作者：谢燚李汉忠张学斌薛源常永生中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院泌尿外科 100730 中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

目的总结2个多发性内分泌腺瘤病2A(MEN2A)型家系的临床特点,及MEN2A家系RET基因突变类型。方法对2个MEN2A家系进行临床调查,分析其临床特点。提取2个家系成员外周血基因组DNA,扩增先证者RET原癌基因的外显子10、11,13-16,并行Sanger测序... 详细信息

目的总结2个多发性内分泌腺瘤病2A(MEN2A)型家系的临床特点,及MEN2A家系RET基因突变类型。方法对2个MEN2A家系进行临床调查,分析其临床特点。提取2个家系成员外周血基因组DNA,扩增先证者RET原癌基因的外显子10、11,13-16,并行Sanger测序,测得突变所在的外显子后,将其亲属相应外显子的扩增产物进行测序。结果家系1的先证者及其哥哥的10q 11.2外显子11(密码子634)RET原癌基因发生点突变:Cys643Trp。家系2的先证者其兄长存在10q 11.2外显子11(密码子634)RET原癌基因发生点突变:Cys643Arg,筛查出1个家系成员为基因突变携带者。结论 RET原癌基因第11外显子Cys643Trp杂合突变及Cys634Arg杂合突变,均为MEN2A的致病基因,此2个家系患者虽然突变类型不同,但两家系患者在起病方式、发病年龄及临床表现均相似。基因检测是诊断MEN2A的有效方法。

关键词：多发性内分泌腺瘤病2A型 RET原癌基因基因突变

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全外显子组测序技术检出Kallmann syndrome患者KAL1基因新突变

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医学研究杂志 2014年第10期43卷 74-77页

作者：李斌徐洪丽段婧陈蓉蓉聂敏张宏冰伍学焱中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生理系医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院/北京协和医学院北京协和医院内分泌科 100005

目的分析Kallmann syndrome家系患者的分子遗传机制。方法利用全外显子组测序技术对先证者进行测序分析,按照ACMG解读规则筛选致病性突变,Sanger测序对所有家系成员验证突变结果。结果捕获且比对到目标区的碱基量为3418.98Mb,平均测序... 详细信息

目的分析Kallmann syndrome家系患者的分子遗传机制。方法利用全外显子组测序技术对先证者进行测序分析,按照ACMG解读规则筛选致病性突变,Sanger测序对所有家系成员验证突变结果。结果捕获且比对到目标区的碱基量为3418.98Mb,平均测序深度为77.66X,覆盖度为99.23%,共检出5056个变异,3174为罕见变异(RSV),KAL1基因c.1735_1736insT突变为疑似致病性突变,且满足家系共分离。结论 KAL1基因c.1735_1736insT框移突变为新的疑似致病性突变。

关键词： Kallmann syndrome KAL1 全外显子组测序

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KLF4的结构、功能及其与癌症的关系

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医学研究杂志 2014年第4期43卷 11-14页

作者：赵乔佳杰黄秉仁陈虹陈等中国医学科学院基础医学研究所/北京协和医学院基础学院生物化学及分子生物学系国家医学分子生物学重点实验室北京100005

Krüppel样因子（Krüppel-like factor,KLF）是人类组织中广泛表达的锌指型转录因子,由Shields等[1]于1996年在小鼠中发现,因其与黑腹果蝇的分节蛋白Krüppel的DNA结合序列具有同源性故而得名.KLF蛋白在许多不同的生理活... 详细信息

Krüppel样因子（Krüppel-like factor,KLF）是人类组织中广泛表达的锌指型转录因子,由Shields等[1]于1996年在小鼠中发现,因其与黑腹果蝇的分节蛋白Krüppel的DNA结合序列具有同源性故而得名.KLF蛋白在许多不同的生理活动包括细胞增殖、生长、分化和正常组织稳态的维持中具有重要作用.其中KLF4在不同的肿瘤组织中可以通过与不同的靶基因作用,发挥癌基因或者抑癌基因两种完全相反的功能,在结肠癌、胃癌、皮肤癌、膀胱癌、肝癌中均发现KLF4表达降低,而在原发性乳腺导管癌、口腔鳞癌中KLF4表达升高[2-4].虽然在不同肿瘤中研究KLF4功能的结果不同,但都指出KLF4在肿瘤的发生与发展中具有重要作用.

