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中国蛋白质组学第三届学术大会

作者：董华应天翼李霆曹廷明王恒樑许彩民中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所全军分子遗传学重点实验室中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所全军分子遗传学重点实验室中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所全军分子遗传学重点实验室中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室

硒是人体所必需的微量元素。有研究表明硒可以作为某些癌症的化学预防剂,近年来报道硒还可以作为肿瘤细胞的诱导凋亡药物,为肿瘤的治疗开辟了新的思路。但是其作用机制仍不清楚。急性早幼粒白血病是严重威胁人类健康的恶性肿瘤之一,其... 详细信息

硒是人体所必需的微量元素。有研究表明硒可以作为某些癌症的化学预防剂,近年来报道硒还可以作为肿瘤细胞的诱导凋亡药物,为肿瘤的治疗开辟了新的思路。但是其作用机制仍不清楚。急性早幼粒白血病是严重威胁人类健康的恶性肿瘤之一,其发生是一个多步骤、多诱因的过程。目前还没有一种有效的治疗药物。本实验室前期工作已经发现亚硒酸钠在无毒的剂量范围内,能诱导急性早幼粒白血病细胞株NB4细胞发生凋亡,与凋亡有关的基因芯片分析发现有30多个基因参与了这

关键词：白血病亚硒酸钠细胞凋亡 NB4 比较蛋白质组学

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人造血增效因子在大肠杆菌中的表达及其生物学作用

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中华血液学杂志 2004年第11期25卷 666-670页

作者：齐春梅杨克恭陈松森张艳丽邓艳春苏林王亚栋罗丝刘长征罗庆良熊国林中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 军事医学科学院放射医学研究所

目的　研究人造血增效因子 (hHSF)在大肠杆菌 (E .coli)中的表达及其动员恒河猴外周血造血干 /祖细胞的作用。方法　应用重叠PCR方法合成编码hHSF的DNA片段 ,克隆测序证实其序列正确后 ,重组到表达载体 pET30a中 ,转入E .coliBL2 1(DE3... 详细信息

目的　研究人造血增效因子 (hHSF)在大肠杆菌 (E .coli)中的表达及其动员恒河猴外周血造血干 /祖细胞的作用。方法　应用重叠PCR方法合成编码hHSF的DNA片段 ,克隆测序证实其序列正确后 ,重组到表达载体 pET30a中 ,转入E .coliBL2 1(DE3) ,并用IPTG诱导表达 ,目的蛋白用凝胶过滤和阳离子交换层析法进行分离纯化和复性。用飞行时间质谱仪和氨基酸测序仪分别测定纯化的目的蛋白相对分子质量、N端氨基酸序列以及氨基酸组成。选用恒河猴 8只 ,随机分为两组 ,每组4只 :一组为单次皮下注射重组hSCF 5 0 0 μg/kg ,另一组为皮下注射rhG CSF 10 μg·kg-1·d-14d后 ,单次注射rhHSF 5 0 0 μg/kg。观察恒河猴外周血CD34+ 细胞、CFU GM数目以及血常规。结果　测序证实合成的hHSF序列与设计一致 ,构建的重组表达载体 pET30a hHSF在E .coli中获高效表达 ,目的蛋白占菌体总蛋白的 30 %左右 ,主要以包涵体形式存在。目的蛋白纯度达 95 %以上 ,N端前 10个氨基酸序列分析结果与预期一致 ;相对分子质量为 75 4 0 ;氨基酸组成分析结果与理论值基本一致。恒河猴实验结果表明 ,单次皮下注射重组hHSF后外周血CD34+ 细胞、CFU GM和中性粒细胞数分别在用药后 3h ,1h和 4 5min达高峰 ,动员幅度分别为用药前检测值的 16 .3倍、1.9?

