检索结果-内蒙古大学图书馆

实验动物科学 2016年第5期33卷 1-8页

作者：苗雨润宋庆凯陈玲霞尹博文李晓飞代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室树鼩种子资源中心昆明650118

目的建立树鼩角膜内皮细胞(corneal endothelial cells,CECs)体外分离、培养及纯化的稳定技术,为人类眼科角膜疾病提供新的实验材料。方法通过比较揭膜法、双酶消化法及揭膜-消化两步法,确定每种树鼩原代CECs取材方法的优劣性。分别使用... 详细信息

目的建立树鼩角膜内皮细胞(corneal endothelial cells,CECs)体外分离、培养及纯化的稳定技术,为人类眼科角膜疾病提供新的实验材料。方法通过比较揭膜法、双酶消化法及揭膜-消化两步法,确定每种树鼩原代CECs取材方法的优劣性。分别使用DMEM/F12,M199,Ham’s F12/M199三种培养液以确定树鼩CECs原代细胞最适培养液。使用TGF-β抑制剂、低血清培养法及梯度消化法来探讨树鼩CECs纯化的可行性。苏木精-伊红染色观察细胞形态,根据树鼩神经元烯醇化酶(NES)设计并筛选特异性引物,使用PCR方法检测细胞NES表达情况并用NES抗体进行细胞免疫荧光染色鉴定。结果揭膜法可以快速、有效得到高纯度的树鼩CECs细胞。Ham’s F12/M199培养液是树鼩CECs的最适培养液。使用TGF-β抑制剂可以达到CECs的纯化目的。结论优化的树鼩CECs细胞培养纯化方法对树鼩CECs的体外培养更适宜,优化条件下分离培养的细胞符合CECs的一般特征。

关键词：树鼩角膜内皮细胞体外原代培养优化

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树鼩粪便中病毒三种浓缩方法的效果比较

树鼩粪便中病毒三种浓缩方法的效果比较

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第十二届中国实验动物科学年会（2016.南宁）

作者：陈玲霞尹博文苗雨润宋庆凯李晓飞代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室树鼩种质资源中心

目的比较树鼩粪便中病毒的三种浓缩方法,评价各方法的浓缩效果,为病毒浓缩方法的最佳选择提供依据。方法将指示病毒(树鼩呼肠孤病毒TRV)加入经离心过滤处理后的野生树鼩粪便上清中,采用PEG沉淀结合超声分离法、铁离子絮凝的化学方法和GB... 详细信息

目的比较树鼩粪便中病毒的三种浓缩方法,评价各方法的浓缩效果,为病毒浓缩方法的最佳选择提供依据。方法将指示病毒(树鼩呼肠孤病毒TRV)加入经离心过滤处理后的野生树鼩粪便上清中,采用PEG沉淀结合超声分离法、铁离子絮凝的化学方法和GBviroFast病毒浓缩试剂盒对树鼩粪便上清分别进行浓缩,经实时荧光定量PCR技术对指示病毒进行绝对定量,比较各方法的浓缩效果。结果TRV病毒悬液的载量为1.34E+05;铁离子絮凝的化学方法浓缩的载量为1.86E+04,浓缩效率为49.57%;GBviroFast病毒浓缩试剂盒浓缩的TRV载量为0.98E十04,浓缩效率为26.12%;PEG沉淀结合超声分离法浓缩的TRV载量为2.30E+03,浓缩效率为6.13%。结论三种方法均能浓缩粪便上清中低浓度的肠道病毒,铁离子絮凝方法最佳,GBviroFast病毒浓缩试剂盒其次,PEG结合超声分离最差。

关键词：实时荧光定量PCR 病毒浓缩粪便树鼩

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腹泻树鼩肠道阿米巴原虫携带情况调查

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实验动物与比较医学 2016年第6期36卷 415-418页

作者：宋庆凯苗雨润尹博文陈玲霞代解杰孙晓梅中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树胸种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的调查腹泻树鼩肠道中阿米巴原虫携带情况，查找可能导致树鼩腹泻的寄生虫类病原，为实验树鼩的寄生虫质量控制提供依据。方法采集78只腹泻树鼩新鲜粪便和全血，分离血清，其中野生来源样本45份，人工繁育样本33份。分别采用生理盐水... 详细信息

