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国际心脏研究会中国分会第八届学术会议暨中国病理生理学会心血管专业委员会第十一届学术会议

作者：张凌慧魏国柱刘德培刘湘军郝德龙梁植权中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室清华大学医学院中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室清华大学医学院中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

目的:同源盒蛋白Nkx2.5/CSX是决定果蝇心脏发育的tinman基因的同源基因,是心脏发育过程中不可或缺的心脏限制性转录因子。Nkx2.5在小鼠胚胎发育的7.5 d时开始表达,Nkx2.5基因敲除的小鼠在胚胎9.5—10 d时由于心管环化停滞而死亡,而杂合... 详细信息

目的:同源盒蛋白Nkx2.5/CSX是决定果蝇心脏发育的tinman基因的同源基因,是心脏发育过程中不可或缺的心脏限制性转录因子。Nkx2.5在小鼠胚胎发育的7.5 d时开始表达,Nkx2.5基因敲除的小鼠在胚胎9.5—10 d时由于心管环化停滞而死亡,而杂合型突变小鼠发生的许多先天性心脏疾患的表型和人类的先天性心脏病类似。人类的同源物CSX定位于染色体5q35,已经发现CSX突变可引起房间隔缺损合并房室传导缺损,法乐氏四联征,房室传导阻滞。这些数据表明Nkx2.5(CSX)对心脏发生的分隔的调节和房室结正常功能的维持具有重要的作用。除了在心脏发育中的作用,Nkx2.5在出生后的心脏中也有表达,但其功能并不完全朋确。在PE、去甲肾上腺素、压力负荷等肥厚信号的诱导下,Nkx2.5的表达显著上调,同时上调胚

关键词：心脏发育染色质免疫沉淀技术 Nkx2.5

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遗传性乳光牙本质致病基因DSPP的突变分析

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牙体牙髓牙周病学杂志 2004年第9期14卷 485-489页

作者：吴丽更陶玉斌张晓海贾智张青松赵军天津医科大学口腔医院 300070 中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的 :就天津地区新发现的一个遗传性乳光牙本质回族家系进行牙本质涎磷蛋白 (dentinsialophosphoprotein ,DSPP)致病基因的突变检测 ,以证实是否有新的突变位点 ,并进一步阐明该病基因型和表型间的相互关系。方法 :对该家系中的 1 0名... 详细信息

目的 :就天津地区新发现的一个遗传性乳光牙本质回族家系进行牙本质涎磷蛋白 (dentinsialophosphoprotein ,DSPP)致病基因的突变检测 ,以证实是否有新的突变位点 ,并进一步阐明该病基因型和表型间的相互关系。方法 :对该家系中的 1 0名患者和 8名正常人提取外周血DNA ,针对DSPP基因外显子 3和外显子 4设计引物 ,以进行巢氏PCR扩增。PCR扩增产物经直接测序分析 ,或用限制性内切酶RsaI酶切鉴定。结果 :测序结果显示 :遗传性乳光牙本质患者DSPP基因外显子 3的 36 5 8位核苷酸存在C→T的无义突变 ,该突变使终止密码子提前出现 ;RsaI酶切分析也证实 :1 0名患者的DSPP基因发生了终止突变 ,所有患者在该位点均为杂合子。结论 :DSPP基因无义突变可能会严重影响DSPP基因的功能 ,从而导致牙本质发育不全。

关键词：遗传性乳光牙本质牙本质涎磷蛋白致病基因

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亚硒酸钠诱导白血病NB4细胞凋亡的蛋白质组学初步分析

亚硒酸钠诱导白血病NB4细胞凋亡的蛋白质组学初步分析

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生物膜与重大疾病学术研讨会

作者：董华天翼王恒樑许彩民中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室解放军军事医学科学院生物工程研究所解放军军事医学科学院生物工程研究所中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室