关键词：动员恒河猴外周血 CFU-GM 中性粒细胞 CD34^+细胞人造血高效表达 E.coli 重叠PCR

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人ATP7B基因对Wilson病动物模型LEC大鼠暴发性肝炎的治疗

引用

解剖学报 2004年第3期35卷 282-286页

作者：孟雁苏牧中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的　探讨人ATP7B基因对Wilson病动物模型LEC大鼠暴发性肝炎的治疗效果。　方法　将构建的 7.1kb含有鸡 β肌动蛋白启动子的人正常ATP7BcDNA ,经显微注射法导入人Wilson病动物模型LEC(long EvansCinnamon)大鼠受精卵 ,建立转基因功能... 详细信息

目的　探讨人ATP7B基因对Wilson病动物模型LEC大鼠暴发性肝炎的治疗效果。　方法　将构建的 7.1kb含有鸡 β肌动蛋白启动子的人正常ATP7BcDNA ,经显微注射法导入人Wilson病动物模型LEC(long EvansCinnamon)大鼠受精卵 ,建立转基因功能恢复大鼠模型。以Westernbolt检测人ATP7B在转基因大鼠肝内的表达 ,用同窝无转基因大鼠及正常野生型LEA大鼠作对照 ,对 6～ 16周龄的转基因大鼠的血清AST、ALT和总胆红素水平进行连续测定 ,同时取 13周龄转基因大鼠的肝组织进行病理学和组织化学分析。　结果　人ATP7B基因在转基因大鼠的肝组织中获得正确和完整的表达 :12周龄前后 ,与同窝无转基因大鼠相比 ,转基因大鼠的血清AST、ALT和总胆红素水平明显降低 ,肝组织的炎性病变显著减轻 ,肝细胞内铜的蓄积减少 ;至 16周龄 ,转基因大鼠的临床表型未见异常 ,存活率达 10 0 %。说明人ATP7B的导入 ,成功地抑制了Wilson病动物模型LEC大鼠的暴发性肝炎的发生。结论　Wilson病肝炎的发生与ATP7B基因功能缺陷引起的铜蓄积有直接关系。基因转移有可能是一种有效的治疗Wilson病的方法。

关键词：人ATP7B基因基因治疗暴发性肝炎 LEC大鼠

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DIFF33H参与TRAIL诱导的人Jurkat T淋巴细胞白血病细胞凋亡调控

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中国免疫学杂志 2004年第12期20卷 809-812页

作者：邹耀中刘彦信(指导) 郑德先中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的 :研究DIFF33H在人T淋巴细胞白血病细胞Jurkat凋亡中的表达规律及其生物学功能。方法 :采用PCR扩增DIFF33HcDNA ,Northernblot分析DIFF33H的mRNA表达 ,MTT法测定细胞凋亡。结果 :在重组可溶性TRAIL诱导的人T淋巴细胞白血病细胞Jurka... 详细信息

目的 :研究DIFF33H在人T淋巴细胞白血病细胞Jurkat凋亡中的表达规律及其生物学功能。方法 :采用PCR扩增DIFF33HcDNA ,Northernblot分析DIFF33H的mRNA表达 ,MTT法测定细胞凋亡。结果 :在重组可溶性TRAIL诱导的人T淋巴细胞白血病细胞Jurkat凋亡过程中 ,DIFF33HmRNA的表达水平随着Jurkat细胞的凋亡而下降 ,并对重组可溶性TRAIL的作用具有浓度和时间的依赖性。在抗肿瘤药物 5 FU诱导肿瘤细胞凋亡过程中 ,DIFF33H的mRNA表达水平也显著下降。结论 :DIFF33H参与人T淋巴细胞白血病细胞Jurkat凋亡的调控。

关键词： DIFF33H TRAIL 5-FU T淋巴细胞白血病细胞 Jurkat细胞凋亡

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反义技术研究进展

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中国生物工程杂志 2004年第12期24卷 43-47页

