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第八届泛环渤海生物化学与分子生物学会2018年学术交流会

作者：公海艳马莉朱海燕纪庆苏培刘鹏曹善楠姚剑峰韩明哲周家喜许元富中国医学科学院中国协和医科大学血液病医院血液研究所实验血液学国家重点实验室

目的:采用计算机虚拟筛选(CADD)结合生物学检测的方法来筛选和研究抗TNF-α的小分子抑制剂。方法:计算机虚拟筛选结合体外细胞活性实验从小分子化合物库中筛选候选小分子化合物。MTT实验检测小分子化合物抑制TNF-α和TNF-β对L929细胞... 详细信息

目的:采用计算机虚拟筛选(CADD)结合生物学检测的方法来筛选和研究抗TNF-α的小分子抑制剂。方法:计算机虚拟筛选结合体外细胞活性实验从小分子化合物库中筛选候选小分子化合物。MTT实验检测小分子化合物抑制TNF-α和TNF-β对L929细胞的杀伤作用。Westernblot、RT-PCR及免疫荧光染色技术来研究小分子化合物对TNF-α和TNF-β下游信号通路的影响。等离子共振技术(SPR)检测小分子化合物与TNF-α的结合能力。采用小鼠急性肝炎模型来研究该小分子抑制剂的体内药效。结果:我们采用计算机虚拟筛选结合体外细胞活性筛选的方法从小分子化合物库(约含有9万个小分子化合物)中筛选出了一个候选小分子化合物——C87;C87可以剂量依赖性的抑制TNF-α和TNF-β对L929细胞的细胞毒作用;在L929细胞中,C87可以有效抑制TNF-α和TNF-β下游信号通路的激活,如Caspase-3、Caspase-8的活化,IκΒ-α的降解,及TNF-α引起的下游KC、TNF-α等基因表达的上调;SPR结果表明C87与TNF-α具有较高亲合力(KD=110n M);在小鼠的急性肝炎模型中,C87可以有效减弱TNF-α引起的炎症反应,显著提高小鼠的存活率。结论:获得了一个新型的TNF-α的小分子抑制剂—C87,它可以在体外有效的抑制TNF-α和TNF-β对L929细胞的细胞毒作用和有效阻断TNF-α和TNF-β下游信号通路的激活,并对小鼠急性肝炎模型具有较好的治疗效果,这使得C87有望在今后开发成为治疗TNF-α相关疾病的特异性小分子靶向药物。

关键词： TNF-α TNF-β 小分子抑制剂计算机虚拟筛选 SPR

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人脐带来源间充质干细胞向HepG2肝癌细胞原位移植瘤的归巢及分化

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中国肿瘤生物治疗杂志 2017年第6期24卷 595-600页

作者：范冬梅张子祥赵英新杨铭张砚君颜次慧蒋媛吕军强中国医学科学院北京协和医学院血液病医院血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020 天津医科大学基础医学院天津300070

目的:观察人脐带来源的间充质干细胞(human umbilical cord derived mesenchymal stem cell,HUMSC)向HepG2肝癌细胞原位移植瘤的归巢及分化。方法:二步法体外诱导HUMSC向肝细胞分化,通过Real-time PCR和Western blotting检测不同时间点HUMSC中肝细胞特异性基因甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)及白蛋白(albumin,ALB)mRNA和蛋白水平的变化;Transwell实验观察HUMSC在HepG2肝癌细胞条件培养基作用下的趋化现象;采用皮下-原位移植的方法建立BALB/c裸鼠的HepG2肝癌细胞原位移植瘤模型,利用慢病毒感染的方法将HUMSC标记CMV或AFP启动子驱动的f Luc,制备成***或***,并将其注射入荷瘤肝组织,IVIS成像系统观察***向肿瘤部位的迁移归巢及***在肝癌微环境中向肝细胞分化。结果:HUMSC在体外诱导培养过程中出现细胞形态学变化证明其向肝细胞分化,同时诱导培养后AFP、ALB mRNA和蛋白的表达明显升高(均P<0.05);HUMSC向HepG2肝癌细胞的趋化呈瘤细胞密度依赖性(P<0.01);***注射后2 d迁移并聚集于肝脏,注射后5 d肝脏内发光信号进一步增强;***肝内注射后24 h已向肝细胞分化,注射第7天AFP启动子活性最强,注射第9天活性消失。结论:在小鼠体内外证明了HUMSC具有向肝脏归巢及分化的能力,为今后MSC应用于肝癌基因靶向治疗提供了一种新的策略。