目的:研究亚硒酸钠诱导NB4细胞凋亡蛋白质组的变化。本研究工作是在本课题组前期应用基因芯片分析亚硒酸钠诱白血病NB4细胞调亡工作的基础上,发现有34个差异基因改变。这些差异基因主要是细胞周期蛋白,线立体调亡信号通路相关蛋白和蛋... 详细信息

目的:研究亚硒酸钠诱导NB4细胞凋亡蛋白质组的变化。本研究工作是在本课题组前期应用基因芯片分析亚硒酸钠诱白血病NB4细胞调亡工作的基础上,发现有34个差异基因改变。这些差异基因主要是细胞周期蛋白,线立体调亡信号通路相关蛋白和蛋白水解酶相关蛋白等。这提示我们在蛋白质组学上进行研究探讨可能会有新的发现。方法:采用2D胶和质谱分析方法。我们采用20μM的亚硒酸钠诱导36小时收集NB4,细胞全蛋白进行2D胶比较蛋白质组学分析。结果:发现有40多个显著差异的蛋白质,而且重复性好,目前对这些差异蛋白质正在进行质谱分析。

关键词：亚硒酸钠白血病 NB4 细胞凋亡

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人载脂蛋白A5基因多态性56C→G与血浆甘油三酯的关系

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中国动脉硬化杂志 2004年第5期12卷 574-576页

作者：李国平王建跃鄢盛恺张立军薛红曾武威吴刚陈保生中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京市100005 舟山市疾病预防控制中心浙江舟山市316000 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院检验科北京市100730

为研究载脂蛋白A5基因编码区 5 6C→G这一多态性位点与血浆脂质以及载脂蛋白水平的关系 ,选择4 6 8个健康汉族人 ,应用聚合酶链反应限制片长多态性的原理 ,逐个鉴定每个个体的基因型。结果发现 ,5 6C→G这一位点在中国汉族人群中突变频... 详细信息

为研究载脂蛋白A5基因编码区 5 6C→G这一多态性位点与血浆脂质以及载脂蛋白水平的关系 ,选择4 6 8个健康汉族人 ,应用聚合酶链反应限制片长多态性的原理 ,逐个鉴定每个个体的基因型。结果发现 ,5 6C→G这一位点在中国汉族人群中突变频率小于 1% ,提示它在中国汉族人群中不是一个多态性位点。

关键词：生物化学载脂蛋白A5基因多态性与血浆甘油三酯的关系聚合酶链反应限制片长多态性载脂蛋白A5 基因多态性甘油三酯

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蛋白质转导——外源物质进入细胞的新工具

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生命的化学 2004年第3期24卷 192-195页

作者：李锋陈岚肖新莉韩俊董小平中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京100052 中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 西安交通大学医学院西安710061

相对于常规的基因转移技术 ,蛋白质直接跨过细胞膜进入细胞 (proteintransduction ,蛋白质转导 )还比较新颖。蛋白质转导结构域 (proteintransductiondomain ,PTD)最早发现于HIV的TAT蛋白 ,之后证明多种天然的和人工合成的蛋白质和多肽... 详细信息

相对于常规的基因转移技术 ,蛋白质直接跨过细胞膜进入细胞 (proteintransduction ,蛋白质转导 )还比较新颖。蛋白质转导结构域 (proteintransductiondomain ,PTD)最早发现于HIV的TAT蛋白 ,之后证明多种天然的和人工合成的蛋白质和多肽都具有蛋白质转导能力。PTD有相似的结构特征 ,但是其转导的详细机制仍不清楚 ,很多研究结果倾向于静电相互作用模式。大量研究证明 ,PTD具有转导能力强、无细胞特异性、能够穿过血脑屏障等特点 ,这为癌症、AIDS。

关键词：蛋白质 FFD TAT 细胞细胞膜蛋白质转导结构域

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脂筏的结构与功能

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生物化学与生物物理进展 2003年第1期30卷 54-59页