作者：王波陈梅红中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

反义技术利用DNA或RNA分子通过Watson Crick碱基配对原则与目的基因的mRNA互补结合 ,通过各种机制使其降解或抑制其编码蛋白的翻译 ,从而抑制目的基因的表达。与基因敲除(geneknockout)等功能缺失性研究方法相比 ,反义技术具有投入少 ,... 详细信息

反义技术利用DNA或RNA分子通过Watson Crick碱基配对原则与目的基因的mRNA互补结合 ,通过各种机制使其降解或抑制其编码蛋白的翻译 ,从而抑制目的基因的表达。与基因敲除(geneknockout)等功能缺失性研究方法相比 ,反义技术具有投入少 ,周期短 ,操作简单等优点 ,因此受到了广泛的关注。对几种常用反义技术的研究进展及存在的问题进行概述。

关键词：反义技术研究进展抑制目的基因表达碱基配对基因敲除 RNA分子 DNA 编码蛋白

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多巴胺通路的基因与精神分裂症风险的多位点关联研究

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中国科学（C辑） 2004年第5期34卷 465-470页

作者：孙向青贾彦彬张学工许琪沈岩李衍达清华大学教育部生物信息学重点实验室清华大学自动化系北京100084 中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

精神分裂症是一种严重的精神疾患,全世界的群体发病率约为1％.一般认为它是一种复杂的多基因疾病,其致病因素是多个基因的联合作用.有证据表明多巴胺递质系统的改变与精神分裂症有关.为了发现多巴胺代谢通路中的精神分裂症易感基因,收集... 详细信息

精神分裂症是一种严重的精神疾患,全世界的群体发病率约为1％.一般认为它是一种复杂的多基因疾病,其致病因素是多个基因的联合作用.有证据表明多巴胺递质系统的改变与精神分裂症有关.为了发现多巴胺代谢通路中的精神分裂症易感基因,收集了82个精神分裂症病例和108个与之匹配的正常对照,分析了该人群位于多巴胺代谢通路上的24个基因中的59个单核苷酸多态性(SNPs)位点.由于传统的单位点关联研究忽视了复杂疾病的多基因致病性的本质,不考虑易感基因之间的相互作用,因此提出了一个多位点的关联分析方法,该方法用致病后验概率度量一个多位点基因型组合的致病风险,并用一套基于扰动和平均的算法来检测易感的多位点基因型组合和抑制噪声,避免在结果中包含假阳性位点.发现了一个三位点的SNP组合,相应的基因组合为COMT和ALDH3B1基因,对精神分裂症高度易感.

关键词：精神分裂症关联研究多巴胺易感基因通路 SNP 位点基因型代谢基因组合

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羊瘙痒因子263K感染仓鼠终末期脑中胶质纤维酸性蛋白和神经元特异性烯醇化酶的表达和分布变化研究

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病毒学报 2004年第2期20卷 118-123页

作者：陈岚张瑾肖新莉韩俊高建梅张宝云许彩民董小平中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京 100005

为了探讨羊瘙痒因子263K感染仓鼠脑组织中星形胶质细胞和神经元的数量及功能改变,利用免疫印迹、免疫组化方法研究了胶质纤维酸性蛋白(glialfibrillaryacidicprotein,GFAP)和神经元特异性烯醇化酶(neuron specificenolase,NSE)在受染仓... 详细信息

为了探讨羊瘙痒因子263K感染仓鼠脑组织中星形胶质细胞和神经元的数量及功能改变,利用免疫印迹、免疫组化方法研究了胶质纤维酸性蛋白(glialfibrillaryacidicprotein,GFAP)和神经元特异性烯醇化酶(neuron specificenolase,NSE)在受染仓鼠各脑区中表达变化的特点,同时比较其与神经病理学改变及PrPSc沉积的关系。结果表明,感染终末期仓鼠的脑组织中GFAP表达量明显增高,与正常对照相比,大脑皮质、脑干和小脑区域GFAP着色细胞数量分别增高3 69、2 41和1 56倍。感染仓鼠脑组织NSE表达量低于正常对照,小脑、海马CA1区和大脑皮质NSE着色细胞数量分别仅为正常对照相应区域的22 5%、54 2%和53 9%。这些变化与PrPSc在脑组织中的沉积程度和空泡样变性程度相吻合。结果提示,GFAP和NSE的检测可分别很好地反映星形胶质细胞和神经元的数量及功能状态,成为在朊病毒病发病过程中重要的病理变化指标。