关键词：间充质干细胞肝癌归巢分化

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Twist-1基因在髓系白血病细胞中的表达及其作用

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中国肿瘤生物治疗杂志 2016年第2期23卷 168-174页

作者：牟雅堃王楠郭丹赵杨杨刘晓燕董成亚王淑为王琳任倩马小彤中国医学科学院暨协和医科大学血液病医院暨血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

目的:检测Twist-1基因在白血病患者和造血系统恶性肿瘤细胞系中的表达情况,并探讨其高表达对髓系白血病细胞增殖和凋亡的影响。方法:用Real-time PCR检测急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)、急性淋巴细胞白血病(acute lymphoi... 详细信息

目的:检测Twist-1基因在白血病患者和造血系统恶性肿瘤细胞系中的表达情况,并探讨其高表达对髓系白血病细胞增殖和凋亡的影响。方法:用Real-time PCR检测急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)、急性淋巴细胞白血病(acute lymphoid leukemia,ALL)、慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者和正常人的骨髓单个核细胞对照以及造血系统恶性肿瘤细胞系中Twist-1 mRNA表达情况。构建Twist-1过表达及干扰载体,制备慢病毒并感染髓系白血病细胞系K562、U937、KG-1a,通过细胞计数实验、集落形成实验、流式细胞术、Annexin V/PI方法评价Twist-1对白血病细胞增殖、集落形成能力、周期、凋亡的影响。结果:Twist-1在AML及CML患者中的表达水平显著高于对照(均P<0.05),而ALL患者与对照组没有显著差异(P>0.05)。在K562、U937、KG-1a中过表达及干扰实验证实,Twist-1高表达促进肿瘤细胞增殖、集落形成并抑制细胞凋亡;干扰Twist-1表达则效果相反。结论:Twist-1高表达于AML、CML髓系白血病细胞,并促进白血病细胞的增殖和抑制凋亡。

关键词： Twist-1基因髓系白血病细胞增殖细胞凋亡

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慢性淋巴细胞白血病合并急性髓系白血病多学科协作诊疗1例

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中国肿瘤临床 2017年第7期44卷 337-343页

作者：宁乔杨杨洪亮夏冰白丽萍曹增王慧君张翼鷟尤明健天津医科大学肿瘤医院血液科国家肿瘤临床医学研究中心天津市肿瘤防治重点实验室天津市恶性肿瘤临床医学研究中心天津市300060 天津医科大学肿瘤医院检验科天津市300060 中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院病理科、实验血液学国家重点实验室美国德克萨斯大学M.D.安德森肿瘤医院血液病理科

天津医科大学肿瘤医院血液科2014年6月收治慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphocytic leukemia,CLL)患者1例,该患者第1个周期化疗1个月后,在原有CLL细胞亚群的基础上发现另一群急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞亚群。此后... 详细信息

天津医科大学肿瘤医院血液科2014年6月收治慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphocytic leukemia,CLL)患者1例,该患者第1个周期化疗1个月后,在原有CLL细胞亚群的基础上发现另一群急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞亚群。此后,虽然未经针对性治疗,但肿瘤在较长时间内(约11个月余)均呈现稳定状态。通过回顾患者前期的相关检查,明确此病例为极其罕见的CLL/AML。汇集综合血液科、分子诊断科、病理科等多学科的诊疗意见和延伸讨论,本研究通过此病例对CLL/AML、肿瘤二次打击学说与肿瘤树状演化模型有了比较全面和直观的认识。

关键词：慢性淋巴细胞白血病急性髓系白血病多学科协作

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中性粒细胞上清液对人脐带间充质干细胞迁移的影响

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蚌埠医学院学报 2017年第7期42卷 845-847,851页