关键词：结构癌症肿瘤组织转录因子抑癌基因 DNA结合乳腺导管癌人类组织

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microRNA-34a对肿瘤微环境作用的研究进展

microRNA-34a对肿瘤微环境作用的研究进展

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中国免疫学会第九届全国免疫学学术大会

作者：张斯雅阳佳纪旭崔莲仙张建民何维医学分子生物学国家重点实验室北京协和医学院基础医学院免疫学系中国医学科学院基础医学研究所

肿瘤微环境是指由肿瘤细胞与其周围环境所组成的高度异质性的,伴随肿瘤发展而不断演变的微小生态系统.它包括肿瘤细胞、肿瘤相关成纤维细胞、免疫细胞、内皮细胞、骨髓来源抑制性细胞、周细胞、脉管系统、细胞外基质及其降解酶、多种生... 详细信息

肿瘤微环境是指由肿瘤细胞与其周围环境所组成的高度异质性的,伴随肿瘤发展而不断演变的微小生态系统.它包括肿瘤细胞、肿瘤相关成纤维细胞、免疫细胞、内皮细胞、骨髓来源抑制性细胞、周细胞、脉管系统、细胞外基质及其降解酶、多种生长因子、炎症因子以及特殊的理化特征(如低氧、低pH).肿瘤微环境在受到肿瘤细胞影响的同时也反作用于肿瘤细胞,因此作为当前癌症的研究热点,为肿瘤的治疗提供了新的视野和思路.具有21-23核苷酸的微小RNA (microRNA)分子在机体生命活动的各方面起到调节作用.

关键词： microRNA miR-34a 肿瘤微环境

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索瑞酶在阿尔茨海默病发生发展中的作用

索瑞酶在阿尔茨海默病发生发展中的作用

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中国免疫学会第九届全国免疫学学术大会

作者：阳佳张斯雅杨琪汪怀山张建民医学分子生物学国家重点实验室北京协和医学院基础医学院免疫学系中国医学科学院基础医学研究所

研究背景:阿尔茨海默病是中枢神经系统一种常见的进行性神经退行性疾病,而其病因与发病机制尚未明确.索瑞酶是一种具有重要生理功能的ATP水解酶,其能够调控AMPA受体在神经突触后膜表面上的表达,进而调控神经突触的可塑性,参与学习与记... 详细信息

研究背景:阿尔茨海默病是中枢神经系统一种常见的进行性神经退行性疾病,而其病因与发病机制尚未明确.索瑞酶是一种具有重要生理功能的ATP水解酶,其能够调控AMPA受体在神经突触后膜表面上的表达,进而调控神经突触的可塑性,参与学习与记忆的形成.我们推测索瑞酶在阿尔茨海默病发生发展中扮演着重要角色.目的:探索索瑞酶对β淀粉样蛋白聚集沉淀的机制,进一步研究脑组织内索瑞酶缺失对阿尔茨海默病发生发展的影响.

关键词：阿尔茨海默病索瑞酶 β淀粉样蛋白

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microRNA-34a对肿瘤微环境作用的研究进展

microRNA-34a对肿瘤微环境作用的研究进展

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第九届全国免疫学学术大会

作者：张斯雅阳佳纪旭崔莲仙张建民何维医学分子生物学国家重点实验室北京协和医学院基础医学院免疫学系中国医学科学院基础医学研究所

肿瘤微环境是指由肿瘤细胞与其周围环境所组成的高度异质性的,伴随肿瘤发展而不断演变的微小生态系统。它包括肿瘤细胞、肿瘤相关成纤维细胞、免疫细胞、内皮细胞、骨髓来源抑制性细胞、周细胞、脉管系统、细胞外基质及其降解酶、多种... 详细信息

肿瘤微环境是指由肿瘤细胞与其周围环境所组成的高度异质性的,伴随肿瘤发展而不断演变的微小生态系统。它包括肿瘤细胞、肿瘤相关成纤维细胞、免疫细胞、内皮细胞、骨髓来源抑制性细胞、周细胞、脉管系统、细胞外基质及其降解酶、多种生长因子、炎症因子以及特殊的理化特征(如低氧、低pH)。肿瘤微环境在受到肿瘤细胞影响的同时也反作用于肿瘤细胞,因此作为当前癌症的研究热点,为肿瘤的治疗提供了新的视野和思路。具有21-23核苷酸的微小RNA(microRNA)分子在机体生命活动的各方面起到调节作用。microRNA-34a与p53密切相关,已被视为一个抑癌基因参与到肿瘤的发生、发展、分化、凋亡以及转侵袭的各方面。研究发现,miR-34a在抑制肿瘤血管生成、转移、有氧糖酵解(Warburg effect)等多方面有重要作用。本文将主要针对miR-34a在肿瘤微环境中的这些最新发现进行综述。

关键词： microRNA miR-34a 肿瘤微环境

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