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第十五届中国西部实验动物管理与学术交流会

作者：匡德宣王文广孙晓梅黄晓云陆彩霞罕园园仝品芬代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的：了解树鼩主要消化腺的组织学结构特征,建立树鼩正常的消化腺组织学图谱. 方法：采用常规组织处理、制片、HE染色及显微镜技术对人工驯养繁殖仔一代树鼩腮腺、颌下腺、舌下腺、胰腺和肝脏进行了组织学观察. 结果：(1)腮腺为... 详细信息

目的：了解树鼩主要消化腺的组织学结构特征,建立树鼩正常的消化腺组织学图谱. 方法：采用常规组织处理、制片、HE染色及显微镜技术对人工驯养繁殖仔一代树鼩腮腺、颌下腺、舌下腺、胰腺和肝脏进行了组织学观察. 结果：(1)腮腺为纯浆液性腺泡,闰管明显,管壁由单层低立方形上皮细胞组成,官腔充满分泌物.(2)颌下腺为混合性腺体,以浆液性腺泡为主,分泌管较长.(3)舌下腺是以黏液性腺泡为主的混合腺,含有少量闰管.(4)肝脏表面为一薄层致密结缔组织被膜,肝实质为多个分界不明显的肝小叶,肝小叶中央为中央静脉.肝细胞呈多边形,核大而圆,位于细胞中央,多数为单核,少数为双核,细胞质呈红色,胞质内有空泡和小腔隙.汇管区小叶间动脉、小叶间静脉及小叶间胆管结构较为明显.(5)胰腺表面为一层疏松结缔组织被膜,胰腺实质由外分泌部和内分泌部组成.外分泌部包含腺泡和导管,腺泡由浆液性腺细胞组成,导管由闰管、小叶内导管、小叶间导管、叶间导管和胰管组成.内分泌部又称为胰岛,是一些大小不等的细胞团和细胞索,不规则地散布于外分泌部的腺泡之间,胞质染色较外分泌部浅. 结论：树鼩消化腺在组织形态学上接近于灵长类动物,可以为研究树鼩消化腺的功能和病变,以及建立人类相关疾病的动物模型提供组织学依据.

关键词：树鼩人工驯养消化腺组织形态学

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树鼩小肠上皮细胞的体外分离培养与鉴定

树鼩小肠上皮细胞的体外分离培养与鉴定

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第十二届中国实验动物科学年会

作者：尹博文陈玲霞宋庆凯苗雨润李晓飞孙晓梅中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的从树鼩小肠分离小肠上皮细胞,探索分离培养方法和条件。为药物开发和病原感染机制研究提供体外细胞模型,并且为建立树鼩小肠上皮细胞系奠定基础。方法采用胶原酶Ⅺ和中性蛋白酶Ⅰ及DTT联合消化树鼩小肠组织块,得到的细胞经完全培... 详细信息

目的从树鼩小肠分离小肠上皮细胞,探索分离培养方法和条件。为药物开发和病原感染机制研究提供体外细胞模型,并且为建立树鼩小肠上皮细胞系奠定基础。方法采用胶原酶Ⅺ和中性蛋白酶Ⅰ及DTT联合消化树鼩小肠组织块,得到的细胞经完全培养液培养,用相差显微镜观察细胞形态,通过MTr法测定细胞生长曲线,并采用细胞角蛋白荧光染色等方法鉴定细胞。结果经优化分离法得到的肠上皮隐窝细胞团在24h后贴壁,6d汇合成片,在显微镜下观察发现细胞团延辐射状向外长出铺路石样和多角状的细胞;第二代后,每隔2～3d可传代1次;细胞接种3～6d为对数生长期;细胞角蛋白18进行免疫荧光鉴定后确定为小肠上皮细胞。结论本实验成功地从树鼩小肠分离到了小肠上皮细胞,并且建立了树鼩小肠上皮细胞体外培养的方法。