作者：郑丽坤张磊付岭刘金梅陈乃耀卢士红开滦总医院血液科河北唐山063000 开滦总医院骨科河北唐山063000 河北联合大学附属医院血液科河北唐山063000 中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

目的:探讨中性粒细胞上清液和人脐带间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)共培养后,对MSCs迁移的影响,为MSCs更好地应用于炎症性疾病的治疗提供理论依据。方法:分离脐血中性粒细胞,UC-MSCs和中性粒细胞按不同比例共培养后,提取中... 详细信息

目的:探讨中性粒细胞上清液和人脐带间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)共培养后,对MSCs迁移的影响,为MSCs更好地应用于炎症性疾病的治疗提供理论依据。方法:分离脐血中性粒细胞,UC-MSCs和中性粒细胞按不同比例共培养后,提取中性粒细胞上清液,UC-MSCs单独培养的为对照组(1∶0),UC-MSCs在不同浓度的中性粒细胞上清液中进行培养的为实验组,选择18 h和40 h作为培养时间,根据四甲基偶氮唑盐(MTT)的实验结果,选择具有统计学意义的1∶0、1∶1、1∶50分组和18 h作为实验对象,采用划痕的方法观察24 h内不同时间点MSCs的迁移情况。结果:划痕实验观察到1︰50实验组细胞的迁移较1∶0和1∶1实验组明显增快。结论:高浓度的中性粒细胞的上清液促进人脐带MSCs的迁移。

关键词：中性粒细胞上清液人脐带间充质干细胞迁移

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全内角反射技术与转盘式共聚焦技术在细胞膜表面的成像比较

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中国细胞生物学学报 2016年第1期38卷 65-71页

作者：于文颖耿广峰张辰陈婷梁昊岳程雪莲白杨杨晚竹中国医学科学院北京协和医学院血液病医院(血液学研究所)实验血液学国家重点实验室天津300020 天津医科大学总医院神经外科天津300052

转盘式共聚焦成像是一种高速、高分辨率成像技术,可以在高时间分辨率和空间分辨率的水平观察固定细胞内目标蛋白的分布及活细胞内目标蛋白的动态变化。全内角反射成像是一种观察距离玻片表面某个限定区域内蛋白质的分布和变化的成像技术... 详细信息

转盘式共聚焦成像是一种高速、高分辨率成像技术,可以在高时间分辨率和空间分辨率的水平观察固定细胞内目标蛋白的分布及活细胞内目标蛋白的动态变化。全内角反射成像是一种观察距离玻片表面某个限定区域内蛋白质的分布和变化的成像技术,常用于观察固定细胞以及活细胞表面的亚细胞结构。该文以中性粒细胞和神经胶质瘤细胞作为观察对象,通过观测固定细胞膜表面蛋白质的分布以及追踪膜标记活细胞的动态变化对两种成像方法进行了比较。结果发现,就目前技术水平而言,二者均可以采集到清晰的细胞边缘,但全内角反射可以拍摄到更清晰的细胞膜表面结构,它在动态拍摄过程中光漂白相对较低,在快速捕捉过程中能够更加全面的捕捉到一个完整的运动过程。

关键词：全内角反射转盘式共聚焦细胞成像

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scFvCD20:sTRAIL蛋白诱导BJAB细胞凋亡的实验研究

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现代免疫学 2016年第3期36卷 183-188页

作者：杨雨琪张晓龙张砚君吕军强孙睿声安鹏姣于楠楠天津医科大学药学院基础医学院天津300070 中国医学科学院北京协和医学院血液病医院血液研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

研究融合蛋白scFvCD20:sTRAIL诱导B淋巴瘤细胞BJAB凋亡的发生以及凋亡相关蛋白的表达变化。采用PCR、重叠PCR、酶切、连接等方法构建***20:sTRAIL、***-sTRAIL、***20及***慢病毒表达载体,瞬时转染293T细胞获得含有scFvCD20:sTRAIL融合... 详细信息

