检索结果-内蒙古大学图书馆

药学学报 2012年第12期47卷 1640-1645页

作者：王冬梅魏金钊范宝妍刘泉朱海波申竹芳吴松中国医学科学院、北京协和医学院药物研究所天然药物活性物质与功能国家重点实验室、卫生部天然药物生物合成重点实验室北京100050

为评价四氢黄连碱型季铵化合物降血糖、降血脂的作用,本文以盐酸黄连碱(2)为起始原料,经硼氢化钠还原得到四氢黄连碱,再对其进行季铵化衍生,合成了15个新型黄连碱衍生物4～18,通过1H NMR、HR-MS进行了化学结构确证,并在HepG2细胞葡萄糖... 详细信息

为评价四氢黄连碱型季铵化合物降血糖、降血脂的作用,本文以盐酸黄连碱(2)为起始原料,经硼氢化钠还原得到四氢黄连碱,再对其进行季铵化衍生,合成了15个新型黄连碱衍生物4～18,通过1H NMR、HR-MS进行了化学结构确证,并在HepG2细胞葡萄糖消耗模型上评价了所有化合物体外促葡萄糖消耗活性。对于活性较好的化合物进一步评价了其体内降血脂活性。结果表明:化合物5、7、8、9表现出了较好的体外促葡萄糖消耗活性,化合物5、8在高脂血症小鼠和金黄地鼠模型上显示出较好的体内降血脂活性,但作用效果没有阳性对照药辛伐他汀显著。

关键词：四氢黄连碱型季铵化合物代谢综合征合成降血糖降血脂

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酿酒酵母羊毛甾醇合酶基因单倍体缺陷型突变株的构建

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药学学报 2014年第5期49卷 742-746页

作者：高丽丽王庆华梁会超巩婷杨金玲朱平中国医学科学院、北京协和医学院药物研究所天然药物活性物质与功能国家重点实验室&卫生部天然药物生物合成重点实验室北京100050

羊毛甾醇合酶基因(lanosterol synthase gene,erg7)编码的羊毛甾醇合酶是酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)甾醇生物合成途径中重要的限速酶。酿酒酵母固有的甲羟戊酸(MVA)/麦角甾醇代谢途径的中间体2,3-氧化鲨烯也是三萜类化合物的... 详细信息

羊毛甾醇合酶基因(lanosterol synthase gene,erg7)编码的羊毛甾醇合酶是酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)甾醇生物合成途径中重要的限速酶。酿酒酵母固有的甲羟戊酸(MVA)/麦角甾醇代谢途径的中间体2,3-氧化鲨烯也是三萜类化合物的合成前体。因此,羊毛甾醇合酶催化的2,3-氧化鲨烯环化是麦角甾醇和三萜类化合物生物合成分支形成的关键位点。下调2,3-氧化鲨烯流向麦角甾醇的代谢,可为应用合成生物学技术在酿酒酵母中组建三萜类化合物的代谢途径奠定基础。本研究通过设计含有与erg7基因ORF序列两侧同源的长引物,以质粒PUG66为模板进行PCR,构建带有loxP-Marker-loxP的erg7基因敲除组件,采用LiAc/SS Carrier DNA/PEG方法转化双倍体野生型酿酒酵母INVSc1,通过同源重组的方式构建酿酒酵母erg7基因单倍体缺陷型突变株。半定量PCR和实时定量PCR结果表明,突变株内erg7基因表达水平下降约1倍。TLC和HPLC结果表明,突变株内麦角甾醇含量下降至野生型菌株的42%。

关键词：酿酒酵母 erg7基因基因敲除同源重组麦角甾醇

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植物天门冬酰胺连接酶在大环肽类药物应用中的研究进展

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药学学报 2023年第9期58卷 2656-2668页

作者：申欣刘忞之杨燕王伟中国医学科学院、北京协和医学院药物研究所天然药物活性物质与功能国家重点实验室/国家卫生健康委员会天然药物生物合成重点实验室北京100050

植物中的天门冬酰胺内肽酶(asparaginyl endopeptidases,AEPs)属于半胱氨酸蛋白酶家族,以酶原的形式在酸性液泡中发生自激活,在种子储存蛋白成熟、蛋白质降解、细胞程序性死亡和宿主防御中发挥着重要的生理作用。最近从几种富含环肽的... 详细信息