目的调查腹泻树鼩肠道中阿米巴原虫携带情况，查找可能导致树鼩腹泻的寄生虫类病原，为实验树鼩的寄生虫质量控制提供依据。方法采集78只腹泻树鼩新鲜粪便和全血，分离血清，其中野生来源样本45份，人工繁育样本33份。分别采用生理盐水涂片法、碘液染色法进行阿米巴原虫形态学检测，采用ELISA方法进行粪便中阿米巴抗原和血清中IgG抗体检测。结果形态学镜检结果显示，野生来源和人工繁育腹泻树鼩肠道中阿米巴原虫携带率分别为42．22％（19／45）、33．33％（11／33）；经ELISA检测粪便中阿米巴抗原，阿米巴原虫携带率分别为64．44％（29／45）、42．42％（14／33）。采用ELISA粪便抗原检出率高于形态学镜检法。经ELISA检测血清IgG抗体阳性率分别为66．67％（30／45）、63．63％（21／33）。结论腹泻树鼩对阿米巴原虫的携带率较高，该原虫可能是导致树询腹泻的病原之一。日常饲养过程中应加强阿米巴病的监测和防治，防止肠道寄生虫病的传播。

关键词：树鼩阿米巴原虫形态学检测 ELISA检测

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腹泻树鼩溶组织内阿米巴原虫携带情况调查

腹泻树鼩溶组织内阿米巴原虫携带情况调查

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第十二届中国实验动物科学年会（2016.南宁）

作者：宋庆凯苗雨润尹博文陈玲霞代解杰孙晓梅中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室

目的调查腹泻树鼩肠道中溶组织内阿米巴携带情况,查找导致树鼩腹泻的寄生虫类病原,为实验树鼩的寄生虫质量控制提供依据。方法采集78只腹泻树鼩新鲜粪便和全血,分离血清,其中野生来源样本45份,人工繁育样本33份。分别采用生理盐水涂片... 详细信息

目的调查腹泻树鼩肠道中溶组织内阿米巴携带情况,查找导致树鼩腹泻的寄生虫类病原,为实验树鼩的寄生虫质量控制提供依据。方法采集78只腹泻树鼩新鲜粪便和全血,分离血清,其中野生来源样本45份,人工繁育样本33份。分别采用生理盐水涂片法、碘液染色法进行溶组织内阿米巴形态学检测,采用ELISA法进行粪便特异性抗原和血清中IgG抗体检测。结果形态学镜检结果显示,野生来源和人工繁育腹泻树鼩肠道中溶组织内阿米巴携带率分别为42.22%(19/45)、33.33%(11/33);粪便中特异性抗原经ELISA检测,溶组织内阿米巴携带率分别为64.44%(29/45)、42.42%(14/33);经ELISA检测的血清抗体IgG阳性率分别为66.67%(30/45)、63.63%(21/33)。结论腹泻树鼩对溶组织内阿米巴原虫的携带率较高,该原虫可能是导致树鼩腹泻的病原之一。特异性ELISA粪便抗原检出率高于形态学镜检法。日常饲养过程中应加强阿米巴病的监测和防治,防止肠道寄生虫病的传播。

关键词：树鼩溶组织内阿米巴形态学检测 ELISA检测

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树鼩脂肪转录组SNP位点发掘及其功能注释分析

树鼩脂肪转录组SNP位点发掘及其功能注释分析

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第十二届中国实验动物科学年会（2016.南宁）

作者：罕园园孙晓梅匡德宣陆彩霞仝品芬王文广李娜代解杰中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室

从正常笼养树鼩腹部的脂肪转录组数据开发SNP分子标记。检测了6只动物共计274278568条unigene(总长度43138417 bp)序列信息后,在262980条unigene(5.75%)中共发现SNP位点262980个,SNP发生频率为1/27bp,其中转换(transition)177562个,颠换(transversion)85509个。在所有变异类型中,A/G和C/T发生频率最高,分别达33.85%和33.66%。为进一步对得到的SNP所在基因功能进行分析,将包含SNP位点的262980条unigene通过参比序列进行注释,并对其进行GO分类、COG分类注释和代谢通路注释(KEGG pathway),结合已有研究,筛选到1187个可能脂肪转录组中的可能与脂肪形成和代谢有关的SNP标记。