作者：陈岚许彩民袁建刚潘华珍中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

脂筏是膜脂双层内含有特殊脂质及蛋白质的微区 .小窝是脂筏的一种类型 ,由胆固醇、鞘脂及蛋白质组成 ,以小窝蛋白为标记蛋白 .脂筏的组分和结构特点有利于蛋白质之间相互作用和构象转化 ,可以参与信号转导和细胞蛋白质运转 .一些感染性... 详细信息

脂筏是膜脂双层内含有特殊脂质及蛋白质的微区 .小窝是脂筏的一种类型 ,由胆固醇、鞘脂及蛋白质组成 ,以小窝蛋白为标记蛋白 .脂筏的组分和结构特点有利于蛋白质之间相互作用和构象转化 ,可以参与信号转导和细胞蛋白质运转 .一些感染性疾病、心血管疾病、肿瘤、肌营养不良症及朊病毒病等可能与脂筏功能紊乱有着密切的关系 .

关键词：膜结构脂筏结构功能小窝蛋白信号转导糖肌醇磷脂-锚固蛋白膜脂双层

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红系细胞中Cre重组酶介导的位点特异性片段交换(英文)

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2003年第10期35卷 947-951页

作者：李兴国严皓珩刘德培郝德龙梁植权北京100005 中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院基础医学研究所

Cre介导的片段交换技术利用重组酶Cre的位点特异性重组特性 ,在基因组的特定位点进行靶片段与目的片段的交换。运用互为反向的Lox位点 ,在鼠红白血病MEL细胞中进行靶载体的整合和交换载体的交换 ,探讨在特定的染色质环境下红系特异性顺... 详细信息

Cre介导的片段交换技术利用重组酶Cre的位点特异性重组特性 ,在基因组的特定位点进行靶片段与目的片段的交换。运用互为反向的Lox位点 ,在鼠红白血病MEL细胞中进行靶载体的整合和交换载体的交换 ,探讨在特定的染色质环境下红系特异性顺式作用元件的功能。电穿孔转染MEL细胞后从含有潮霉素 (hygromycin)的选择性半固体培养基中挑取MEL细胞单克隆 ,通过PCR和Southern杂交鉴定整合完整性和拷贝数 ,获得三种整合有靶载体p1L HyTk L1 β EGFP neo的细胞株A ,B和D。交换载体pL1 HS2 1L(含有 732 bp的人β 珠蛋白基因簇 5′DNaseI高敏位点 2核心片段 )和Cre表达载体pBS185共转染细胞株A ,9 (1,3 二羟 2丙氧甲基 )鸟嘌呤 (gancyclovir)负筛选后挑取单细胞克隆A HS。PCR检测显示HS2片段以反方向进行了交换。流式细胞仪分析显示平均的荧光细胞百分比 (2 .4 2 % )低于未交换的细胞株A (35 .94 % )。A HS中EGFP的低表达可能是处于非容许方向的HS2片段出现方向依赖性基因沉默所致。

关键词：染色体整合位点特异性重组 Cre/Lox 珠蛋白基因基因沉默

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D构象丝氨酸在中枢神经系统中的功能研究进展

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生物化学与生物物理进展 2003年第6期30卷 852-854页

作者：阳洪波袁建刚彭小忠中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

哺乳动物中枢神经系统中 D 构象丝氨酸的区域性高浓度分布与N 甲基 D 天冬氨酸 (NMDA)受体相一致 .它主要由丝氨酸消旋酶将 L 丝氨酸直接消旋而来 ,也可能通过肠道菌群产生后吸收至体内 ,最终被 D 构象氨基酸氧化酶氧化 .这种从胶质细... 详细信息