植物中的天门冬酰胺内肽酶(asparaginyl endopeptidases,AEPs)属于半胱氨酸蛋白酶家族,以酶原的形式在酸性液泡中发生自激活,在种子储存蛋白成熟、蛋白质降解、细胞程序性死亡和宿主防御中发挥着重要的生理作用。最近从几种富含环肽的植物中分离鉴定了促进环肽成熟的生物加工酶-天门冬酰胺连接酶(peptidyl Asxspecific ligases,PALs),由AEPs进化而来,可位点特异性催化天冬酰胺或天冬氨酸肽键的生成,由于相对无痕和宽泛的底物谱以及催化效率高等优势,已经在多肽和蛋白质的环化和修饰方面起到重要作用,是提高多肽类药物稳定性的有力工具。本文介绍了AEPs在植物中的生理功能,综述了PALs的发现、结构特点、催化机制和蛋白质工程,以及限制其应用的原因和未来的发展趋势。此外,还重点阐述了PALs在环肽生物合成以及在大环肽类药物开发中的应用,旨在为生物催化合成环多肽类药物提供一种新思路。

关键词：天门冬酰胺内肽酶天门冬酰胺连接酶大环肽酶促环化位点特异性连接

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利用反义RNA技术抑制酿酒酵母羊毛甾醇合酶基因的表达

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药学学报 2015年第1期50卷 118-122页

作者：王庆华高丽丽梁会超杜国华巩婷杨金玲朱平中国医学科学院、北京协和医学院药物研究所天然药物活性物质与功能国家重点实验室卫生部天然药物生物合成重点实验室北京100050

羊毛甾醇合酶催化的2,3-氧化鲨烯环化是麦角甾醇和三萜类化合物生物合成分支形成的关键位点,下调2,3-氧化鲨烯流向麦角甾醇的代谢途径可促进其流向三萜类化合物的代谢途径。有鉴于此,本研究根据酿酒酵母羊毛甾醇合酶基因(lanosterol syn... 详细信息

羊毛甾醇合酶催化的2,3-氧化鲨烯环化是麦角甾醇和三萜类化合物生物合成分支形成的关键位点,下调2,3-氧化鲨烯流向麦角甾醇的代谢途径可促进其流向三萜类化合物的代谢途径。有鉴于此,本研究根据酿酒酵母羊毛甾醇合酶基因(lanosterol synthase gene,erg7)序列设计引物,扩增5'长片段(包括erg7基因5'非编码区启动子序列和部分编码区序列)、5'短片段(包括erg7基因5'非编码区部分启动子序列和部分编码区序列)和erg7基因编码区片段,分别将其反向克隆到表达载体p ESC-URA上,构建反义表达质粒。用反义表达质粒转化酿酒酵母INVSc1,在营养缺陷型培养基SD-URA上筛选重组菌株。通过半定量PCR进行检测,结果表明:与INVSc1相比,转入erg7基因编码区反义片段的重组菌株内羊毛甾醇合酶基因表达量没有显著变化,而转入5'长反义片段和5'短反义片段的重组菌株内羊毛甾醇合酶基因表达量明显降低。通过TLC和HPLC方法比较麦角甾醇含量,结果表明:与INVSc1相比,转入5'短反义片段和erg7基因编码区反义片段的重组菌株内麦角甾醇含量没有显著变化,而转入5'长反义片段的重组菌株内麦角甾醇含量明显降低。本研究利用反义RNA技术抑制酿酒酵母中羊毛甾醇合酶基因的表达,为应用合成生物学技术在酿酒酵母中组建三萜类化合物代谢途径奠定了基础。

关键词：酿酒酵母 erg7基因反义RNA 麦角甾醇

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杜松烷型倍半萜天然产物的研究进展

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生物工程学报 2021年第6期37卷 1952-1967页

作者：姜龙瑜温艳华彭雨陈天娇陈晶晶杨金玲巩婷朱平中国医学科学院北京协和医学院药物研究所天然药物活性物质与功能国家重点实验室&国家卫生健康委员会天然药物生物合成重点实验室北京100050

杜松烷型倍半萜是一类双环倍半萜,立体化学复杂,具有广泛药理活性,如抗菌、抗炎、降糖等。迄今为止,已从多种植物和微生物中分离鉴定出具有不同结构及生物活性的杜松烷型化合物,相关杜松烷型倍半萜合酶的研究也取得较大进展。本文按5种... 详细信息

杜松烷型倍半萜是一类双环倍半萜,立体化学复杂,具有广泛药理活性,如抗菌、抗炎、降糖等。迄今为止,已从多种植物和微生物中分离鉴定出具有不同结构及生物活性的杜松烷型化合物,相关杜松烷型倍半萜合酶的研究也取得较大进展。本文按5种结构类型对近4年(2017-2020年)文献发表的结构新颖的124个杜松烷型化合物进行整理,并对其药理活性进行归纳总结,同时介绍了代表性杜松烷型化合物生物合成途径的解析概况,归纳了该类天然产物生物合成过程中关键杜松烷型倍半萜合酶的研究进展,并讨论了该类天然产物的研究前景和目前面临的一些问题。