关键词：树鼩转录组单核苷酸多态性(SNP)、功能注释脂肪形成

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树鼩脂肪转录组SNP位点发掘及其功能注释

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实验动物科学 2016年第3期33卷 13-19页

作者：罕园园孙晓梅匡德宣陆彩霞仝品芬王文广李娜余波代解杰中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心昆明650118 云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 云南省科学技术院昆明650118

从正常笼养树鼩腹部的脂肪转录组数据开发SNP分子标记。检测了6只动物共计274 278 568条unigene(总长度43 138 417 bp)序列信息后,在262 980条unigene(5.75%)中发现SNP位点263 071个,SNP发生频率为1/164 bp,其中转换(transition)177 562个,颠换(transversion)85 509个。在所有变异类型中,A/G和C/T发生频率最高,分别达33.85%和33.66%。将包含SNP位点的262 980条unigene通过参比序列进行注释,并对其进行GO分类、COG分类注释和代谢通路注释(KEGGpathway),结合已有研究,分别筛选到1 187个有GO注释、77个有COG注释和1 080条个有KEGG通路注释的脂肪转录组中的可能与脂肪形成和代谢有关的SNP标记。

关键词：树鼩转录组单核苷酸多态性功能注释

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树鼩小肠上皮细胞的体外分离培养与鉴定

树鼩小肠上皮细胞的体外分离培养与鉴定

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第十二届中国实验动物科学年会（2016.南宁）

作者：尹博文陈玲霞宋庆凯苗雨润李晓飞孙晓梅 LI Zhen-yu 中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室

目的从树鼩小肠分离小肠上皮细胞,探索分离培养方法和条件。为药物开发和病原感染机制研究提供体外细胞模型,并且为建立树鼩小肠上皮细胞系奠定基础。方法采用胶原酶Ⅺ和中性蛋白酶I及DTT联合消化树鼩小肠组织块,得到的细胞经完全培养... 详细信息

目的从树鼩小肠分离小肠上皮细胞,探索分离培养方法和条件。为药物开发和病原感染机制研究提供体外细胞模型,并且为建立树鼩小肠上皮细胞系奠定基础。方法采用胶原酶Ⅺ和中性蛋白酶I及DTT联合消化树鼩小肠组织块,得到的细胞经完全培养液培养,用相差显微镜观察细胞形态,通过MTT法测定细胞生长曲线,并采用细胞角蛋白荧光染色等方法鉴定细胞。结果经优化分离法得到的肠上皮隐窝细胞团在24h后贴壁,6d汇合成片,在显微镜下观察发现细胞团延辐射状向外长出铺路石样和多角状的细胞;第二代后,每隔2d可传代1次;细胞接种3d为对数生长期;细胞角蛋白18进行免疫荧光鉴定后确定为小肠上皮细胞。结论本实验成功地从树鼩小肠分离到了小肠上皮细胞,并且建立了树鼩小肠上皮细胞体外培养的方法。

关键词：树鼩小肠上皮细胞酶消化免疫荧光鉴定

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树鼩角膜内皮细胞体外原代培养方法的建立

树鼩角膜内皮细胞体外原代培养方法的建立

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第十二届中国实验动物科学年会（2016.南宁）

作者：苗雨润宋庆凯陈玲霞尹博文李晓飞代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室树鼩种子资源中心

目的建立树鼩角膜内皮细胞(corneal endothelial cells,CECs)体外分离、培养及纯化的稳定技术,为人类眼科角膜疾病提供新的实验材料。方法通过比较揭膜法、双酶消化法及揭膜-消化两步法,确定每种树鼩原代CECs取材方法的优劣性。分别使用DMEM/F12,M199,Ham's F12/M199三种培养液以确定树鼩CECs原代细胞最适培养液。使用TGF-β抑制剂、低血清培养法及梯度消化法来探讨树鼩CECs纯化的可行性。苏木精-伊红染色观察细胞形态,根据树鼩神经元烯醇化酶(NES)设计并筛选特异性引物,使用PCR方法检测细胞NES表达情况并用NES抗体进行细胞免疫荧光染色鉴定。结果揭膜法可以快速、有效得到高纯度的树鼩CECs细胞。Ham's F12/M199培养液是树鼩CECs的最适培养液。使用TGFβ抑制剂可以达到CECs的纯化目的。结论优化的树鼩CECs细胞培养纯化方法对树鼩CECs的体外培养更适宜,优化条件下分离培养的细胞符合CECs的一般特征。