关键词：树鼩小肠上皮细胞酶消化免疫荧光鉴定

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野生树鼩肠道蠕虫感染调查及分析

野生树鼩肠道蠕虫感染调查及分析

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第十五届中国西部实验动物管理与学术交流会

作者：孙晓梅仝品芬匡德宣陈玲霞王文广陆彩霞代解杰中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的：调查野生树鼩(Tupaia Belangeri Chinensis)感染肠道蠕虫的主要种类并进行鉴定,为今后树鼩寄生虫检测提供形态学参考,为实验树鼩寄生虫控制提供依据. 方法：采集203只野外来源的树鼩新鲜粪便,虫卵采用常规粪便直接涂片以及孵... 详细信息

目的：调查野生树鼩(Tupaia Belangeri Chinensis)感染肠道蠕虫的主要种类并进行鉴定,为今后树鼩寄生虫检测提供形态学参考,为实验树鼩寄生虫控制提供依据. 方法：采集203只野外来源的树鼩新鲜粪便,虫卵采用常规粪便直接涂片以及孵化后显微镜观察;绦虫采用压片、固定染色,以及线虫经透明后体视镜观察,虫卵与成虫相对应鉴定. 结果：野生树鼩肠道蠕虫的总感染率为75.86％,主要感染种类有3种,经鉴定为长膜壳绦虫、奇口线虫和粪类圆线虫,感染率分别为27.67％,30.06％和51.52％.三种蠕虫的混合感染率为4.55％.两种线虫虫卵在树鼩粪便中多为含胚胎形态. 结论：野生树鼩肠道蠕虫的感染率较高.对野外引入的新种源必须隔离检疫,进行针对性的药物治疗,才能有效地控制肠道寄生虫病的传播.

关键词：野生树鼩肠道蠕虫感染率种属鉴定

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腹泻树鼩溶组织内阿米巴原虫携带情况调查

腹泻树鼩溶组织内阿米巴原虫携带情况调查

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第十二届中国实验动物科学年会

作者：宋庆凯苗雨润尹博文陈玲霞代解杰孙晓梅中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的调查腹泻树鼩肠道中溶组织内阿米巴携带情况，查找导致树鼩腹泻的寄生虫类病原，为实验树鼩的寄生虫质量控制提供依据.方法采集78只腹泻树鼩新鲜粪便和全血，分离血清，其中野生来源样本45份，人工繁育样本33份.分别采用生理盐水... 详细信息

目的调查腹泻树鼩肠道中溶组织内阿米巴携带情况，查找导致树鼩腹泻的寄生虫类病原，为实验树鼩的寄生虫质量控制提供依据.方法采集78只腹泻树鼩新鲜粪便和全血，分离血清，其中野生来源样本45份，人工繁育样本33份.分别采用生理盐水涂片法、碘液染色法进行溶组织内阿米巴形态学检测，采用ELISA法进行粪便特异性抗原和血清中IgG抗体检测.结果形态学镜检结果显示，野生来源和人工繁育腹泻树鼩肠道中溶组织内阿米巴携带率分别为42.22％(19/45)、33.33％(11/33);粪便中特异性抗原经ELISA检测，溶组织内阿米巴携带率分别为64.44％(29/45)、42.42％(14/33);经ELISA检测的血清抗体IgG阳性率分别为66.67％(30/45)、63.63％(21/33).结论腹泻树鼩对溶组织内阿米巴原虫的携带率较高，该原虫可能是导致树鼩腹泻的病原之一.特异性ELISA粪便抗原检出率高于形态学镜检法.日常饲养过程中应加强阿米巴病的监测和防治，防止肠道寄生虫病的传播.

关键词：树鼩溶组织内阿米巴形态学检测 ELISA检测

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树鼩粪便中病毒三种浓缩方法的效果比较

树鼩粪便中病毒三种浓缩方法的效果比较

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第十二届中国实验动物科学年会

作者：陈玲霞尹博文苗雨润宋庆凯李晓飞代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室树鼩种质资源中心昆明650118

目的比较树鼩粪便中病毒的三种浓缩方法,评价各方法的浓缩效果,为病毒浓缩方法的最佳选择提供依据.方法将指示病毒(树鼩呼肠孤病毒TRV)加入经离心过滤处理后的野生树鼩粪便上清中,采用PEG沉淀结合超声分离法、铁离子絮凝的化学方法和G... 详细信息