关键词：杜松烷型倍半萜结构类型药理活性生物合成倍半萜合酶

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麦角菌Cp-1菌株遗传转化体系的建立

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药学学报 2016年第5期51卷 828-833页

作者：王维波陈晶晶朱平中国医学科学院、北京协和医学院药物研究所天然药物活性物质与功能国家重点实验室&国家卫生计生委天然药物生物合成重点实验室北京100050

麦角菌Cp-1菌株是本实验室筛选获得的工业生产菌株,能产生多种麦角生物碱。为了实现该菌株定向生物合成某种特定的药用麦角碱,遗传转化体系的建立不可或缺,但由于麦角菌本身存在遗传异质性,现有的遗传转化体系不能满足Cp-1菌株的需要。... 详细信息

麦角菌Cp-1菌株是本实验室筛选获得的工业生产菌株,能产生多种麦角生物碱。为了实现该菌株定向生物合成某种特定的药用麦角碱,遗传转化体系的建立不可或缺,但由于麦角菌本身存在遗传异质性,现有的遗传转化体系不能满足Cp-1菌株的需要。本文研究了菌丝体浓度、溶壁酶浓度和酶解时间对原生质体形成的影响,并考察了该菌株对不同抗生素的敏感性,以期建立其遗传转化体系。结果表明,使用1%溶壁酶(5 mL)25℃酶解菌丝体(1g)2 h后,即可产生大量的原生质体。在PEG的介导下,以1.5 mg·mL^(-1)的潮霉素B为筛选标记,转化质粒pAN7-1于原生质体,可获得大量转化子,PCR诊断证明外源基因已成功地整合到Cp-1菌株的基因组上。本研究为进一步改良Cp-1生产菌株奠定了重要的基础。

关键词：麦角菌麦角生物碱原生质体制备遗传转化

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生物催化介导的葛根素衍生化研究进展

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药学学报 2020年第7期55卷 1590-1603页

作者：王雪凝孔建强中国医学科学院、北京协和医学院药物研究所天然药物活性物质与功能国家重点实验室国家卫生健康委员会天然药物生物合成重点实验室北京100050

葛根素药理活性多样,临床上常用于心脑血管疾病的治疗,但也存在水溶解性差、生物利用度低等问题。结构修饰是改善药物性质的一种重要方法,基于酶法合成的生物催化因其高选择性而成为葛根素结构修饰的主要途径之一。迄今为止,生物催化可... 详细信息

葛根素药理活性多样,临床上常用于心脑血管疾病的治疗,但也存在水溶解性差、生物利用度低等问题。结构修饰是改善药物性质的一种重要方法,基于酶法合成的生物催化因其高选择性而成为葛根素结构修饰的主要途径之一。迄今为止,生物催化可以实现葛根素的酰化、糖基化和羟基化等修饰,已开发出多种水溶解性和生物利用度得到改善的活性葛根素衍生物。本文以修饰基团为导向,综述了将全细胞和工具酶作为生物催化剂获得葛根素衍生物的研究进展,以期为葛根素类药物的进一步合成、开发提供新思路。

关键词：葛根素生物催化结构修饰生物利用度溶解度

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人参达玛烯二醇-Ⅱ合酶在酿酒酵母中的表达、定位及功能研究

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药学学报 2016年第6期51卷 998-1003页

作者：梁会超高丽丽胡宗风巩婷陈晶晶杨金玲朱平中国医学科学院、北京协和医学院药物研究所天然药物活性物质与功能国家重点实验室国家卫生计生委天然药物生物合成重点实验室北京100050

为了研究人参达玛烯二醇-Ⅱ合酶(dammarenediol-Ⅱ synthase,DS)在酿酒酵母中的重组表达和定位,本研究克隆了人参中达玛烯二醇-Ⅱ合酶基因ds,并将其与绿色荧光蛋白基因gfp融合,构建了相应的重组表达质粒pESC-HIS-DS和pESC-HIS-DS-GFP,... 详细信息