关键词：树鼩角膜内皮细胞体外原代培养优化

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树鼩小肠上皮细胞的体外分离培养与鉴定

树鼩小肠上皮细胞的体外分离培养与鉴定

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第十二届中国实验动物科学年会

作者：尹博文陈玲霞宋庆凯苗雨润李晓飞孙晓梅中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的从树鼩小肠分离小肠上皮细胞,探索分离培养方法和条件。为药物开发和病原感染机制研究提供体外细胞模型,并且为建立树鼩小肠上皮细胞系奠定基础。方法采用胶原酶Ⅺ和中性蛋白酶Ⅰ及DTT联合消化树鼩小肠组织块,得到的细胞经完全培... 详细信息

目的从树鼩小肠分离小肠上皮细胞,探索分离培养方法和条件。为药物开发和病原感染机制研究提供体外细胞模型,并且为建立树鼩小肠上皮细胞系奠定基础。方法采用胶原酶Ⅺ和中性蛋白酶Ⅰ及DTT联合消化树鼩小肠组织块,得到的细胞经完全培养液培养,用相差显微镜观察细胞形态,通过MTr法测定细胞生长曲线,并采用细胞角蛋白荧光染色等方法鉴定细胞。结果经优化分离法得到的肠上皮隐窝细胞团在24h后贴壁,6d汇合成片,在显微镜下观察发现细胞团延辐射状向外长出铺路石样和多角状的细胞;第二代后,每隔2～3d可传代1次;细胞接种3～6d为对数生长期;细胞角蛋白18进行免疫荧光鉴定后确定为小肠上皮细胞。结论本实验成功地从树鼩小肠分离到了小肠上皮细胞,并且建立了树鼩小肠上皮细胞体外培养的方法。

关键词：树鼩小肠上皮细胞酶消化免疫荧光鉴定

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驯养繁殖树鼩主要消化腺的组织学观察

驯养繁殖树鼩主要消化腺的组织学观察

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第十五届中国西部实验动物管理与学术交流会

作者：匡德宣王文广孙晓梅黄晓云陆彩霞罕园园仝品芬代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的：了解树鼩主要消化腺的组织学结构特征,建立树鼩正常的消化腺组织学图谱. 方法：采用常规组织处理、制片、HE染色及显微镜技术对人工驯养繁殖仔一代树鼩腮腺、颌下腺、舌下腺、胰腺和肝脏进行了组织学观察. 结果：(1)腮腺为... 详细信息

目的：了解树鼩主要消化腺的组织学结构特征,建立树鼩正常的消化腺组织学图谱. 方法：采用常规组织处理、制片、HE染色及显微镜技术对人工驯养繁殖仔一代树鼩腮腺、颌下腺、舌下腺、胰腺和肝脏进行了组织学观察. 结果：(1)腮腺为纯浆液性腺泡,闰管明显,管壁由单层低立方形上皮细胞组成,官腔充满分泌物.(2)颌下腺为混合性腺体,以浆液性腺泡为主,分泌管较长.(3)舌下腺是以黏液性腺泡为主的混合腺,含有少量闰管.(4)肝脏表面为一薄层致密结缔组织被膜,肝实质为多个分界不明显的肝小叶,肝小叶中央为中央静脉.肝细胞呈多边形,核大而圆,位于细胞中央,多数为单核,少数为双核,细胞质呈红色,胞质内有空泡和小腔隙.汇管区小叶间动脉、小叶间静脉及小叶间胆管结构较为明显.(5)胰腺表面为一层疏松结缔组织被膜,胰腺实质由外分泌部和内分泌部组成.外分泌部包含腺泡和导管,腺泡由浆液性腺细胞组成,导管由闰管、小叶内导管、小叶间导管、叶间导管和胰管组成.内分泌部又称为胰岛,是一些大小不等的细胞团和细胞索,不规则地散布于外分泌部的腺泡之间,胞质染色较外分泌部浅. 结论：树鼩消化腺在组织形态学上接近于灵长类动物,可以为研究树鼩消化腺的功能和病变,以及建立人类相关疾病的动物模型提供组织学依据.

关键词：树鼩人工驯养消化腺组织形态学

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