关键词：朊病毒病羊瘙痒因子感染仓鼠脑胶质纤维神经元

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基因芯片数据分析

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生命科学 2004年第1期16卷 41-48页

作者：杨畅方福德中国医学科学院、中国协和医科大学基础医学院研究所、医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院、中国协和医科大学基础医学院研究所、医学分子生物学国家重点实验室北京100005

基因芯片是近年发展起来的自动化的、高通量的研究生物学问题的一门新技术。它综合了多学科的成就,在大规模研究基因功能的领域中已经有了卓有成效的应用。对大量产生的数据如何有效地分析,成为芯片研究中的一个热点。总体上,数据分析... 详细信息

基因芯片是近年发展起来的自动化的、高通量的研究生物学问题的一门新技术。它综合了多学科的成就,在大规模研究基因功能的领域中已经有了卓有成效的应用。对大量产生的数据如何有效地分析,成为芯片研究中的一个热点。总体上,数据分析方法可分为非指导的方法和指导的方法。在分析前需要对数据进行标准化和精简,对分析结果需要检验和进行生物学分析。作者对目前常用的一些统计学方法作一介绍,并讨论其适用范围及优缺点。

关键词：基因芯片数据分析

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染色质重塑与肌肉分化

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生命的化学 2004年第5期24卷 373-375页

作者：李兆勇吴宁华沈珝琲中国医学科学院/中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

在真核生物中 ,基因组DNA是以染色质的状态存在和发挥作用的。目前的研究已经鉴定了多种可以调节染色质结构和功能的蛋白质和酶复合物 ,包括不依赖ATP的染色质修饰酶、依赖于ATP的染色质重塑复合物 ,以及募集DNA甲基化 /去甲基化装置的... 详细信息

在真核生物中 ,基因组DNA是以染色质的状态存在和发挥作用的。目前的研究已经鉴定了多种可以调节染色质结构和功能的蛋白质和酶复合物 ,包括不依赖ATP的染色质修饰酶、依赖于ATP的染色质重塑复合物 ,以及募集DNA甲基化 /去甲基化装置的核小体相关蛋白质复合物等。在骨骼肌分化过程中 ,MyoD家族和MEF2家族的转录因子起着重要作用。染色质修饰酶通过MyoD和MEF2介导的染色质重塑影响肌肉分化。

关键词：染色质重塑肌肉分化 HDAC HAT SWI/SNF

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真核冈崎片段成熟的研究进展

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生命的化学 2004年第2期24卷 93-95页

作者：罗丝杨克恭陈松森中国医学科学院/中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

真核冈崎片段的成熟机制比较复杂 ,由Polδ、RNaseHI、FEN1、Dna2和DNA连接酶等多种蛋白质协同通过两种机制加工完成。Polδ的 3′→ 5′核酸外切酶活性能替代FEN1,在冈崎片段成熟中通过阻止过量的DNA链替代合成 ,保证产生能被DNA连接... 详细信息

真核冈崎片段的成熟机制比较复杂 ,由Polδ、RNaseHI、FEN1、Dna2和DNA连接酶等多种蛋白质协同通过两种机制加工完成。Polδ的 3′→ 5′核酸外切酶活性能替代FEN1,在冈崎片段成熟中通过阻止过量的DNA链替代合成 ,保证产生能被DNA连接酶连接的具有单一切口两个DNA片段 ,有利于保持基因组的稳定性。

关键词：冈崎片段 Polδ的3′→5′核酸外切酶活性 FEN1 Dna2

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