目的比较树鼩粪便中病毒的三种浓缩方法,评价各方法的浓缩效果,为病毒浓缩方法的最佳选择提供依据.方法将指示病毒(树鼩呼肠孤病毒TRV)加入经离心过滤处理后的野生树鼩粪便上清中,采用PEG沉淀结合超声分离法、铁离子絮凝的化学方法和GBviroFast病毒浓缩试剂盒对树鼩粪便上清分别进行浓缩,经实时荧光定量PCR技术对指示病毒进行绝对定量,比较各方法的浓缩效果.结果 TRV病毒悬液的载量为1.34E+ 05;铁离子絮凝的化学方法浓缩的载量为1.86E+ 04,浓缩效率为49.57％;GBviroFast病毒浓缩试剂盒浓缩的TRV载量为0.98E+04,浓缩效率为26.12％;PEG沉淀结合超声分离法浓缩的TRV载量为2.30E+03,浓缩效率为6.13％.结论三种方法均能浓缩粪便上清中低浓度的肠道病毒,铁离子絮凝方法最佳,GBviroFast病毒浓缩试剂盒其次,PEG结合超声分离最差.

关键词：实时荧光定量PCR 病毒浓缩粪便树鼩

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树鼩脂肪转录组SNP位点发掘及其功能注释分析

树鼩脂肪转录组SNP位点发掘及其功能注释分析

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第十二届中国实验动物科学年会

作者：罕园园孙晓梅匡德宣陆彩霞仝品芬王文广李娜代解杰中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心、云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

从正常笼养树鼩腹部的脂肪转录组数据开发SNP分子标记.检测了6只动物共计274278568条unigene(总长度43138417bp)序列信息后,在262980条unigene(5.75％)中共发现SNP位点262980个,SNP发生频率为1/27bp,其中转换(transition)177562个,颠换(transversion)85509个.在所有变异类型中,A/G和C/T发生频率最高,分别达33.85％和33.66％.为进一步对得到的SNP所在基因功能进行分析,将包含SNP位点的262980条unigene通过参比序列进行注释,并对其进行GO分类、COG分类注释和代谢通路注释(KEGG pathway),结合已有研究,筛选到1 187个可能脂肪转录组中的可能与脂肪形成和代谢有关的SNP标记.

关键词：树鼩转录组单核苷酸多态性(SNP) 功能注释脂肪形成

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野生树鼩肠道蠕虫感染调查及分析

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中国比较医学杂志 2015年第2期25卷 15-17,21,I0003页

目的调查野生树鼩(Tupaia belangeri Chinensis)感染肠道蠕虫的主要种类并进行鉴定,为今后树鼩寄生虫检测提供形态学参考,为实验树鼩寄生虫控制提供依据。方法采集203只野外来源的树鼩新鲜粪便,虫卵采用常规粪便直接涂片以及孵化后显微... 详细信息

目的调查野生树鼩(Tupaia belangeri Chinensis)感染肠道蠕虫的主要种类并进行鉴定,为今后树鼩寄生虫检测提供形态学参考,为实验树鼩寄生虫控制提供依据。方法采集203只野外来源的树鼩新鲜粪便,虫卵采用常规粪便直接涂片以及孵化后显微镜观察;绦虫采用压片、固定染色,以及线虫经透明后体视镜观察,虫卵与成虫相对应鉴定。结果野生树鼩肠道蠕虫的总感染率为75.86%,主要感染种类有3种,经鉴定为长膜壳绦虫、奇口线虫和粪类圆线虫,感染率分别为27.67%,30.06%和51.52%。三种蠕虫的混合感染率为4.55%。两种线虫虫卵在树鼩粪便中多为含胚胎形态。结论野生树鼩肠道蠕虫的感染率较高。对野外引入的新种源必须隔离检疫,进行针对性的药物治疗,才能有效地控制肠道寄生虫病的传播。

关键词：树鼩肠道蠕虫长膜壳绦虫奇口线虫粪类圆线虫

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树鼩鞭毛虫的形态学观察及其18S rRNA基因分析

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中国比较医学杂志 2015年第11期25卷 5-8,I0004页