研究融合蛋白scFvCD20:sTRAIL诱导B淋巴瘤细胞BJAB凋亡的发生以及凋亡相关蛋白的表达变化。采用PCR、重叠PCR、酶切、连接等方法构建***20:sTRAIL、***-sTRAIL、***20及***慢病毒表达载体,瞬时转染293T细胞获得含有scFvCD20:sTRAIL融合蛋白的细胞培养上清,采用CCK8细胞增殖抑制实验检测scFvCD20:sTRAIL融合蛋白对CD20阳性BJAB细胞的生长抑制作用,流式细胞仪检测其对BJAB细胞诱导凋亡,Western blotting检测凋亡过程中内源性及外源性凋亡信号传导途径相关蛋白的变化。结果显示,成功构建了慢病毒表达载体***20:sTRAIL、***-sTRAIL、***20及***,瞬时转染293T细胞后并可获得融合蛋白的表达。与ISZ-sTRAIL比较,融合蛋白scFvCD20:sTRAIL可不同程度地提高对CD20阳性BJAB细胞的生长抑制作用,凋亡细胞增多,其中Bcl-2表达下降、Bax表达升高,Caspase 8、Caspase 9、Caspase 3及PARP被特异性剪切活化。研究表明,融合蛋白scFvCD20:sTRAIL可诱导BJAB细胞凋亡,与bcl-2/bax的表达变化以及Caspase的剪切活化有关。

关键词： CD20 TRAIL B淋巴细胞凋亡蛋白表达

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木香烃内酯对K562/A02细胞阿霉素耐药的逆转作用研究

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现代药物与临床 2016年第6期31卷 742-746页

作者：辛玥丁亚辉纪庆杨铭李迎辉高瀛岱天津医科大学总医院儿科天津300052 中国医学科学院北京协和医学院血液病医院血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

目的探索木香烃内酯对白血病耐药细胞系K562/A02阿霉素耐药的逆转作用。方法将木香烃内酯与K562/A02细胞共培养72 h后,采用MTT法检测木香烃内酯对细胞生长的抑制作用。不同浓度木香烃内酯处理K562/A02细胞24 h后,采用Annexin V和PI双染... 详细信息

目的探索木香烃内酯对白血病耐药细胞系K562/A02阿霉素耐药的逆转作用。方法将木香烃内酯与K562/A02细胞共培养72 h后,采用MTT法检测木香烃内酯对细胞生长的抑制作用。不同浓度木香烃内酯处理K562/A02细胞24 h后,采用Annexin V和PI双染法检测木香烃内酯对细胞的凋亡。不同浓度木香烃内酯与阿霉素共培养72 h后采用MTT法检测木香烃内酯对K562/A02细胞的耐药逆转情况。采用流式细胞仪检测木香烃内酯处理24 h之后K562/A02细胞阿霉素蓄积以及细胞膜表面P-糖蛋白（P-gp）的表达。结果木香烃内酯对K562/A02细胞的生长具有明显抑制作用,呈显著的剂量相关性。与对照组比较,2.5～50μmol/L木香烃内酯组K562/A02细胞存活率显著降低（P〈0.05、0.01、0.001）。随着木香烃内酯浓度的增加,凋亡细胞的比例明显增加。与对照组比较,不同浓度木香烃内酯组细胞凋亡比例显著升高（P〈0.05、0.01、0.001）。加入5μmol/L木香烃内酯后,使K562/A02细胞对阿霉素的敏感性提高12倍。木香烃内酯处理后K562/A02细胞内部阿霉素的蓄积明显增加,呈浓度相关性。与对照组比较,5、10μmol/L木香烃内酯组K562/A02细胞内部阿霉素的蓄积增加显著升高（P〈0.05）。细胞表面的P-gp的表达并无显著影响。结论木香烃内酯能够抑制K562/A02细胞增殖,诱导K562/A02细胞凋亡,增强阿霉素的化疗敏感性,逆转阿霉素耐药。

关键词：木香烃内酯 K562/A02细胞阿霉素耐药细胞凋亡 P-糖蛋白

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scFvOD20：sTRAIL蛋白诱导BJAB细胞凋亡的实验研究