哺乳动物中枢神经系统中 D 构象丝氨酸的区域性高浓度分布与N 甲基 D 天冬氨酸 (NMDA)受体相一致 .它主要由丝氨酸消旋酶将 L 丝氨酸直接消旋而来 ,也可能通过肠道菌群产生后吸收至体内 ,最终被 D 构象氨基酸氧化酶氧化 .这种从胶质细胞而非神经元来源的“异常”构象氨基酸作为一种新型神经递质 ,不仅更新了传统“神经递质”的定义。

关键词： D构象丝氨酸丝氨酸消旋酶 NMDA受体中枢神经系统功能

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病毒载体与造血干细胞基因治疗

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Acta Genetica Sinica 2003年第4期30卷 383-388页

作者：董文吉祖振响刘德培梁植权中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

多种获得性和遗传性疾病累及造血细胞。造血干细胞是人类基因治疗的重要靶细胞。成功的造血干细胞基因治疗不仅需要高效基因转移 ,还需要治疗基因的长期、高水平表达。反转录病毒载体是造血干细胞基因治疗的常用载体 ,结合优化的造血干... 详细信息

多种获得性和遗传性疾病累及造血细胞。造血干细胞是人类基因治疗的重要靶细胞。成功的造血干细胞基因治疗不仅需要高效基因转移 ,还需要治疗基因的长期、高水平表达。反转录病毒载体是造血干细胞基因治疗的常用载体 ,结合优化的造血干细胞转导条件 ,其介导的腺苷脱氨酶缺陷引起的严重联合免疫缺陷和X染色体连锁的严重联合免疫缺陷的基因治疗已经获得初步成功 ;其他整合型病毒载体如慢病毒和腺相关病毒载体 ,也在临床前造血干细胞基因治疗研究中得到广泛应用。从病毒载体。

关键词：造血干细胞反转录病毒载体慢病毒载体腺相关病毒载体基因治疗

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CD3ε和5-氟尿嘧啶在T淋巴细胞凋亡中的协同作用及P53的表达

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中华医学杂志 2003年第22期83卷 1962-1967页

作者：程宏刘彦信张锦春刘士廉郑德先中国协和医科大学基础医学院中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的　研究CD3ε分子与化疗药物 5 氟尿嘧啶 (5 FU)在T淋巴细胞凋亡中的协同作用及P5 3的表达 ,为探索T淋巴细胞凋亡的分子机制打下基础 ,为相关肿瘤的治疗提供新的实验依据。方法　培养人T淋巴白血病细胞株JK ,转染了突变的CD3εITAM... 详细信息

目的　研究CD3ε分子与化疗药物 5 氟尿嘧啶 (5 FU)在T淋巴细胞凋亡中的协同作用及P5 3的表达 ,为探索T淋巴细胞凋亡的分子机制打下基础 ,为相关肿瘤的治疗提供新的实验依据。方法　培养人T淋巴白血病细胞株JK ,转染了突变的CD3εITAM的TJK及T3JK细胞株。用CD3ε特异的单克隆抗体 (2 0 0 μg/ml)和 /或 5 FU(2 5 μg/ml)刺激不同的T淋巴细胞诱导细胞凋亡 ,用噻唑蓝比色法检测细胞存活率 ,并计算细胞死亡率 ;用瞬时转染野生型或突变型P5 3表达质粒的方法和Western印迹检测P5 3蛋白质的表达 ,分析其在T淋巴细胞凋亡中的作用。结果　在CD3ε和 5 FU分别诱导T淋巴细胞凋亡过程中 ,均伴随着P5 3蛋白质表达增加 ;两者联合使用使T淋巴细胞凋亡和P5 3蛋白质表达显著增加 ;P5 3过表达可明显增加T淋巴细胞对 5 FU的敏感性。结论　抗CD3ε抗体和 5 FU联合作用可显著提高P5 3蛋白质表达 ,两者在T淋巴细胞凋亡中具有协同效应。

关键词： CD3ε 5-氟尿嘧啶 T淋巴细胞凋亡协同作用 P53 表达单克隆抗体

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