作者：陈玲霞尹博文李振宇孙晓梅代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的对树鼩体内的鞭毛虫进行形态学观察及基因分析鉴定。方法取树鼩回盲部内容物和粪便经过滤离心处理直接涂片和碘液染色镜检,传统方法提取虫体总DNA,PCR扩增该鞭毛虫的18S rRNA,测序后经BLAST进行同源性分析,并应用MEGA5.1绘制系统发... 详细信息

目的对树鼩体内的鞭毛虫进行形态学观察及基因分析鉴定。方法取树鼩回盲部内容物和粪便经过滤离心处理直接涂片和碘液染色镜检,传统方法提取虫体总DNA,PCR扩增该鞭毛虫的18S rRNA,测序后经BLAST进行同源性分析,并应用MEGA5.1绘制系统发育进化树。结果形态学观察表明树鼩体内的鞭毛虫为三毛滴虫;测序分析表明树鼩鞭毛虫序列18S rRNA与已报道的胎儿三毛滴虫18S rRNA(AY754332.1)同源性高达99%。结论树鼩体内可感染胎儿三毛滴虫,研究结果为树鼩的寄生虫学质量控制提供依据。

关键词：鞭毛虫树鼩形态观察 18S rRNA

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人工饲养树鼩皮肤真菌携带的调查

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中国比较医学杂志 2015年第11期25卷 13-16页

作者：尹博文陈玲霞李振宇李娜孙晓梅中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的调查人工饲养条件下树鼩皮肤真菌携带情况,为实验树鼩的微生物质量控制提供依据。方法刮取79只树鼩皮肤表皮碎屑,包括野生来源的51只和人工繁殖的F1代28只,采用沙氏青霉素瓶斜面法和沙氏平皿培养法分别进行培养,对长出的每株真菌进... 详细信息

目的调查人工饲养条件下树鼩皮肤真菌携带情况,为实验树鼩的微生物质量控制提供依据。方法刮取79只树鼩皮肤表皮碎屑,包括野生来源的51只和人工繁殖的F1代28只,采用沙氏青霉素瓶斜面法和沙氏平皿培养法分别进行培养,对长出的每株真菌进行取样涂片染色,显微镜镜检观察真菌形态,用酚氯仿法提取真菌DNA,PCR扩增ITS基因,测序后经BLAST进行核酸同源性比对,进一步鉴定分析。结果野生来源树鼩有9份样长出真菌,F1代有3份样长出真菌菌落,携带率分别15.69%和10.71%。所有真菌DNA最后进行BLAST比对鉴定后发现为7个种属的真菌,但均无致病性。结论人工饲养的树鼩种群中皮肤真菌携带率较低,并且随繁殖代次增加而下降,未检测到皮肤病原真菌。

关键词：树鼩皮肤真菌 ITS基因扩增鉴定

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丙型肝炎病毒的细胞和实验动物模型研究进展

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中国兽医杂志 2015年第2期51卷 59-62页

作者：陆彩霞匡德宣代解杰中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南昆明650118 云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

丙型肝炎是正在严重危害人类健康的一重大传染病,据世界卫生组织（WHO）统计,目前全球丙型肝炎病毒（HCV）感染者达1.7亿,每年新发300万至400万.HCV是单股正链RNA病毒,属于黄病毒科肝炎病毒属,感染后主要引起慢性肝炎、肝纤维化和肝细... 详细信息

丙型肝炎是正在严重危害人类健康的一重大传染病,据世界卫生组织（WHO）统计,目前全球丙型肝炎病毒（HCV）感染者达1.7亿,每年新发300万至400万.HCV是单股正链RNA病毒,属于黄病毒科肝炎病毒属,感染后主要引起慢性肝炎、肝纤维化和肝细胞肝癌.目前已发现6个基因型及多个亚型,这些亚型有不同的地理分布,疾病进程和对药物治疗的不同反应.

关键词：丙型肝炎病毒肝细胞肝癌实验动物模型正链RNA病毒世界卫生组织重大传染病人类健康黄病毒科

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