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现代免疫学 2016年第3期36卷 183-188页

作者：杨雨琪张晓龙张砚君吕军强孙睿声安鹏姣于楠楠天津医科大学药学院基础医学院天津300070 中国医学科学院、北京协和医学院血液病医院血液研究所/实验血液学国家重点实验室天津300020

研究融合蛋白scFvCD20:sTRAIL诱导B淋巴瘤细胞BJAB凋亡的发生以及凋亡相关蛋白的表达变化。采用PCR、重叠PCR、酶切、连接等方法构建***20:sTRAIL、pLentiR,ISZ-sTRAIL,***20及***-FP慢病毒表达载体,瞬时转染293T细胞获得含有scFvCD20:sTRAII。融合蛋白的细胞培养上清,采用CCK8细胞增殖抑制实验检测scFvCD20:sTRAIL融合蛋白对CD20阳性NAB细胞的生长抑制作用,流式细胞仪检测其对BJAB细胞诱导凋亡,Westernblotting检测凋亡过程中内源性及外源性凋亡信号传导途径相关蛋白的变化。结果显示,成功构建了慢病毒表达载体***20:sTRAIL、***-sTRAIL、***20及***,瞬时转染293T细胞后并可获得融合蛋白的表达。与ISZ-sTRAIL比较,融合蛋白seFvCD20}sTRAIL可不同程度地提高对CD20阳性BJAB细胞的生长抑制作用,凋亡细胞增多,其中Bcl-2表达下降、Bax表达升高,Caspase8、Caspase9、Caspase3及PARP被特异性剪切活化。研究表明,融合蛋白scFvCD20:sTRAIL可诱导BJAB细胞凋亡,与bcl-2/bax的表达变化以及Caspase的剪切活化有关。

关键词：基因表达聚合酶链反应慢病毒属细胞凋亡细胞增殖原癌基因重组融合蛋白质类转染

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肾功能对β2微球蛋白水平作为多发性骨髓瘤国际分期系统预后因素的影响——单中心666例临床分析

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中华血液学杂志 2015年第5期36卷 393-397页

作者：秦小琪徐燕安刚秦宇冯晓燕隋伟薇邓书会藏美蓉吕瑞王婷玉李增军易树华邱录贵 300020天津中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室天津医科大学基础医学院诊断学教研室

目的分析不同β2微球蛋白（β2-MG）水平合并或不合并肾功能异常的初诊多发性骨髓瘤（MM）患者的生存情况,探讨肾功能对β2微球蛋白作为MM预后因素的影响.方法对1999年2月至201 3年10月666例初诊MM患者临床资料进行回顾性分析,以血肌... 详细信息

目的分析不同β2微球蛋白（β2-MG）水平合并或不合并肾功能异常的初诊多发性骨髓瘤（MM）患者的生存情况,探讨肾功能对β2微球蛋白作为MM预后因素的影响.方法对1999年2月至201 3年10月666例初诊MM患者临床资料进行回顾性分析,以血肌酐＜177 μmol/L为肾功能相对正常组,血肌酐≥177 μmol/L为肾功能异常组,分析不同β2-MG水平及肾功能状态患者总生存（OS）情况.结果 666例患者中男416例,女250例,中位年龄58（25～86）岁.β2-MG＜3.5、3.5～＜5.5及≥5.5 mg/L患者分别为208、173及285例,其OS时间分别为85.75 （95％ CI 70.99～100.50）、47.25 （95％ CI 40.98～53.53）及35.05（95％CI30.75～39.35）个月,差异有统计学意义（P＜0.01）.肾功能相对正常与肾功能异常患者OS时间分别为64.67（95％CI56.57～72.77）及32.74（95％CI27.74～37.73）个月,差异有统计学意义（P＜0.01）.在β2-MG≥5.5 mg/L的患者中,肾功能相对正常与肾功能异常患者OS时间分别为37.25（95％ CI 31.45～43.06）个月、32.55（95％ CI26.26～38.83）个月,差异无统计学意义（P=0.142）.结论高水平β2-MG、肾功能异常MM患者生存时间较短,是否合并肾功能异常并未改变β2-MG作为MM国际分期系统预后因素的影响.

关键词：多发性骨髓瘤 β2微球蛋白国际分期系统肾功能

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