为了研究人参达玛烯二醇-Ⅱ合酶(dammarenediol-Ⅱ synthase,DS)在酿酒酵母中的重组表达和定位,本研究克隆了人参中达玛烯二醇-Ⅱ合酶基因ds,并将其与绿色荧光蛋白基因gfp融合,构建了相应的重组表达质粒pESC-HIS-DS和pESC-HIS-DS-GFP,转化酿酒酵母INVSc1,获得了重组菌INVSc1-DS和INVSc1-DS-GFP。通过差速离心法制备重组菌微粒体,荧光显微镜下观察达玛烯二醇-Ⅱ合酶的表达及亚细胞定位,并通过酶促反应对该酶进行了功能鉴定,结果表明,DS为膜结合型蛋白,在体外能催化2,3-氧化鲨烯生成达玛烯二醇-Ⅱ。对重组菌发酵产物进行分析,结果表明,重组菌中产生了达玛烯二醇-Ⅱ,且通过将ds与gfp融合,重组菌中的达玛烯二醇-Ⅱ产量由7.53 mg·g^(-1)提高到12.24 mg·g^(-1),该结果为优化在酿酒酵母中构建的人参皂苷代谢途径提供了新思路。

关键词：达玛烯二醇-Ⅱ合酶绿色荧光蛋白融合表达酿酒酵母

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人参糖基转移酶PgUGT74AE2催化生成新型人参三醇皂苷研究

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药学学报 2018年第9期53卷 1565-1570页

作者：张婷婷梁会超巩婷胡宗风顾安頔杨金玲朱平中国医学科学院、北京协和医学院药物研究所天然药物活性物质与功能国家重点实验室&国家卫生健康委员会天然药物生物合成重点实验室北京100050

人参(Panaxginseng)来源的糖基转移酶Pg UGT74AE2能够催化原人参二醇(protopanaxadiol,PPD)的C-3位羟基发生糖基化反应,生成人参皂苷Rh2,但其催化原人参三醇(protopanaxatriol,PPT)的C-3位羟基发生糖基化反应的研究至今未见报道。本研... 详细信息

人参(Panaxginseng)来源的糖基转移酶Pg UGT74AE2能够催化原人参二醇(protopanaxadiol,PPD)的C-3位羟基发生糖基化反应,生成人参皂苷Rh2,但其催化原人参三醇(protopanaxatriol,PPT)的C-3位羟基发生糖基化反应的研究至今未见报道。本研究构建重组表达质粒p ET-32a-Pg UGT74AE2,转化大肠杆菌Transetta(DE3)感受态细胞,获得重组菌株Transetta-Pg UGT74AE2。通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-Dthiogalactoside, IPTG)诱导表达,获得重组Pg UGT74AE2。建立重组Pg UGT74AE2催化PPT的酶促反应体系,结果表明,Pg UGT74AE2能够催化PPT的C-3位羟基发生糖基化反应,生成产物3-O-β-D-glucopyranosyl-dammar-24-ene-3β,6α,12β,20S-tetraol。本研究通过酶促反应获得C-3位糖基化的新型人参三醇皂苷,可为创新药物研究提供原料。

关键词：人参糖基转移酶糖基化原人参三醇人参三醇皂苷

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人参皂苷生物合成相关糖基转移酶研究基本策略及进展

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药学学报 2015年第2期50卷 148-153页

作者：梁会超王庆华巩婷杜国华杨金玲朱平中国医学科学院、北京协和医学院药物研究所天然药物活性物质与功能国家重点实验室国家卫生计生委天然药物生物合成重点实验室北京100050

人参、西洋参和三七等传统中药材因其广泛且良好的药理活性一直倍受关注,而人参皂苷是其主要活性成分。糖基转移酶是催化人参皂苷生物合成最后一步的关键酶。人参皂苷苷元经过糖基转移酶的修饰,产生了复杂多样的人参皂苷,从而具有广泛... 详细信息

人参、西洋参和三七等传统中药材因其广泛且良好的药理活性一直倍受关注,而人参皂苷是其主要活性成分。糖基转移酶是催化人参皂苷生物合成最后一步的关键酶。人参皂苷苷元经过糖基转移酶的修饰,产生了复杂多样的人参皂苷,从而具有广泛的药理活性。目前人们已通过合成生物学技术实现了人参皂苷苷元和稀有人参皂苷compound K的合成。人参皂苷苷元的糖基化作为人参皂苷生物合成途径的最后一步,是整个合成途径中最重要的环节之一,近年来也取得了一些研究进展。本文介绍了人参皂苷生物合成途径中相关糖基转移酶研究的基本策略,并对相关进展进行了综述,为人参皂苷生物合成途径的深入解析及通过合成生物学途径获得人参皂苷提供理论参考。

关键词：人参人参皂苷生物合成糖基转移酶合成生物学

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